基于淀粉樣蛋白級聯(lián)假說的阿爾茨海默癥防治研究進(jìn)展

戴雪伶， 姜招峰

(北京聯(lián)合大學(xué) 生物活性物質(zhì)與功能食品北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室； 北京聯(lián)合大學(xué) 功能食品科學(xué)技術(shù)研究院， 北京 100191)

阿爾茨海默癥(Alzheimer′s disease, AD)是一種多發(fā)于中老年的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，年齡是其最主要的風(fēng)險(xiǎn)因素。隨著全球老齡化時(shí)代的到來，該病的發(fā)病率將急劇增高，成為威脅社會福利和醫(yī)療制度的一大挑戰(zhàn)[1-2]。根據(jù)阿爾茨海默癥國際組織(Alzheimer′s Disease International, ADI)的年度報(bào)告顯示，至2010年全球保守估計(jì)約有3560萬人罹患AD，而這一數(shù)字到2050年將增長至1.15億[3]。

AD的主要病理學(xué)特征為患者大腦皮層和海馬區(qū)出現(xiàn)大量老年斑(Senile plaques, SP)、胞內(nèi)積聚神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles, NFT)以及神經(jīng)元的大量丟失[4]。AD發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，但β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide, Aβ)有關(guān)學(xué)說逐漸占據(jù)主流地位，相關(guān)證據(jù)包括：Aβ聚集形成老年斑斑塊的出現(xiàn)早于AD的臨床癥狀表現(xiàn)；目前所有已知與家族型AD相關(guān)的常染色體突變，如21號染色體上的APP基因、14號染色體上的PS1基因和1號染色體上的PS2基因發(fā)生突變，均能導(dǎo)致Aβ表達(dá)增多及沉積的發(fā)生[5]；AD病人腦內(nèi)Aβ42清除能力下降，而腦脊液中Aβ的水平則較正常人低，提示Aβ可在腦組織內(nèi)發(fā)生沉積[6]；AD轉(zhuǎn)基因動物的出現(xiàn)證實(shí)了過量表達(dá)Aβ及其發(fā)生聚集沉積形成老年斑與認(rèn)知能力下降存在因果關(guān)系，并能夠誘導(dǎo)以磷酸化的tau蛋白為主要組分的神經(jīng)元纖維纏結(jié)的形成[7]。基于Aβ建立的淀粉樣蛋白級聯(lián)假說認(rèn)為Aβ在腦內(nèi)沉積是AD病理改變的中心環(huán)節(jié)，可引發(fā)一系列病理過程，這些病理過程又進(jìn)一步促進(jìn)Aβ沉積，從而形成一種級聯(lián)式放大效應(yīng)[8-9]。本文擬就淀粉樣蛋白級聯(lián)假說的最新研究進(jìn)展及阿爾茨海默癥防治的研究現(xiàn)狀作一綜述。

1 β-淀粉樣蛋白的產(chǎn)生

淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein, APP)是一種廣泛存在的I型跨膜糖蛋白，其成熟過程歷經(jīng)N-, O-糖基化、磷酸化及酪氨酸硫化修飾，幾乎所有哺乳類動物細(xì)胞的整個(gè)生命過程都可以正常產(chǎn)生APP[10]。成熟的APP將至少可能被3個(gè)酶水解切割形成不同片段長度的肽鏈，見圖1。APP在其跨膜的胞外部分被α-分泌酶或β-分泌酶(BACE1，激活位點(diǎn)在腔內(nèi)的跨膜天冬氨酰蛋白酶)切割將產(chǎn)生N端可溶性APP大片段，分別被稱為APPsα或APPsβ，其殘留在細(xì)胞膜上的C端APP片段則被稱為CTFα或CTFβ。殘留在膜上的CTFα或CTFβ隨后分別經(jīng)γ-分泌酶(催化位點(diǎn)含有早老素的膜內(nèi)天冬氨酰蛋白酶)水解剪切，形成分子量3 kD的p3片段(非淀粉樣蛋白途徑)或Aβ片段(淀粉樣蛋白途徑)與APP胞內(nèi)結(jié)構(gòu)片段(APP intracellular domain, AICD)。APP的這一水解過程可能發(fā)生于不同器官部位的細(xì)胞膜上[9]。

