陜北棗品種群遺傳結(jié)構(gòu)的SSR分析

殷 曉，張春梅，李新崗，黃 建，王長(zhǎng)柱，練春蘭

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) a 林學(xué)院 陜西省林業(yè)綜合重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，b 園藝學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2 東京大學(xué) 亞洲自然環(huán)境科學(xué)中心，日本 東京188-0002)

棗(ZiziphusjujubaMill.)是原產(chǎn)于我國(guó)的特有果樹(shù)，栽培歷史悠久，約有900個(gè)品種[1-2]。長(zhǎng)期的栽培與馴化，使其變異類(lèi)型極其豐富，已形成區(qū)域性品種和品種群[2-3]。晉陜黃河峽谷一帶是我國(guó)栽培棗的原產(chǎn)地和栽培中心[2-4]，也是我國(guó)優(yōu)良制干棗的主要栽培區(qū)[2,5]，一直保存著栽培棗的很多原生類(lèi)型，以及酸棗到棗的中間過(guò)渡類(lèi)型[2,4]。在我國(guó)棗的起源地和栽培中心，研究棗的遺傳結(jié)構(gòu)對(duì)于探明我國(guó)棗品種群的形成和發(fā)展具有重要意義。

關(guān)于棗分子水平的研究，過(guò)去主要采用RAPD[6-17]、AFLP[14-15,18-27]、SRAP[6,19,28]、ISSR[29-31]等技術(shù)探討了棗和酸棗的分類(lèi)地位[6-7,10,12,16,28]、品種鑒定[13,15,17-20]、種質(zhì)的親緣關(guān)系[7-9,16,18,23-26,28,30]、親本鑒定[21-22]、遺傳圖譜[4,28]和遺傳多樣性[11,19,29,31]等。隨著分子技術(shù)的發(fā)展，由于SSR標(biāo)記具有多態(tài)性高、重復(fù)性好、共顯性遺傳、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[32]，在很大程度上替代了傳統(tǒng)的酶標(biāo)記以及RAPD、AFLP等方法，已廣泛應(yīng)用于遺傳結(jié)構(gòu)和種質(zhì)鑒定研究中[33-35]。近年來(lái)，有學(xué)者利用SSR標(biāo)記構(gòu)建了棗指紋圖譜[36]并進(jìn)行了親本鑒定[37]，但利用SSR標(biāo)記對(duì)棗品種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究尚未見(jiàn)報(bào)道。品種群(Cultivar group)是親緣關(guān)系相近的一類(lèi)品種的集合[1]。一般認(rèn)為，棗由酸棗演化而來(lái)[2,4]，在同一演化路線上的品種遺傳背景比較一致，分析品種間的遺傳關(guān)系，找出基本品種，以此劃分品種群，對(duì)于指導(dǎo)棗資源利用和育種實(shí)踐具有重要意義[13,20]。

為進(jìn)一步闡明棗的遺傳結(jié)構(gòu)與品種群分化，本研究針對(duì)我國(guó)栽培棗的原產(chǎn)地和栽培中心——陜北棗區(qū)，選取4個(gè)區(qū)域(縣)8個(gè)品種群54份棗種質(zhì)為研究對(duì)象，利用SSR分子標(biāo)記研究了棗在起源地的遺傳結(jié)構(gòu)與親緣關(guān)系，以期揭示棗品種群的分化情況，為棗資源利用和分子輔助育種提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

在陜北黃河峽谷由南向北選取延川、清澗、米脂和佳縣4個(gè)地理區(qū)域(縣)，采集陜北原產(chǎn)的團(tuán)棗、木棗、牙棗、脆棗、疙瘩棗、狗頭棗、腰腰棗和辣節(jié)節(jié)棗等8個(gè)棗品種群的54份樣品(表1)，樣樹(shù)樹(shù)齡40年以上，間隔距離500 m以上，并進(jìn)行GPS定位。參照《中國(guó)果樹(shù)志·棗卷》[2]和《中國(guó)棗種質(zhì)資源》[1]，記錄其形態(tài)特征和生物學(xué)特性。2012-06(花期)采集棗葉片樣品，硅膠干燥后于室溫密封保存[38]，葉片用于DNA提取。

1.2 棗基因組DNA的提取

用改良CTAB法[39]提取棗基因組DNA。利用QIAGEN TissueLyser Ⅱ高通量組織研磨儀(德國(guó))破碎葉片，60 ℃溫浴30 min，先用氯仿/異戊醇(體積比24∶1)抽提，再用等體積異丙醇抽提，用預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)80%乙醇沉淀DNA，然后用滅菌超純水過(guò)夜溶解。樣品經(jīng)NanoVue Plus超微量分光光度計(jì)(美國(guó))檢測(cè)后保存于-30 ℃冰箱待用。

表1 陜北原產(chǎn)8個(gè)棗品種群的樣品來(lái)源與用途

1.3 棗DNA的PCR擴(kuò)增及毛細(xì)管電泳檢測(cè)

