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    血管內(nèi)皮生長因子在前列腺增生合并高血壓患者中的表達(dá)及意義

    2014-03-27 00:52:22唐玉分楊立軍胡曉雷龐書艦
    醫(yī)學(xué)綜述 2014年7期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞生長因子前列腺

    張 晉,唐玉分,李 珅,李 超,楊立軍,胡曉雷,龐書艦

    (石家莊市第一醫(yī)院泌尿外科,石家莊 050011)

    前列腺增生是男性泌尿系最常見的疾病之一,其發(fā)病率隨年齡增長而增高,隨著社會的老齡化,前列腺增生已成為老年醫(yī)學(xué)研究的重要課題,越來越多的研究表明前列腺增生與前列腺處新生血管形成有密切關(guān)系。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在前列腺增生患者中的表達(dá)有顯著升高[1-2]。原發(fā)性高血壓是和年齡相關(guān)的中老年多發(fā)性疾病,高血壓與VEGF關(guān)系密切,同時,男性高血壓患者發(fā)生前列腺增生的病例報道越來越多,但目前高血壓對前列腺增生的發(fā)生和疾病進(jìn)展、相關(guān)調(diào)節(jié)因素及其機(jī)制的研究鮮有報道。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)標(biāo)本 本研究標(biāo)本取自2009年1月至2010年12月在石家莊市第一醫(yī)院泌尿外科住院的前列腺增生患者的前列腺組織,患者共60例,其中單純性前列腺增生患者30例(前列腺增生組),前列腺增生合并高血壓患者30例(合并高血壓組)。高血壓符合WHO高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[3][收縮壓≥140 mm Hg和(或)舒張壓≥90 mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa],入選患者均排除同時患有糖尿病、腦血管意外、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病及其他有可能影響血管新生的疾病,患者均無術(shù)前服用α腎上腺能阻滯劑和5α還原酶抑制劑等抗前列腺增生的藥物治療史。分為單純前列腺增生組30例,年齡55~79(65.2±8.6)歲,前列腺增生合并高血壓組30例,年齡57~81(67.3±8.2)歲。兩組患者年齡、病情等具有可比性。

    1.2研究方法

    1.2.1主要試驗(yàn)方法和試劑 所用抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。試劑如下,試劑A:內(nèi)源性過氧化酶阻斷劑;試劑B:正常非免疫動物血清;試劑C:生物素標(biāo)記的第二抗體;試劑D:鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶;二氨基聯(lián)苯胺(3,3′-diaminobenzidine,DAB)液。VEGF的測定采用免疫組織化學(xué)染色S-P法(鏈霉卵白素-過氧化物酶連結(jié)法),主要過程如下:①石蠟切片脫蠟;②蒸餾水沖洗、磷酸鹽緩沖液浸泡5 min,采用微波加熱抗原修復(fù);③3% H2O2溫室孵育5~10 min,以清除內(nèi)源性過氧化物酶的活性,磷酸鹽緩沖液沖洗,2 min×3次;④5%~10%正常血清封閉,室溫孵育10 min,傾去血清,勿洗,加一抗VEGF/轉(zhuǎn)化生長因子β1,4 ℃過夜;⑤磷酸鹽緩沖液沖洗,2 min×3次;⑥滴加生物素標(biāo)記二抗工作液,37 ℃孵育10~20 min;⑦磷酸鹽緩沖液沖洗,2 min×3次;⑧滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37 ℃孵育10~20 min;⑨磷酸鹽緩沖液沖洗,2 min×3次;⑩顯色劑顯色;去離子水充分沖洗,復(fù)染,脫水透明,封片。

    1.2.2病理切片結(jié)果判定 細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色染色為陽性,未見或偶見陽性胞質(zhì)為(-),隨機(jī)選取視野內(nèi)的五個區(qū)域作總細(xì)胞計(jì)數(shù)及陽性細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)算陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比值的平均值即為陽性細(xì)胞率。陽性細(xì)胞率<10%為(+,即為弱陽性),陽性細(xì)胞率(10%~50%)為(++,即為中陽性),陽性細(xì)胞率>50%為(+++,即為強(qiáng)陽性)。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理,在前列腺增生患者前列腺組織中VEGF表達(dá)程度的比較采用秩和檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,VEGF在單純前列腺增生與前列腺增生合并高血壓組的標(biāo)本中均可見有表達(dá)(圖1),表達(dá)特征為間質(zhì)細(xì)胞染色,胞核、胞質(zhì)均染色,分泌腺上皮基底上皮著色淺。其中單純前列腺增生組VEGF染色較淺,數(shù)目較少,陽性率為60%,[(-)12例,(+)16例,(++)2例;前列腺增生合并高血壓組VEGF染色較深,數(shù)目較多,陽性率為86.67%(-)4例,(+)14例,(++)9例,(+++)3例]。通過比較,VEGF在前列腺增生合并高血壓組陽性表達(dá)率高于單純前列腺增生(86.67% vs 60%),差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(u=3.321,P<0.05)(表1)。

    1a 單純性前列腺增生(SP×250) 1b 前列腺增生合并高血壓(SP×250)