圖1 淀粉樣前體蛋白(APP)水解酶切過程示意圖

Aβ片段一般由38～43個(gè)氨基酸殘基所構(gòu)成(以Aβ40或 Aβ42較為常見)，一旦產(chǎn)生，單個(gè)Aβ(尤其是Aβ42)傾向于聚集形成聚合物，初始表現(xiàn)為二聚體、三聚體，之后形成寡聚物、原纖維乃至出現(xiàn)在老年斑中的不溶性纖維[11]。Stohr等[12]研究發(fā)現(xiàn)AD患者腦內(nèi)提取的Aβ不溶性聚集物或化學(xué)合成的Aβ所形成的沉積注入小鼠腦內(nèi)后均會導(dǎo)致大范圍的淀粉樣變性發(fā)生，因此推測Aβ沉積具備朊蛋白(一種感染性蛋白質(zhì))的特點(diǎn)即可聚集裝配形成蛋白聚集體。Prusiner甚至提出“與神經(jīng)退行性病變相關(guān)的蛋白均具有類似朊蛋白性質(zhì)”的觀點(diǎn)[13]。

2 β-淀粉樣蛋白的異常聚集與神經(jīng)毒性

APP經(jīng)酶解產(chǎn)生的Aβ經(jīng)過纖維化聚集等過程最終形成AD患者腦內(nèi)的老年斑。正常情況下細(xì)胞產(chǎn)生的Aβ是可溶的，幾乎不表現(xiàn)出神經(jīng)毒性；在異?；虿±頎顟B(tài)下，Aβ可經(jīng)過聚集形成致密的不溶性的纖維狀聚集物，在低濃度下即表現(xiàn)神經(jīng)毒性[14]，它能誘導(dǎo)神經(jīng)元的凋亡和突觸丟失、誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)并打破鈣平衡，其機(jī)制可能與其結(jié)合細(xì)胞膜有關(guān)[15]。

老年斑是AD的重要病理學(xué)特征，主要由Aβ聚集而成，然而研究并未發(fā)現(xiàn)老年斑的數(shù)量與病情的嚴(yán)重程度具有明顯的相關(guān)性[16]。研究者最初以纖維狀A(yù)β作為藥物干預(yù)的靶點(diǎn)，然而研究發(fā)現(xiàn)大部分的纖維前體及非纖維狀A(yù)β也具有神經(jīng)毒性，使得AD發(fā)病過程以纖維狀A(yù)β為主導(dǎo)的觀點(diǎn)受到挑戰(zhàn)，人們也因此將注意力逐漸轉(zhuǎn)移至Aβ的折疊及聚集的動態(tài)過程。一般認(rèn)為成熟Aβ纖維絲的聚集過程是一個(gè)依賴于成核反應(yīng)的動態(tài)聚合過程。然而，由于聚集是一個(gè)隨機(jī)過程，分子在反應(yīng)過程中無法同步化進(jìn)行，因此在給定時(shí)間內(nèi)反應(yīng)體系中都極可能是幾種不同聚集體形式的混合物，即使在聚合反應(yīng)完成后已形成的成熟Aβ纖維絲也未必是長期穩(wěn)定的[17]。另外，反應(yīng)體系成分的復(fù)雜程度還與體系內(nèi)Aβ的濃度、理化參數(shù)如溫度、離子強(qiáng)度和pH值等。

Aβ的存在形式包括可溶性Aβ單體(monomer)、寡聚體(oligomer)和不可溶的Aβ纖維(fibrils)等，這些不同形式的Aβ均能引起神經(jīng)元損傷并損傷記憶功能。其中，可溶性的Aβ寡聚體根據(jù)分子量及形態(tài)的不同分為低分子量聚集體、原纖維、纖維亞單位和ADDLs等[18]。Aβ聚集不是簡單的從單體到纖維的轉(zhuǎn)變，而是一個(gè)相對復(fù)雜的過程：經(jīng)原子力顯微鏡觀察，孵育早期的Aβ主要形成5～10 nm的球形顆粒，隨著孵育時(shí)間的延長顆粒消失并形成纖維狀結(jié)構(gòu)，這些球形的寡聚體被認(rèn)為是形成纖維過程中的中間產(chǎn)物[19]。也有人認(rèn)為可溶性寡聚體和纖維聚集過程可能是互斥的，即有些寡聚體是終末形式，不會再進(jìn)一步聚集形成纖維結(jié)構(gòu)，而大多數(shù)在形成寡聚體后再繼續(xù)聚集形成纖維，但是導(dǎo)致這兩種聚集路徑的原因還不清楚[18]。部分抑制Aβ聚集的小分子抑制劑僅對寡聚體發(fā)揮作用而其他抑制劑則特異性抑制纖維的形成，表明寡聚體并不是纖維形成過程中必要的中間物，寡聚體和纖維可能是完全不同的聚集過程[20]。