選取7個(gè)高多態(tài)性棗SSR引物(BFU0308、BFU0377、BFU0561、BFU0574、BFU1157[36]和自主開(kāi)發(fā)的Zjuju001和Zjuju021(GenBank序列號(hào)分別為KC117400和KC117409))進(jìn)行PCR。PCR反應(yīng)體系為10 μL，內(nèi)含20～30 ng基因組DNA，2×QIAGEN Multiplex PCR Master Mix(德國(guó))5 μL，反向引物和帶熒光標(biāo)記的正向引物分別為3.2和0.8 pmol。按照QIAGEN Multiplex PCR Kit試劑盒(德國(guó))的說(shuō)明，PCR反應(yīng)程序如下：95 ℃預(yù)變性15 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 90 s，72 ℃ 60 s，30個(gè)循環(huán)；60 ℃ 30 min。擴(kuò)增產(chǎn)物由東京大學(xué)森林分子生態(tài)學(xué)研究室ABI 3130XL測(cè)序儀(美國(guó))采用毛細(xì)管電泳檢測(cè)，用GeneMapper 4.0軟件記錄和分析原始數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

利用GenAlEx 6.5軟件分析供試棗的遺傳多樣性[40]，計(jì)算稀有等位基因數(shù)(Nr)、等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、觀測(cè)雜合度(Ho)、期望雜合度(He)、Shannon’s信息指數(shù)(I)、固定系數(shù)(F)、近交系數(shù)(Fis，F(xiàn)it，F(xiàn)st)、基因流(Nm)和Nei’s遺傳距離(D)等參數(shù)。

根據(jù)地理區(qū)域(縣)與品種群間的Nei’s遺傳距離，分別用NTSYSpc-2.10軟件[41]中的類(lèi)平均聚類(lèi)法(UPGMA)繪制樹(shù)狀圖，分析地理區(qū)域(縣)與品種群間的分化程度。

原始數(shù)據(jù)經(jīng)Flexibin軟件[42]轉(zhuǎn)化為0/1矩陣后，利用NTSYS軟件計(jì)算種間Nei’s遺傳距離，再用MEGA 5.1軟件[43]的鄰近距離法(NJ)構(gòu)建親緣關(guān)系圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 陜北棗種質(zhì)的遺傳多樣性

經(jīng)檢測(cè)，用7對(duì)引物從陜北54份棗種質(zhì)中共獲得42個(gè)等位基因，其中引物BFU0308擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)最多(10個(gè))，BFU0561擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)最少(3個(gè))，平均每個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)為6。

由表2可知，按地理區(qū)域(縣)劃分，從延川、清澗、米脂和佳縣每個(gè)區(qū)域的棗種質(zhì)中分別可觀察到6，1，1和4個(gè)稀有等位基因。有效等位基因數(shù)(Ne)為2.464～3.479；Shannon’s信息指數(shù)(I)為1.036～1.336；期望雜合度(He)為0.589～0.694，平均觀測(cè)雜合度(0.909)大于平均期望雜合度(0.634)；固定指數(shù)(F)為-0.587～-0.253。

表2 基于地理區(qū)域的陜北棗種質(zhì)的遺傳多樣性

由表3可以看出，按品種群劃分，團(tuán)棗、木棗、狗頭棗和辣節(jié)節(jié)棗每個(gè)品種群內(nèi)分別可觀察到3，2，1和4個(gè)稀有等位基因。各品種棗的有效等位基因數(shù)(Ne)為1.849～3.496；Shannon’s信息指數(shù)(I)為0.567～1.284；期望雜合度(He)為 0.380～0.706，平均觀測(cè)雜合度(0.922)大于平均期望雜合度(0.555)；固定指數(shù)(F)為-1.000～-0.352。其中，狗頭棗品種群的Ne、He和I指標(biāo)均最小，說(shuō)明其遺傳多樣性較低，可能與其栽培地域狹窄(僅在延川)、變異類(lèi)型少有關(guān)。

表3 基于品種群的陜北棗種質(zhì)的遺傳多樣性

2.2 陜北棗種質(zhì)的遺傳分化

由分子方差檢驗(yàn)(AMOVA)檢驗(yàn)結(jié)果(表4)可知，地理區(qū)域(縣)內(nèi)變異(97%)和品種群內(nèi)變異(91%，88%)均遠(yuǎn)大于群間分化(3%，9%，12%)；品種群內(nèi)變異(91%，88%)小于地理區(qū)域(縣)內(nèi)變異(97%)。地理區(qū)域(縣)與品種群的Fis和Fit值均為負(fù)值；品種群的Fis值(-0.514，-0.522)小于地理種群(-0.387)，F(xiàn)it值(-0.308，-0.268)大于地理區(qū)域(縣)(-0.328)。品種群Fst值(0.136，0.167)大于地理區(qū)域(縣)(0.042)。品種群間平均基因流(1.584，1.250)均小于地理區(qū)域間平均基因流(5.653)。

