嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子和基質(zhì)金屬蛋白酶9在鼻息肉中的表達(dá)

佘臘枝，魯海濤，謝 瓊

(荊州市中心醫(yī)院耳鼻喉科，湖北 荊州 434020)

當(dāng)鼻黏膜組織發(fā)生大面積損傷不能正常再生時(shí)往往引發(fā)組織異常重塑。鼻息肉是一類慢性炎癥引發(fā)的病癥，目前臨床主要依賴手術(shù)治療。鼻息肉的發(fā)病因素很多，鼻上皮細(xì)胞增生和細(xì)胞外基質(zhì)的沉淀都將導(dǎo)致鼻息肉的發(fā)生[1]。嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)是近幾年鼻息肉治療研究中的重點(diǎn)。嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)可通過受體介導(dǎo)作用強(qiáng)烈趨化于Eos，并促進(jìn)該細(xì)胞的募集和活化[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是在組織重塑過程中發(fā)揮巨大作用的一類蛋白水解酶，主要參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解。它可以通過降解基膜使血漿大分子進(jìn)入組織間質(zhì)，引發(fā)上皮增生、水腫和鼻息肉的發(fā)生。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2010年7月至2013年7月在荊州市中心醫(yī)院住院接受鼻息肉手術(shù)治療的患者50例作為觀察組，男32例、女18例，年齡26～58(42.5±2.3)歲。并選取35例由于鼻外傷、慢性鼻炎等原因接受鼻腔手術(shù)的患者作為對(duì)照組，男22例、女13例，年齡27～60(41.7±3.6)歲。所有入選患者手術(shù)治療前均無流感、病毒感染等疾病發(fā)生，近期未服用激素類和抗生素類藥物。兩組患者的性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2治療方法 所有患者均于手術(shù)前1日抽取清晨空腹靜脈血，經(jīng)離心后凍存?zhèn)溆?。術(shù)中分別取兩組患者鼻息肉組織和正常鼻下甲黏膜組織經(jīng)甲醛固定后制作成為石蠟切片備用。

1.2.1Eos活性檢測(cè) Eos活化時(shí)大量釋放嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(eosinophil cationic protein，ECP)在內(nèi)的多種毒性蛋白。因而借助Pharmacia CAP系統(tǒng)檢測(cè)研究者血清中ECP蛋白的水平，借以反映Eos的活化程度。

1.2.2SP法檢測(cè)MMP-9水平和Eotaxin陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù) 應(yīng)用SP免疫組織化學(xué)試劑盒完成。石蠟切片于60 ℃烘箱中加熱 2～3 h后將其脫蠟、水化，再用二甲苯和逐級(jí)稀釋乙醇分別浸泡后與標(biāo)本修復(fù)抗原共孵育。之后依次加入過氧化酶阻斷劑、動(dòng)物血清(Eotaxin陽(yáng)性檢測(cè)應(yīng)用山羊血清，MMP-9檢測(cè)應(yīng)用兔血清)后室溫孵育。再用PBS洗凈后加入一抗(抗Eotaxin抗體和MMP-9抗體)孵育后過夜。于第2日除去一抗，再依次加入二抗、三抗和二氨基聯(lián)苯胺溶液孵育。最后以蘇木精復(fù)染重新脫水制片。高倍顯微鏡下隨機(jī)取腺體和血管內(nèi)皮細(xì)胞各10個(gè)視野計(jì)數(shù)并取Eotaxin陽(yáng)性細(xì)胞平均值。經(jīng)細(xì)胞圖像分析測(cè)定腺體及血管灰度，并取平均值。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清樣本中EPC水平的比較 觀察組患者中血清EPC水平為(17.32±4.62) μg/L，顯著高于對(duì)照組的(3.28±1.22) μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.589,P<

0.01)。

2.2兩組Eotaxin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的比較 經(jīng)免疫組織化學(xué)SP染色結(jié)果顯示：觀察組患者鼻黏膜組織和血管、腺體等組織中可見大量染色后呈棕黃色的Eotaxin陽(yáng)性細(xì)胞(圖1)，而對(duì)照組患者組織經(jīng)染色后未見明顯棕黃色陽(yáng)性顆粒(圖2)。觀察組中Eotaxin陽(yáng)性細(xì)胞為(47.25±13.18)個(gè)，顯著高于對(duì)照組的(12.48±10.12)個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=13.124,P<0.01)。

圖1Eotaxin陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃染色(SP染色，×400)

圖2組織細(xì)胞染色未見明顯棕黃色(SP染色，×400)

2.3兩組患者腺體和血管組織中MMP-9的表達(dá)灰度值的比較 經(jīng)免疫組組織化學(xué)SP染色結(jié)果顯示: MMP-9在非鼻息肉的正常損傷鼻內(nèi)組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá)，而在觀察組患者中MMP-9均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，兩組平均灰度值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01) (表1)。