研究表明無論Aβ是否形成纖維狀形態(tài)，均表現(xiàn)出細(xì)胞毒性，誘發(fā)神經(jīng)突觸的減少和神經(jīng)元死亡，且寡聚態(tài)Aβ的神經(jīng)毒性強(qiáng)于Aβ纖維[21]。目前研究傾向于認(rèn)為聚集早期的可溶性Aβ寡聚體的神經(jīng)毒性最強(qiáng)，能引起神經(jīng)細(xì)胞損傷乃至死亡，在AD發(fā)病過程中起關(guān)鍵性作用[14]。然而，用可溶性Aβ的神經(jīng)毒性來解釋毒性效應(yīng)時(shí)，還不能完全涵蓋AD更長期的改變，包括神經(jīng)元變性、丟失以及老年斑的產(chǎn)生。老年斑對于神經(jīng)元發(fā)生損傷是必要的，那么是否與老年斑中存在大量的能夠持續(xù)釋放出損傷周圍細(xì)胞的Aβ寡聚體有關(guān)？從這個(gè)意義上說，老年斑很可能是伴隨著AD發(fā)病而產(chǎn)生，而并非導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷的源頭。

3 靶向Aβ的AD防治策略

美國食品與藥物管理局(FDA)目前已批準(zhǔn)用于治療AD的5種藥物包括乙酰膽堿酯酶抑制劑(治療輕中度AD，包括Tacrine、Donepezil、Galantamine、Rivastigmine)和NMDA受體拮抗劑(治療中重度AD，主要為Memantine)，但治療效果均不盡如人意[22]。由于淀粉樣蛋白級聯(lián)假說在目前階段的廣為接受，靶向Aβ生成、聚集及清除等環(huán)節(jié)的藥物研發(fā)逐漸成為近年的研究熱點(diǎn)。

3.1 對Aβ生成的抑制

用藥物干擾APP的加工和酶解過程，減少Aβ過度生成是治療AD的潛在策略之一。APP由β-分泌酶和γ-分泌酶酶切水解形成Aβ，因此找到β-分泌酶或γ-分泌酶的抑制用于早期AD的治療是該領(lǐng)域的主要研究方向[23-24]。早老素1/早老素2是γ-分泌酶的催化亞基，目前發(fā)現(xiàn)的顯性點(diǎn)突變均位于其上，可直接導(dǎo)致Aβ生成量的異常增加。然而，由于γ-分泌酶參與體內(nèi)包括Notch在內(nèi)的多條信號通路，對其抑制將會引起人體的異常反應(yīng)：禮來公司開發(fā)的γ-分泌酶抑制劑semagacestat在III期臨床試驗(yàn)中由于發(fā)現(xiàn)受試者的認(rèn)知惡化而被迫停止，其他γ-分泌酶抑制劑如Tarenflurbil和LY451039也由于缺乏特異性等問題而宣告失敗[25]。

β-分泌酶作為APP經(jīng)酶解剪切過程的限速酶，研制針對該酶的抑制劑將是減少Aβ生成的關(guān)鍵。以β-分泌酶為靶點(diǎn)的抑制劑GSK188909目前在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)可減少Aβ40/42的表達(dá)，對于轉(zhuǎn)基因動物腦內(nèi)的Aβ表達(dá)量也有一定程度的抑制作用[26]。另外，通過誘導(dǎo)APP向α-分泌酶方向進(jìn)行，從源頭上阻斷Aβ40/42的生成也是目前的研究方向之一。近年來，研究發(fā)現(xiàn)一些天然活性物質(zhì)也具有減少Aβ生成的作用。雷公藤紅素能夠減少APP在β-分泌酶分裂位點(diǎn)的裂解，相應(yīng)減少了分泌型APP(sAPPβ)和C-末端片段(CTF99)，而雷公藤紅素并不直接影響β-分泌酶的活性，而是通過降低mRNA及蛋白水平的表達(dá)量來減少Aβ生成[27]。另有研究使用綠茶提取物EGCG對大鼠灌胃3周后再進(jìn)行外源性Aβ1-42側(cè)腦室注射，發(fā)現(xiàn)EGCG能夠逆轉(zhuǎn)Aβ1-42所引起的認(rèn)知障礙，腦組織中α-分泌酶活性升高而β-、γ-分泌酶活性均降低，且腦組織中Aβ的分泌量受到一定程度的抑制[28]。