表4 陜北棗種質(zhì)群體分化的AMOVA檢驗(yàn)結(jié)果

圖1為4個(gè)地理區(qū)域(縣)棗種質(zhì)的Nei’s遺傳距離UPGMA聚類(lèi)圖。由圖1可知，在遺傳距離為0.13處4個(gè)地理區(qū)域(縣)種質(zhì)被劃分為2個(gè)地理群。無(wú)定河(黃河分支)上游的清澗和米脂棗種質(zhì)遺傳距離最近(0.05)，首先聚為一支，然后在遺傳距離約為0.09處與佳縣聚為第Ⅰ類(lèi)；第Ⅱ類(lèi)只有延川一個(gè)區(qū)域，與其他區(qū)域親緣關(guān)系較遠(yuǎn), 這與該組中含有狗頭棗品種群有關(guān)(圖2)。

8個(gè)棗品種群的UPGMA聚類(lèi)結(jié)果如圖2所示。由圖2可以看出，在遺傳距離為0.99處8個(gè)棗品種群被分成2個(gè)類(lèi)群。第Ⅰ類(lèi)群為團(tuán)棗-木棗類(lèi)群，包括團(tuán)棗、木棗、疙瘩棗、腰腰棗、牙棗和脆棗5個(gè)品種群。第Ⅰ類(lèi)群又可分為3個(gè)亞類(lèi)，其中親緣關(guān)系最近的是木棗品種群與疙瘩棗品種群，其相聚后再與腰腰棗品種群聚在一起，然后又與牙棗聚成一支，形成木棗品種亞類(lèi)(第1亞類(lèi))；第1亞類(lèi)與第2亞類(lèi)團(tuán)棗品種群親緣關(guān)系較近；第3亞類(lèi)為脆棗品種群，單獨(dú)為一支，與第1亞類(lèi)和第2亞類(lèi)親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。第Ⅱ類(lèi)群為狗頭棗品種亞群，包括延川狗頭棗和辣節(jié)節(jié)棗品種群。

圖1 基于Nei’s遺傳距離的陜北棗種質(zhì)地理區(qū)域聚類(lèi)圖

2.3 陜北棗種質(zhì)的聚類(lèi)分析

由54份陜北棗種質(zhì)的NJ聚類(lèi)樹(shù)(圖3)可以看出，供試材料被分為2大類(lèi)群。第Ⅰ類(lèi)群共45份種質(zhì)，又可分為2個(gè)亞群，一支包括延川-清澗-米脂團(tuán)棗品種群(5個(gè)延川團(tuán)棗、3個(gè)清澗團(tuán)棗和2個(gè)米脂團(tuán)棗)、佳縣團(tuán)棗品種群(JXTZ03，JXTZ04和JXTZ05)、木棗品種群(9個(gè)佳縣木棗、5個(gè)延川木棗、3個(gè)清澗木棗和2個(gè)米脂木棗)、疙瘩棗品種群(YCGD14和JXGD18)、脆棗品種群(YCCZ12和JXCZ17)、牙棗品種群(MZYZ07，JXYZ15和JXYZ16)和腰腰棗品種群(JXYY19和JXYY20)；另一支包括過(guò)渡類(lèi)型的泥河溝酸團(tuán)棗(JXTZ01)和小會(huì)酸團(tuán)棗(JXTZ02)以及米脂木棗2號(hào)(MZMZ04)和狗牙棗1號(hào)(MZYZ06)。第Ⅱ類(lèi)群共9份種質(zhì)，包括全部的延川狗頭棗品種群(5個(gè))、延川脆棗(YCCZ13)和吊牙棗(YCYZ11)、清澗團(tuán)棗4號(hào)(QJTZ04)以及辣節(jié)節(jié)棗(YCLJ20)。其中，除了清澗團(tuán)棗4號(hào)(QJTZ04)外，延川、清澗和米脂的團(tuán)棗幾乎都聚在一起；佳縣棗種質(zhì)全部在第Ⅰ類(lèi)群，且各品種群親緣關(guān)系很近；狗頭棗品種群與其他棗品種群親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

圖3 基于Nei’s遺傳距離的陜北54份棗種質(zhì)親緣關(guān)系聚類(lèi)圖品種編號(hào)同表1

3 討 論

3.1 棗的遺傳多樣性

遺傳多樣性是物種遺傳潛力和應(yīng)對(duì)環(huán)境變化能力的重要指標(biāo)，遺傳多樣性喪失常常導(dǎo)致物種的適合度下降[44]。平均期望雜合度受取樣的影響較小，因此常用它來(lái)度量群體的遺傳多樣性，其高低可反映群體的遺傳一致性程度[45]。本研究中各地理區(qū)域樣本的期望雜合度在0.589～0.694，平均期望雜合度為0.634，表明陜北棗在長(zhǎng)期馴化與特殊生態(tài)環(huán)境下發(fā)生了中度雜合；其平均Shannon’s信息指數(shù)為1.141，說(shuō)明所分析的棗品種群具有高遺傳多樣性與高變異性；固定系數(shù)與近交系數(shù)均為負(fù)值，表明供試品種在陜北棗區(qū)很少發(fā)生近交[46]。閆超等[47]對(duì)280個(gè)棗品種的結(jié)實(shí)特性研究后發(fā)現(xiàn)，棗樹(shù)結(jié)實(shí)多種多樣，且供試品種異花授粉均可結(jié)實(shí)，結(jié)實(shí)率顯著高于自花授粉；其中，陜北品種(牙棗和狗頭棗)均為異花授粉，且自花不育。這更好地解釋了棗具有較高的雜合性。