表1 兩組患者腺體和血管組織中MMP-9的表達(dá)灰度值的比較

觀察組：接受鼻息肉手術(shù)治療的患者；對(duì)照組：由于鼻外傷、慢性鼻炎等接受鼻腔手術(shù)的患者

3 討 論

鼻息肉主要是由于重大創(chuàng)傷造成基膜的破裂，鼻內(nèi)組織難以正常修復(fù)而發(fā)生的一類鼻內(nèi)組織的異常重塑[3]。有研究表明，Eos的活化與鼻炎、鼻息肉的發(fā)病有重大相關(guān)。Eos是一種胞質(zhì)內(nèi)富含嗜酸性顆粒的白細(xì)胞。當(dāng)鼻內(nèi)組織受到創(chuàng)傷損害和刺激時(shí)，Eos可以在促炎細(xì)胞因子的作用下大量聚集并破碎，向周圍組織中大量釋放嗜酸性顆粒和毒性蛋白，增加鼻黏膜血管的通透性[4]。血管通透性的增大可引起血漿滲出，造成組織水腫和細(xì)胞外基質(zhì)的增生，最終導(dǎo)致鼻息肉的發(fā)生[5]。在鼻息肉組織中活化的Eos釋放大量的EPC。EPC等毒性蛋白可以直接損害鼻黏膜固有層的原有結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致上皮組織的損傷和脫落。因而，Eos的活化在鼻息肉的形成過程中發(fā)揮巨大作用。

另外，在發(fā)生鼻息肉的組織中Eotaxin和MMP-9的表達(dá)量異常升高，提示這兩者可能與鼻息肉的發(fā)生密切相關(guān)[6]。Eotaxin是一種最早在豚鼠肺組織中被發(fā)現(xiàn)的可特異性選擇Eos的趨化因子[7]。當(dāng)鼻內(nèi)膜損傷時(shí)，Eotaxin主要由炎性細(xì)胞產(chǎn)生，有研究表明Eotaxin可促進(jìn)Eos在損傷鼻內(nèi)組織中聚集，而對(duì)其他類型的白細(xì)胞并未表現(xiàn)出明顯趨化作用[8]。Eos聚集分泌的毒性蛋白影響上皮組織對(duì)Na+和Cl-的吸收，從而引起Na+在組織中沉積促使組織細(xì)胞對(duì)水分的大量吸收引發(fā)鼻息肉的行成。

MMP-9是一類細(xì)胞外基質(zhì)水解酶，可強(qiáng)特異性降解細(xì)胞基質(zhì)明膠成分[9]。當(dāng)前研究表明MMP-9的表達(dá)與腫瘤較差預(yù)后相關(guān)，分析原因可能是MMP-9降解胞外基質(zhì)而造成腫瘤轉(zhuǎn)移。嚴(yán)重哮喘患者肺泡中MMP-9的表達(dá)量顯著升高，提示它可能通過影響呼吸道重構(gòu)而促進(jìn)哮喘的發(fā)生[10]。本研究中觀察組患者M(jìn)MP-9的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，提示MMP-9也參與鼻息肉的形成和發(fā)展。在鼻息肉組織中高表達(dá)的MMP-9通過降解細(xì)胞外基質(zhì)成分造成基膜破壞，內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)改變等，從而促進(jìn)水腫范圍的擴(kuò)大，大分子物質(zhì)進(jìn)入血管，引發(fā)鼻內(nèi)水腫和組織增生。

本研究結(jié)果顯示，觀察組患者中的Eotaxin和MMP-9表達(dá)量顯著升高，并且與Eos活化水平呈正相關(guān)，提示Eotaxin和MMP-9均參與Eos活化或聚集，從而促進(jìn)鼻息肉的發(fā)生。因此，局部控制鼻內(nèi)損傷后炎性反應(yīng)發(fā)生，降低Eotaxin和MMP-9的釋放量，可以在很大程度上干擾Eos的活化和聚集，減少鼻息肉的發(fā)病。

[1] 馬曉峰,柴麗,陳冬,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-9及嗜酸性粒細(xì)胞在鼻息肉形成中的作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2011,27(5):927.

[2] 楊影,羅英,李春林,等.CC趨化因子受體6在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉中的作用[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2012,32(1):75.

[3] 康健,曲亞榮,陳冬,等.缺氧誘導(dǎo)因子-1α及嗜酸粒細(xì)胞趨化因子在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2010,13(27):3043-3045.

[4] 陳祖堯,余玲,梁灼萍,等.TNF-α和MMP-9在鼻息肉嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)過程中的作用[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2011,25(2):54-57,60.

[5] 劉新彥,霍占江,牛敬蓮,等.曲安奈德鼻噴霧劑對(duì)鼻息肉組織中嗜酸性粒細(xì)胞及其趨化因子-2表達(dá)的影響[J].實(shí)用藥物與臨床,2013,16(5):366-368.

[6] 薛剛,呂洋,吳靖芳,等.人鼻息肉組織中MMP-9及TIMP-1表達(dá)的變化[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,28(9):986-987.

[7] 顧兆偉,曹志偉,王韞秀.Eotaxin-3在鼻息肉中的表達(dá)及作用[J].中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志,2012,18(6):472-474.

[8] 劉新彥,霍占江,牛敬蓮,等.白細(xì)胞介素17和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子2在人鼻息肉組織中的表達(dá)及相關(guān)性[J].華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志,2012,26(5):442-444.

[9] Chen Z,Yu L,Liang Z,etal.Effect of TNF-alpha and MMP-9 in the infiltration of eosinophil granulocyte in nasal polyps[J].Lin Chung Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi,2011,25(2):54-57,60.

[10] Eyibilen A,Cayli S,Aladag I,etal.Distribution of matrix metalloproteinases MMP-1,MMP-2,MMP-8 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-2 in nasal polyposis and chronic rhinosinusitis[J].Histol Histopathol,2011,26(5):615-621.