3.2 抑制Aβ聚集及促進(jìn)Aβ降解

由于Aβ的聚集過程復(fù)雜，且聚集體的不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，因此抑制Aβ的聚集并盡快啟動清除機(jī)制也是一種有效的防治手段[29]。AD患者腦內(nèi)老年斑中富集大量金屬離子，如鋅、銅離子等可通過與Aβ相互作用促進(jìn)聚集。研究發(fā)現(xiàn)Cu/Zn螯合劑PBT-1在臨床II期試驗(yàn)中對中重度患者具有較好療效[30]。Ding等[31]研究發(fā)現(xiàn)AD轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)腹腔注射全反式維甲酸8周后，可以有效減少Aβ的聚集，動物額部皮層和海馬區(qū)老年斑的數(shù)量和面積也顯著下降。另有研究表明以香莢蘭乙素(10 mg/kg體重)連續(xù)4個(gè)月飼養(yǎng)hAPP(751)SL轉(zhuǎn)基因小鼠能夠顯著降低小鼠腦內(nèi)老年斑的面積，但數(shù)目和區(qū)域比例沒有明顯變化[32]。另外，白藜蘆醇對Aβ的聚集、沉積具有一定的抑制作用，當(dāng)白藜蘆醇濃度達(dá)到100 μM時(shí)，可完全抑制 Aβ的聚集[33]。

此外，促進(jìn)降解也是減輕Aβ毒性的重要途徑之一，體內(nèi)主要的降解酶包括腦啡肽酶(NEP)、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶、胰島素降解酶、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶等[34]。在AD患者的海馬區(qū)以及大腦皮層可檢測到腦啡肽酶的表達(dá)量顯著減少[35]。研究發(fā)現(xiàn)敲除胰島素降解酶的轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)Aβ生成量顯著增加，而過表達(dá)胰島素降解酶及腦啡肽酶的小鼠腦內(nèi)Aβ生成量則顯著下降[36]。

3.3 靶向Aβ的免疫治療

靶向Aβ的免疫治療方法分為主動免疫治療和被動免疫治療。早期研究發(fā)現(xiàn)用Aβ42疫苗接種AD轉(zhuǎn)基因鼠后，可阻止幼年鼠形成淀粉樣的沉積并減輕神經(jīng)性營養(yǎng)不良和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生[37]。AD患者經(jīng)主動免疫方式多次注射聚集態(tài)Aβ42(AN1792)可減緩患者認(rèn)知障礙并減少腦脊液中總tau 蛋白含量，但在II期的臨床試驗(yàn)中發(fā)生嚴(yán)重副反應(yīng)，其中6%受試者出現(xiàn)亞急性腦膜炎[38]。后期免疫藥物主要針對被動免疫藥物人源單克隆抗體，其作用機(jī)制與天然被動免疫類似。被動免疫是將特異性單克隆抗體直接導(dǎo)入體內(nèi)，進(jìn)入體內(nèi)的抗體通過兩種主要途徑清除體內(nèi)的Aβ：抗體經(jīng)過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)，與老年斑中的Aβ結(jié)合，然后小膠質(zhì)細(xì)胞通過Fc受體與抗體的Fc段結(jié)合吞噬分解老年斑；另一條途徑是抗體不進(jìn)入腦內(nèi)，而與外周血中可溶性的Aβ結(jié)合，打破血腦屏障內(nèi)外Aβ的動態(tài)平衡，促進(jìn)腦內(nèi)的Aβ加強(qiáng)外流從而降低腦內(nèi)的Aβ水平。