本研究中，4個(gè)地理區(qū)域8個(gè)棗品種群均觀察到了不同數(shù)量的稀有等位基因，其中可能存在與優(yōu)良性狀相關(guān)的遺傳變異和獨(dú)特基因型。佳縣棗品種的Ne、He和I均最小，而延川最大，說(shuō)明延川棗種質(zhì)遺傳多樣性最高，這與延川包含與其他品種群親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的狗頭棗有關(guān)。佳縣棗種質(zhì)遺傳多樣性最低，其原因一方面可能是佳縣多為木棗品種群，而木棗品種群內(nèi)多樣性相對(duì)于不同品種群間多樣性小；另一方面，佳縣是最具代表性的栽培棗原產(chǎn)地，這里保存著原始品種類(lèi)型[2-4]，表型差異明顯，但現(xiàn)存的千年古棗樹(shù)(如JXMZ12，果實(shí)圓型，果皮黑紅，風(fēng)味偏酸)與其分化的木棗(如JXMZ11，果實(shí)錐型，風(fēng)味偏酸；JXMZ07，早熟；JXMZ08，抗裂；JXMZ09，晚熟)親緣關(guān)系很近，說(shuō)明原生木棗品種群的遺傳變異不大。

3.2 地理區(qū)域與品種群的遺傳結(jié)構(gòu)

遺傳結(jié)構(gòu)主要通過(guò)物種種群內(nèi)和種群間的遺傳分化來(lái)體現(xiàn)。遺傳分化系數(shù)是反映各亞群間遺傳分化的重要指標(biāo)[45]。本研究中，品種地理區(qū)域間Fst為 0.042，說(shuō)明4個(gè)區(qū)域間基本不存在遺傳分化；而7個(gè)棗品種群和4個(gè)棗品種群間的Fst分別為0.136和0.167，說(shuō)明品種群間有中度到高度分化。AMOVA結(jié)果也表明，地理區(qū)域內(nèi)與品種群內(nèi)變異均遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于區(qū)域間和品種群間分化，但品種群內(nèi)部變異較地理區(qū)域內(nèi)變異小。這與棗品種廣泛的基因交流(如品種混植)有關(guān)，使其均質(zhì)化[48]；也可能是由于資源一致性生境造成的[2]。這種現(xiàn)象在遠(yuǎn)交的木本植物中比較普遍，如油橄欖[33]、葡萄[34]，其遺傳變異主要存在于居群內(nèi)。本研究聚類(lèi)結(jié)果表明，棗品種的遺傳相似性與地理區(qū)域無(wú)明顯關(guān)系，這也是地理區(qū)域間基因流較高的一個(gè)證據(jù)。

本研究中，品種群間平均基因流(7品種群和4品種群Nm分別為1.584和1.250)較小，這很好地印證了品種群間的中高度分化，各品種群在果實(shí)形狀、大小、品質(zhì)、豐產(chǎn)性、耐貯性和抗裂性等重要農(nóng)藝性狀上存在很大差異，如脆棗和狗頭棗多為大果形，牙棗為小果形；脆棗和牙棗雖品質(zhì)明顯優(yōu)于團(tuán)棗和木棗，但耐貯性明顯低于團(tuán)棗和木棗；脆棗皮薄肉脆，抗裂性差、裂果嚴(yán)重，而牙棗抗裂性強(qiáng)；脆棗為鮮食品種，其他多為鮮食、制干兼用品種。品種群UPGMA聚類(lèi)結(jié)果表明，狗頭棗品種群與其他品種群，特別是木棗品種群的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。前人對(duì)狗頭棗和早熟木棗的染色體核型進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，狗頭棗核型為2n=2x=24=10m+10sm+4st，不對(duì)稱(chēng)性系數(shù)高達(dá) 64.54%；早熟木棗核型為2n=2x=24=12m+12sm，說(shuō)明佳縣的早熟木棗更原始[49-50]。

3.3 棗種質(zhì)的遺傳關(guān)系

棗種質(zhì)NJ聚類(lèi)結(jié)果表明，疙瘩棗、牙棗、腰腰棗與木棗品種群的親緣關(guān)系很近，極有可能是從原始品種木棗中產(chǎn)生的不同性狀變異株系形成的，如第Ⅰ類(lèi)群中木條棗(YCMZ08，延川眼岔寺)、木疙瘩棗(YCGD14，劉高山村，晚熟，果實(shí)方形，果皮黑紅)與抗裂木棗(QJMZ05，馬牙棗，抗裂)遺傳距離幾乎為0，而果形有差異，又與長(zhǎng)腰腰棗(即驢奶頭棗(JXYY20)，果實(shí)大，長(zhǎng)卵形，品質(zhì)中上等，質(zhì)地較致密，制干，抗裂果)聚在一起，品質(zhì)口感不同，但都不易裂果；螅鎮(zhèn)抗裂木棗(JXMZ14，果實(shí)小，兼用，抗裂果)與牛奶脆棗(YCCZ12，果實(shí)大，品質(zhì)上等，質(zhì)地致密細(xì)脆，鮮食，易裂果)果實(shí)品質(zhì)與抗裂性不同，但遺傳相似性極高。

