一種準確測定靈孢多糖含量的方法

解艷　呂文博

摘 要：目的：建立準確測定靈孢多糖含量的方法。方法：采用蒽酮硫酸法，紫外分光光度計在620nm檢測吸收度，以測得的吸收度與其對應(yīng)的濃度計算回歸方程，回歸曲線的相關(guān)系數(shù)不得低于0.99。對此方法改進，摸索出影響含量結(jié)果不穩(wěn)定的因素，準確測定含量。結(jié)果：重復(fù)性，精密度均符合規(guī)定。結(jié)論：本方法可用于準確測定靈孢多糖的含量。

關(guān)鍵詞：靈孢多糖；含量；分析

多糖的含量測定方法有蒽酮硫酸法、苯酚硫酸法、滴定法。靈孢多糖注射液的含量測定方法采用蒽酮硫酸法[1]，采用此法測定含量結(jié)果不穩(wěn)定，重復(fù)性及重現(xiàn)性均較差，通過對方法中冰水浴溫度、溶液搖勻方式、測定時間摸索，現(xiàn)方法重復(fù)性，精密度實驗結(jié)果均符合規(guī)定。實驗方法如下。

1 實驗條件

1.1 儀器 TU-1801紫外可見分光光度計

SK-Ⅰ快速混勻器

1.2 試藥

硫酸（分析純）

批號：20130129

來源： 國藥集團化學(xué)試劑有限公司

蒽酮（分析純）

規(guī)格：25克

批號：050619

來源： 上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠

D-無水葡萄糖

批號：110833-200904

來源：中國食品藥品檢定研究院

2 方法

溶液的制備：（1）對照品溶液的制備：按照對照品的說明書， 干燥葡萄糖對照品，取0.1g，精密稱定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。（2）供試品溶液的制備：精密量取靈孢多糖溶液（4.5mg/ml）1.5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為供試品溶液。（3）0.2%蒽酮試劑的制備：取蒽酮0.2g，溶于100ml濃硫酸中，蒽酮試劑使用前一小時配制好，蒽酮試劑放置時間太久會變色，影響含量測定。（4）空白對照溶液：水。（5）標準曲線的制備。精密量取對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0和8.0ml，分別置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。精密量取上述對照品溶液1.0ml，分別置具塞試管中，置冰水浴中，分別加入5.0ml蒽酮試劑，搖勻，各管加完后浸入沸水浴中，加熱1分鐘，加塞。自水浴重新沸騰起，開始記時，10分鐘后取出，用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，立即在620nm的波長處分別測定吸收度，以測得的吸收度與其對應(yīng)的濃度計算回歸方程，回歸曲線的相關(guān)系數(shù)不得低于0.99。

按（5）項下方法，供試品每次四個管，三次試驗含量結(jié)果見表1。

結(jié)果表明：三次試驗中，每次四支管平行性較差。試驗過程中發(fā)現(xiàn)采用冰袋加入自來水的方式制備的冰水浴溫度高于零度，加入蒽酮試劑后，蒽酮顏色迅速加深，蒽酮試劑已與多糖反應(yīng)，加入蒽酮后手動無法混勻，振搖后仍有分層，對此方法在這兩點進行改進：采用加入冰塊的方式，制備冰水浴，測定溫度為零度；采用快速混勻器，幾秒鐘即可混勻。改進后：蒽酮試劑加入后，溶液顏色為蒽酮試劑的顏色，無加深。

按（5）項下方法，供試品每次四個管，三次試驗含量結(jié)果見表2。

結(jié)果表明：三次試驗中，每次四支管平行性仍較差。供試品測定時發(fā)現(xiàn)，吸收值極不穩(wěn)定，上下浮動幅度較大，測定結(jié)果不準確。為保證室溫放置10分鐘后能夠立即測定，將空白對照溶液和對照品溶液的六支管與供試品的四支管分別放入沸水浴中，保證了供試品溶液室溫放置10分鐘后立即測定。

按（5）項下方法，供試品每次四個管，五次試驗含量結(jié)果見表3。

結(jié)果表明：經(jīng)兩次改進方法后，五次試驗，每次四支管平行性很好，相對標準偏差即變異系數(shù)最大為2.11%，重復(fù)性實驗結(jié)果較好，五次試驗，以每次試驗結(jié)果的平均值計算相對標準偏差，結(jié)果為1.28%。試驗結(jié)果穩(wěn)定。

3 結(jié)束語

本試驗按照質(zhì)量標準極易忽視冰水浴、搖勻、室溫放置10分鐘立即測定，這三點，對照品溶液制備的標準曲線截距應(yīng)趨于零。

參考文獻

[1]化學(xué)藥品地方標準上升國家標準[S].靈孢多糖注射液.endprint