將單抗m266經(jīng)靜脈注射至PADPP轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)，注射到外周血中的m266促使中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的Aβ從腦內(nèi)流動到外周血中，起到了一個(gè)外周降解的作用阻止了Aβ在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的沉積[39]。研究表明經(jīng)Aβ免疫治療后受試者的認(rèn)知功能明顯改善，PET成像結(jié)果顯示淀粉樣斑塊減少，但副反應(yīng)仍然是目前免疫療法的主要問題[40]，主動或被動免疫均可引起局部腦出血、血管源性水腫及血管附近淀粉樣沉淀增加等副反應(yīng)[41-42]。

4 AD治療前景及展望

以Aβ為治療靶向的根本，是從Aβ的生成、聚集等途徑來減少Aβ，減少淀粉樣斑塊的沉積，改善患者的認(rèn)知障礙。目前根據(jù)這一方案所研制的藥物，雖然在動物模型上取得了較顯著的療效，但是大部分因?yàn)椴煌潭鹊母狈磻?yīng)或進(jìn)入臨床試驗(yàn)后效果不佳宣告失敗，迄今未研制出切實(shí)有效的AD治療藥物。由于臨床試驗(yàn)治療對象主要是AD中后期患者，這一階段神經(jīng)元功能已經(jīng)嚴(yán)重?fù)p傷，此時(shí)很難逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)程，也是眾多AD藥物在臨床試驗(yàn)失敗的主要原因。因此，重視AD早期的診斷與干預(yù)研究，或許更容易找到AD藥物治療的突破口。生物活性化合物以其毒副作用小，容易獲得及生物相容性好等特點(diǎn)已受到越來越多的關(guān)注，大量研究資料表明其在抑制Aβ的生成、聚集及減輕神經(jīng)毒性方面發(fā)揮重要作用[43]。重視對天然活性物質(zhì)的開發(fā)，有望改變目前的局面，研制出延緩AD發(fā)生和發(fā)展的有效藥物。

參考文獻(xiàn)：

[1]Tam J H, Pasternak S H. Amyloid and Alzheimer′s disease: inside and out[J]. Can J Neurol Sci, 2012, 39: 286-298.

[2]Colom L V, Perry G, Kuljis R O. Tackling the elusive challenges relevant to conquering the 100-plus year old problem of Alzheimer′s disease[J]. Curr Alzheimer Res, 2013, 10: 108-116.

[3]Alzheimer′s Disease International. World Alzheimer Report 2009[R]. London: Alzheimer′s Disease International, 2009.

[4]Swerdlow R H. Alzheimer′s disease pathologic cascades: who comes first, what drives what[J]. Neurotox Res, 2012, 22: 182-194.

[5]Walker L C, Jucker M. Amyloid by default[J]. Nat Neurosci, 2011, 14: 669-670.

[6]Buchhave P, Minthon L, Zetterberg H, et al. Cerebrospinal fluid levels of β-amyloid 1-42, but not of tau, are fully changed already 5 to 10 years before the onset of Alzheimer dementia[J]. Arch Gen Psychiatry, 2012, 69: 98-106.

[7]Jin M, Shepardson N, Yang T, et al. Soluble amyloid β-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2011, 108: 5819-5824.

[8]Hardy J, Selkoe D J. The amyloid hypothesis of Alzheimer′s disease: progress and problems on the road to therapeutics[J]. Science, 2002, 297: 353-356.

[9]Karran E, Mercken M, Strooper B D. The amyloid cascade hypothesis for Alzheimer′s disease: an appraisal for the development of therapeutics[J]. Nat Rev Drug Discov, 2011, 10: 698-712.

[10]O′Brien R J, Wong P C. Amyloid precursor protein processing and Alzheimer′s disease[J]. Annu Rev Neurosci, 2011, 34: 185-204.

[11]Zhai J, Lee T H, Small D H, et al. Characterization of early stage intermediates in the nucleation phase of Aβ aggregation[J]. Biochemistry, 2012, 51: 1070-1078.

[12]St?hr J, Watts J C, Mensinger Z L, et al. Purified and synthetic Alzheimer′s amyloid beta (Aβ) prions[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 2012, 109: 11025-11030.

[13]Prusiner S B. Cell biology. A unifying role for prions in neurodegenerative diseases[J]. Science, 2012, 336: 1511-1513.

[14]Wilcox K C, Lacor P N, Pitt J, et al. Aβ oligomer-induced synapse degeneration in Alzheimer′s disease[J]. Cell Mol Neurobiol, 2011, 31: 939-948.