棗因基因突變和自然雜交等產(chǎn)生了很多變異類(lèi)型，然后通過(guò)自然選擇和人為選擇等因素逐漸形成區(qū)域性棗品種群，這為良種優(yōu)選奠定了基礎(chǔ)。如與其他團(tuán)棗距離較遠(yuǎn)的沙團(tuán)棗(JXTZ04)，平均單果質(zhì)量13.0 g，品質(zhì)上等，耐貯藏，豐產(chǎn)性高，抗裂果，是鮮食品種中的優(yōu)良種質(zhì)；狗頭棗屬兼用中晚熟大果型品種，品質(zhì)上等，耐貯藏，豐產(chǎn)性高，不抗裂果，都聚在第Ⅱ類(lèi)群，但延川莊頭的狗頭棗3號(hào)(YCGT17)與其他4個(gè)狗頭棗親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，其原因還有待進(jìn)一步比較研究。另外，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)同物異名現(xiàn)象，如第Ⅰ類(lèi)群中狗牙棗1號(hào)(MZYZ06，卯疙瘩村，果形小)與米脂木棗2號(hào)(MZMZ04，高家渠村，果形小)遺傳距離為0，且表型差異??；過(guò)渡類(lèi)型泥河溝酸團(tuán)棗(JXTZ01，泥河溝)與小會(huì)酸團(tuán)棗(JXTZ02，小會(huì)坪)，均為喬木型酸棗到棗的過(guò)渡類(lèi)型，果型、枝、葉與栽培棗相似，果實(shí)風(fēng)味偏酸，核大；第Ⅱ類(lèi)群中，吊牙棗(YCYZ11)與脆棗(YCCZ13)的果實(shí)均脆甜，性狀比較相近。

同一區(qū)域的棗種質(zhì)并沒(méi)有聚在一起，而是按照品種群聚類(lèi)。棗品種間同時(shí)存在同源同型(表型相似，親緣關(guān)系近)、同源異型(表型不同，親緣關(guān)系近)與異源同型(表型相似，親緣關(guān)系遠(yuǎn))，說(shuō)明棗品種的演化有多條路線，同一演化路線上的品種遺傳背景比較一致，不同演化路線上的品種也會(huì)出現(xiàn)相似的表型特征?；ǚ坌螒B(tài)[51]、同工酶[52]和RAPD[8]研究也證明了這一點(diǎn)。由于本研究所用標(biāo)記及部分群體內(nèi)供試樣品較少，為探究中國(guó)棗品種群的遺傳結(jié)構(gòu)，還有待于大范圍、跨區(qū)域采樣，并將SSR標(biāo)記與更先進(jìn)的葉綠體基因測(cè)序技術(shù)結(jié)合起來(lái)進(jìn)行研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉孟軍,汪 民.中國(guó)棗種質(zhì)資源 [M].北京:中國(guó)林業(yè)出版社,2009:59-147.

Liu M J,Wang M.Germplasm resources of Chinese jujube [M].Beijing:China Forestry Publishing House,2009:59-147.(in Chinese)

[2] 曲澤洲,王永蕙.中國(guó)果樹(shù)志·棗卷 [M].北京: 中國(guó)林業(yè)出版社,1993:1-65.

Qu Z Z,Wang Y H.China fruit’s monograph:Chinese jujube volume [M].Beijing:China Forestry Publishing House,1993:1-65.(in Chinese)

[3] 曲澤洲.我國(guó)古代的棗樹(shù)栽培 [J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1963,2(2):1-18.

Qu Z Z.Ancient cultivation of Chinese jujube in China [J].Journal of Hebei Agricultural University,1963,2(2):1-18.(in Chinese)

[4] 曲澤洲,王永蕙,周吉柱,等.關(guān)于棗樹(shù)的起源問(wèn)題：再談酸棗的演變和棗樹(shù)的起源問(wèn)題 [J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1987,10(Suppl.):1-9.

Qu Z Z,Wang Y H,Zhou J Z,et al.Discussion on the origin of Chinese jujube [J].Journal of Hebei Agricultural University,1987,10(Suppl.):1-9.(in Chinese)

[5] 李新崗,黃 建,高文海.我國(guó)制干棗優(yōu)生區(qū)研究 [J].果樹(shù)學(xué)報(bào),2005,22(6):620-625.