    圖1血管內(nèi)皮生長因子在兩組患者前列腺組織中的表達(dá)(單純前列腺增生組VEGF染色較淺,數(shù)目較少;前列腺增生合并高血壓組VEGF染色較深,數(shù)目較多)

    表1 VEGF在兩組前列腺增生患者的前列腺組織中的表達(dá)比較 (例)

    VEGF:血管內(nèi)皮生長因子

    3 討 論

    前列腺增生是老年男性常見的疾病之一,隨著年齡的增長,前列腺增生發(fā)病率也明顯增加,已嚴(yán)重影響老年男性健康。雖然前列腺增生的病因?qū)W迄今未完全闡明。但大量研究已表明前列腺增生的發(fā)生與前列腺的眾多生長因子有關(guān)[1]。前列腺依賴于雄激素誘導(dǎo),產(chǎn)生多種生長因子,以旁分泌、自分泌或內(nèi)在分泌的模式,刺激細(xì)胞生長,抑制細(xì)胞增殖或促進(jìn)細(xì)胞分化、惡化或死亡。作用于前列腺的各類生長因子與各自的特異性受體結(jié)合而發(fā)揮作用,調(diào)節(jié)前列腺細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。其中VEGF發(fā)揮了重要作用。

    對于血管內(nèi)皮細(xì)胞,VEGF是一種強(qiáng)烈的有絲分裂原,也是一種分泌性分子,以可溶性調(diào)節(jié)物的形式調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的生長和血管形成,對于血管生成過程是十分重要,對增殖性病變過程也具有重要的調(diào)節(jié)意義。Folkman[1]認(rèn)為,前列腺增生的發(fā)生有賴于新生的血管,而新生血管的形成與VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長因子及血管生成素密切相關(guān)[2],Harper等[4]對10例前列腺增生組織進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)組織標(biāo)本VEGF表達(dá)呈陽性,Jackson等[5]采用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),VEGF廣泛分布于前列腺增生組織的上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和血管壁及其周圍組織細(xì)胞。Levine等[6]的一份研究中顯示,VEGF在前列腺增生組織中有表達(dá),但前列腺增生組織中VEGF的表達(dá)限于基質(zhì)細(xì)胞,腺上皮細(xì)胞無明顯表達(dá)。Weingartner等[2]研究發(fā)現(xiàn),前列腺增生患者的尿液成分與正常對照組相比,有顯著增高的促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)尿液中的VEGF和堿性成纖維細(xì)胞生長因子也顯著升高,這說明VEGF與前列腺增生的發(fā)病可能有非常密切的關(guān)系,可能通過調(diào)節(jié)前列腺組織中血管新生和刺激前列腺基質(zhì)細(xì)胞增殖作用而促進(jìn)前列腺增生的發(fā)生、發(fā)展。

    世界正步入老齡社會,原發(fā)性高血壓也是和年齡相關(guān)的中老年多發(fā)性疾病。國內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)查資料顯示高血壓是前列腺增生的危險因素,高血壓患者的前列腺增生患病率明顯高于對照組[7],進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)舒張壓增高可能是前列腺增生的危險因素[8],長期高血壓尤其是高舒張壓、可能與良性前列腺增生的臨床進(jìn)展有關(guān)[9]。近年有文獻(xiàn)資料報道高血壓與前列腺增生所致的下尿路梗阻癥狀相關(guān)[10]。國外臨床資料對單純前列腺增生和前列腺增生合并高血壓的患者進(jìn)行了比較研究,發(fā)現(xiàn)與單純前列腺增生患者相比前列腺增生合并高血壓患者的國際前列腺癥狀評分顯著升高。有研究表明,高血壓患者的VEGF水平顯著高于正常人[11-12]。國內(nèi)有研究VEGF在前列腺間質(zhì)中的表達(dá)率,前列腺增生并發(fā)高血壓時顯著增高,同時發(fā)現(xiàn)前列腺間質(zhì)中VEGF表達(dá)率與前列腺容積及血尿的發(fā)生率有顯著的相關(guān)性。這說明高血壓可以促進(jìn)VEGF在前列腺組織中的表達(dá),同時VEGF對前列腺組織中的血管新生具有調(diào)控作用。本研究通過免疫組織化學(xué)的方法顯示VEGF在單純前列腺增生與前列腺增生合并高血壓組中均可見有表達(dá)。通過比較,VEGF在前列腺增生合并高血壓組陽性表達(dá)率高于單純前列腺增生,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,VEGF主要為間質(zhì)細(xì)胞染色,胞核、胞質(zhì)均染色,分泌腺上皮基底上皮著色淺。與先前報道的結(jié)果相一致;VEGF在前列腺增生合并高血壓組強(qiáng)陽性表達(dá)率也高于單純前列腺增生組,但未達(dá)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,可能與樣本量較小有關(guān)。

    總之,本實(shí)驗(yàn)顯示高血壓合并良性前列腺增生患者前列腺組織中VEGF蛋白表達(dá)增高,提示高血壓可能通過參與改變VEGF的表達(dá)而影響促進(jìn)前列腺增生的發(fā)生和臨床進(jìn)展。

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