Li X G,Huang J,Gao W H.A study on high-quality production region of dry Chinese jujube in China [J].Journal of Fruit Science,2005,22(6):620-625.(in Chinese)

[6] 李 莉.RAPD及SRAP標(biāo)記在中國(guó)棗屬植物系統(tǒng)分類(lèi)學(xué)中的應(yīng)用研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

Li L.Study on systematic taxonomy of Chinese Ziziphus by RAPD and SRAP markers [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2007.(in Chinese)

[7] 李 莉,彭建營(yíng),白瑞霞.中國(guó)棗屬植物親緣關(guān)系的RAPD分析 [J].園藝學(xué)報(bào),2009,36(4):475-480.

Li L,Peng J Y,Bai R X.Studies on the phylogenetic relationships of Chinese Ziziphus by RAPD technique [J].Acta Horticulturae Sinicia,2009,36(4):475-480.(in Chinese)

[8] 李瑞環(huán),李新崗,黃 建,等.棗和酸棗親緣關(guān)系的RAPD分析 [J].果樹(shù)學(xué)報(bào),2012,29(3):366-373.

Li R H,Li X G,Huang J,et al.Genetic relationship of Chinese jujube (Ziziphusjujuba) and sour jujube (Z.spinosa) based on RAPD markers [J].Journal of Fruit Science,2012,29(3):366-373.(in Chinese)

[9] 劉冬芝,時(shí) 燕,趙登超,等.大酸棗與酸棗、棗親緣關(guān)系的RAPD分析 [J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,19(4):160-164.

Liu D Z,Shi Y,Zhao D C,et al.RAPD analysis on relationship of Dasuanzao,ZiziphusspinosaandZiziphusjujuba[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2010,19(4):160-164.(in Chinese)

[10] 劉 平,彭建營(yíng),彭士琪,等.應(yīng)用RAPD標(biāo)記技術(shù)探討棗與酸棗的分類(lèi)學(xué)關(guān)系 [J].林業(yè)科學(xué),2005,41(2):182-185.

Liu P,Peng J Y,Peng S Q,et al.Study on systematic relationships ofZiziphusjujubaandZiziphusspinosausing RAPD technique [J].Scientia Silvae Sinicae,2005,41(2):182-185.(in Chinese)

[11] 劉 平,彭建營(yíng),彭士琪,等.贊皇大棗的群體遺傳多樣性評(píng)價(jià) [J].果樹(shù)學(xué)報(bào),2006,23(5):685-689.

Liu P,Peng J Y,Peng S Q,et al.Genetic diversity evaluation ofZiziphusjujubacv Zanhuangdazao [J].Journal of Fruit Science,2006,23(5):685-689.(in Chinese)

[12] 彭建營(yíng),束懷瑞,彭士琪.用RAPD技術(shù)探討中國(guó)棗的種下劃分 [J].植物分類(lèi)學(xué)報(bào),2002,40(1):89-94.

Peng J Y,Shu H R,Peng S Q.To address the problem of infraspecific classification ofZiziphusjujubaMill.using RAPD data [J].Acta Phytotaxonomica Sinicia,2002,40(1):89-94.(in Chinese)

[13] 彭建營(yíng),束懷瑞,孫仲序,等.中國(guó)棗種質(zhì)資源的RAPD分析 [J].園藝學(xué)報(bào),2000,27(3):171-176.

Peng J Y,Shu H R,Sun Z X,et al.RAPD analysis of germplasm resources on Chinese date [J].Acta Horticulturae Sinica,2000,27(3):171-176.(in Chinese)

[14] 齊 靖,董 禎,毛永民,等.棗高密度遺傳圖譜的構(gòu)建與樹(shù)干直徑的QTL分析 [J].林業(yè)科學(xué),2009,45(8):44-49.

Qi J,Dong Z,Mao Y M,et al.Construction of a dense genetic linkage map and QTL analysis of trunk diameter in Chinese jujube [J].Scientia Silvae Sinicae,2009,45(8):44-49.(in Chinese)

[15] 宋 婉.中國(guó)棗優(yōu)良品種DNA指紋圖譜的研究 [D].北京:北京林業(yè)大學(xué),1999.

Song W.Study on DNA fingerprinting of superior cultivars of Chinese date (ZizyphusjujubaMill.) [D].Beijing:Beijing Forestry University,1999.(in Chinese)

[16] 趙 錦,劉孟軍. 棗樹(shù)品種、品系及其近緣種的RAPD分析 [J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,36(5):590-594.

Zhao J,Liu M J.RAPD analysis on the cultivars, strains and related species of Chinese jujube (ZiziphusjujubaMill.) [J].Scientia Agricultura Sinica,2003,36(5):590-594.(in Chinese)

[17] 趙 錦,劉孟軍.贊皇大棗優(yōu)良品系及贊新大棗的RAPD分析 [J].林業(yè)科學(xué),2003,39(3):153-156.

Zhao J,Liu M J.RAPD analysis on the outstanding clones of Zanhuangdazao and Zanxindazao [J].Scientia Silvae Sinicae,2003,39(3):153-156.(in Chinese)

[18] 白瑞霞.AFLP技術(shù)在棗種質(zhì)資源鑒別和分類(lèi)研究中的應(yīng)用 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.

Bai R X.Study on identification and classification ofZiziphusjujubagermsplasm resources using AFLP molecular markers [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2005.(in Chinese)

[19] 白瑞霞.棗種質(zhì)資源遺傳多樣性的分子評(píng)價(jià)及其核心種質(zhì)的構(gòu)建 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

Bai R X.Studies on genetic diversity and core collection construction ofZiziphusjujubagermsplasm resources using AFLP and SRAP markers [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2008.(in Chinese)

[20] 馬慶華,申連英,王貴禧,等.應(yīng)用AFLP技術(shù)分析冬棗優(yōu)良單株選擇的遺傳基礎(chǔ) [J].植物遺傳資源學(xué)報(bào),2009,10(4):504-510.

Ma Q H,Shen L Y,Wang G X,et al.Analysis of genetic background for the selection of advanced trees of Dongzao (ZizyphusjujubaMill.cv Dongzao) by AFLP markers [J].Journal of Plant Genetic Resources,2009,10(4):504-510.(in Chinese)

[21] 鹿金穎.棗自然授粉實(shí)生后代雜種鑒定及遺傳變異研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2003.

Lu J Y.Study on identification of hybrids and hereditary variation of natural pollinated Chinese jujube seedlings [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2003.(in Chinese)

[22] 鹿金穎,毛永民,申蓮英,等.用AFLP分子標(biāo)記鑒定冬棗自然授粉實(shí)生后代雜種的研究 [J].園藝學(xué)報(bào),2005,32(4):680-684.

Lu J Y,Mao Y M,Shen L Y,et al.Application of AFLP markers for identification of hybrids from open pollinated Dongzao (ZizyphusjujubaMill.) progenies [J].Acta Horticulturae Sinica,2005,32(4):680-684.(in Chinese)

[23] 喬 勇,趙 錦,楊海旭,等.21個(gè)棗品種(系)的AFLP指紋分析 [J].植物遺傳資源學(xué)報(bào),2009,10(2):205-210.

Qiao Y,Zhao J,Yang H X,et al.AFLP analysis on 21 cultivars and strains of Chinese jujube [J].Journal of Plant Genetic Resources,2009,10(2):205-210.(in Chinese)

[24] 王永康,田建保,王永勤,等.棗樹(shù)品種品系的AFLP分析 [J].果樹(shù)學(xué)報(bào),2007,24(2):146-150.

Wang Y K,Tian J B,Wang Y Q,et al.AFLP analysis of jujube cultivars and strains [J].Journal of Fruit Science,2007,24(2):146-150.(in Chinese)

[25] 魏天軍,李彥龍,李百云.寧夏棗樹(shù)品種品系的AFLP分析 [J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2010,26(10):239-241.

Wei T J,Li Y L,Li B Y.AFLP analysis on jujube cultivars and strains in Ningxia Autonomous Region [J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2010,26(10):239-241.(in Chinese)

[26] 文亞峰,何 鋼. 適合我國(guó)南方地區(qū)栽培的棗優(yōu)良品種親緣關(guān)系研究 [J].果樹(shù)學(xué)報(bào),2007,24(5):640-643.

Wen Y F,He G.Genetic relationships among jujube cultivars suitable for cultivation in South China [J].Journal of Fruit Science,2007,24(5):640-643.(in Chinese)

[27] 申連英.棗(ZiziphusjujubaMill.)遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及性狀的QTL定位研究 [D].河北保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.

Shen L Y.Construction of genetic linkage map and mapping QTLs for some traits in Chinese jujube (ZiziphusjujubaMill.) [D].Baoding,Hebei:Hebei Agricultural University,2005.(in Chinese)

[28] 李 莉,彭建營(yíng),白瑞霞.中國(guó)棗屬植物親緣關(guān)系的SRAP分析 [J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,42(5):1713-1719.

Li L,Peng J Y,Bai R X.Analysis on the genetic relationships of Chinese Ziziphus with SRAP markers [J].Scientia Agricultura Sinica,2009,42(5):1713-1719.(in Chinese)

[29] 李海濤.河南棗主栽品種及灰棗群體遺傳變異分析 [D].河南鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

Li H T.Analysis of genetic variation in Henan main cultivatedZiziphusjujubavarieties and Z.‘huizao’ population [D].Zhengzhou,Henan:Henan Agricultral University,2008.(in Chinese)

[30] 李繼東,李海濤,馮建燦,等.河南主栽棗品種遺傳關(guān)系的ISSR分析 [J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,46(1):36-39.

Li J D,Li H T,Feng J C,et al.Analysis on the genetic relationship of major jujube cultivars in Henan by ISSR markers [J].Journal of Henan Agricultral University,2012,46(1):36-39.(in Chinese)

[31] 梁?jiǎn)?靈寶大棗遺傳多樣性的表型與ISSR分析 [D].河南鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

Liang Q W.Analysis of genetic diversity inZiziphusjujuba‘Lingbaodazao’ based on morphological and ISSR methods [D].Zhengzhou,Henan:Henan Agricultral University,2010.(in Chinese)

[32] Ellegren H.Microsatellites:Simple sequences with complex evolution [J].Nat Rev Genet,2004,5(6):435-445.

[33] Belaj A,Muoz-Diez C,Baldoni L,et al.Genetic diversity and population structure of wild olives from the north-western Mediterranean assessed by SSR markers [J].Ann Bot-london,2007,100(3):449-458.

[34] De Andrés M T,Benito A,Perez-Rivera G,et al.Genetic diversity of wild grapevine populations in Spain and their genetic relationships with cultivated grapevines [J].Mol Ecol,2012,21(4):800-816.

[35] Lü J,Qi J J,Shi Q X,et al.Genetic diversity and population structure of cucumber (CucumissativusL.) [J].PLoS One,2012,7(10):e46919.

[36] 麻麗穎,孔德倉(cāng),劉華波,等.36份棗品種SSR指紋圖譜的構(gòu)建 [J].園藝學(xué)報(bào),2012,39(4):647-654.

Ma L Y,Kong D C,Liu H B,et al.Construction of SSR fingerprint on 36 Chinese jujube cultivars [J].Acta Horticulturae Sinica,2012,39(4):647-654.(in Chinese)

[37] 王斯琪,唐詩(shī)哲,孔德倉(cāng),等.利用SSR標(biāo)記進(jìn)行棗樹(shù)子代苗父本鑒定 [J].園藝學(xué)報(bào),2012,39(11):2133-2141.

Wang S Q,Tang S Z,Kong D C,et al.Application of SSR markers for the identification of paternal parent for the seedlings of Chinese jujube [J].Acta Horticulturae Sinica,2012,39(11):2133-2141.(in Chinese)

[38] Chase M W,Hills H H.Silica gel:An ideal material for field preservation of leaf samples for DNA studies [J].Taxon,1991:215-220.

[39] Lian C L,Zhou Z H,Hogetsu T.A simple method for developing microsatellite markers using amplified fragments of inter-simple sequence repeat (ISSR) [J].J Plant Res,2001,114(3):381-385.

[40] Peakall R,Smouse P E.GenAlEx 6.5:Genetic analysis in Excel·Population genetic software for teaching and research-an update [J].Bioinformatics,2012,28(19):2537-2539.

[41] Rohlf F J.NTSYSpc,Numerical taxonomy and multivariate analysis system：Version 2.2 [M].New York:Exeter Software,2005.

[42] Amos W,Hoffman J,Frodsham A,et al.Automated binning of microsatellite alleles:Problems and solutions [J].Mol Ecol Notes,2007,7(1):10-14.

[43] Tamura K,Peterson D,Peterson N,et al.MEGA5:Molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood,evolutionary distance,and maximum parsimony methods [J].Mol Biol Evol,2011,28(10):2731-2739.

[44] Grant V.The evolutionary process:A critical study of evolutionary theory [M].New York:Columbia University Press,1991.

[45] Frankham R,Briscoe D A,Ballou J D.Introduction to conservation genetics [M].New York:Cambridge University Press,2002:29-62.

[46] Wright S.The interpretation of population structure by F-statistics with special regard to systems of mating [J].Evolution,1965,19:395-420.

[47] 閆 超,劉 平,劉孟軍,等.棗樹(shù)的結(jié)實(shí)特性影響因素 [J].林業(yè)科學(xué),2010,46(4):78-86.

Yan C,Liu P,Liu M J,et al.The influencing factors of the fruiting characteristics ofZiziphusjujuba[J].Scientia Silvae Sinicae,2010,46(4):78-86.(in Chinese)

[48] Wright S.Evolution in mendelian populations [J].Genetics,1931,16(2):97-159.

[49] 李 寧.陜北地區(qū)棗樹(shù)POD同功酶和核型研究 [D].甘肅蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

Li N.Studies on peroxidase isozyme and karyotype of jujube varieties in Northern Shaanxi [D].Lanzhou,Gansu:Gansu Agricultural University,2008.(in Chinese)

[50] 齊向英,李 寧,陳宗禮.狗頭棗染色體數(shù)目與核型分析 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(26):11305-11306.

Qi X Y,Li N,Chen Z L.Chromosome number and karyotype analysis of Chinese date Goutouzao [J].Journal of Anhui Agricultural Science,2008,36(26):11305-11306.(in Chinese)

[51] 彭建營(yíng),王永蕙,彭士琪.用花粉形態(tài)鑒定棗品種和酸棗類(lèi)型 [J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1992,15(Suppl.):31-34.

Peng J Y,Wang Y H,Peng S Q.Appraisal jujube and wild jujube cultivar type by pollen morphology [J].Journal of Agricultural University of Hebei,1992,15(Suppl.):31-34.(in Chinese)

[52] 王秀伶,邵建柱,張學(xué)英,等.POD同工酶在酸棗、棗分類(lèi)中的應(yīng)用 [J].武漢植物學(xué)研究,1999,17(4):307-313.

Wang X L,Shao J Z,Zhang X Y,et al.A study on the classification of jujube and wild jujube by peroxidase isozyme [J].Journal of Wuhan Botanical Research,1999,17(4):307-313.(in Chinese)