[15]Resende R, Pereira C, Agostinho P, et al. Susceptibility of hippocampal neurons to Abeta peptide toxicity is associated with perturbation of Ca2+homeostasis[J]. Brain Res, 2007, 1143: 11-21.

[16]Kovari E, Herrmann F R, Bouras C, et al. Amyloid deposition is decreasing in aging brains: An autopsy study of 1,599 older people[J]. Neurology, 2014, 82: 326-331.

[17]Broersen K, Rousseau F, Schymkowitz J. The culprit behind amyloid beta peptide related neurotoxicity in Alzheimer′s disease: oligomer size or conformation[J]? Alzheimer′s Research & Therapy, 2010, 2: 12.

[18]Jan A, Hartley D M, Lashuel H A. Preparation and characterization of toxic Aβ aggregates for structural and functional studies in Alzheimer′s disease research[J]. Nat Protoc, 2010, 5: 1186-1209.

[19]Sehlin D, Englund H, Simu B, et al. Large aggregates are the major soluble Aβ species in AD brain fractionated with density gradient ultracentrifugation[J]. PLoS One, 2012, 7: e32014.

[20]Necula M, Kayed R, Milton S, et al. Small molecular inhibitors of aggregation indicate that amyloid beta oligomerization and fibrillization pathways are independent and distinct[J]. J Biol Chem, 2007, 282: 10311-10324.

[21]Deshpande A, Mina E, Glabe C, et al. Different conformations of amyloid-beta induce neurotoxicity by distinct mechanisms in human cortical neurons[J]. J Neurosci, 2006, 26: 6011-6018.

[22]Schneider L S, Insel P S, Weiner M W. Treatment with cholinesterase inhibitors and memantine of patients in the alzheimer′s disease neuroimaging initiative[J]. Arch Neurol, 2011, 68: 58-66.

[23]Ghosh A K, Brindisi M, Tang J. Developing beta-secretase inhibitors for treatment of Alzheimer′s disease[J]. J Neurochem, 2012, 120 Suppl 1: 71-83.

[24]Gandy S, DeKosky S T. Toward the treatment and prevention of Alzheimer′s disease: rational strategies and recent progress[J]. Annual Review of Medicine, 2013, 64: 367-383.

[25]Imbimbo B P, Giardina G A. Gamma-secretase inhibitors and modulators for the treatment of Alzheimer′s disease: disappointments and hopes[J]. Current Topics in Medicinal Chemistry, 2011, 11: 1555-1570.

[26]Hussain I, Hawkins J, Harrison D, et al. Oral administration of a potent and selective non-peptidic BACE-1 inhibitor decreases beta-cleavage of amyloid precursor protein and amyloid-beta production in vivo[J]. J Neurochem, 2007, 100: 802-809.

[27]Paris D, Ganey N J, Laporte V, et al. Reduction of beta-amyloid pathology by celastrol in a transgenic mouse model of Alzheimer′s disease[J]. Journal of Neuroinflammation, 2010, 7: 17.

[28]Lee J W, Lee Y K, Ban J O, et al. Green tea (-)-epigallocatechin-3-gallate inhibits beta-amyloid-induced cognitive dysfunction through modification of secretase activity via inhibition of ERK and NF-kappaB pathways in mice[J]. The Journal of Nutrition, 2009, 139: 1987-1993.

[29]Cheng B, Gong H, Xiao H, et al. Inhibiting toxic aggregation of amyloidogenic proteins: a therapeutic strategy for protein misfolding diseases[J]. Biochim Biophys Acta, 2013, 1830: 4860-4871.

[30]Cuajungco M P, Frederickson C J, Bush A I. Amyloid-beta metal interaction and metal chelation[J]. Subcell Biochem, 2005, 38: 235-254.

[31]Ding Y, Qiao A, Wang Z, et al. Retinoic acid attenuates beta-amyloid deposition and rescues memory deficits in an Alzheimer′s disease transgenic mouse model[J]. J Neurosci, 2008, 28: 11622-11634.

[32]Lull M E, Levesque S, Surace M J, et al. Chronic apocynin treatment attenuates beta amyloid plaque size and microglial number in hAPP(751)(SL) mice[J]. PLoS One, 2011, 6: e20153.

[33]Richard T, Pawlus A D, Iglésias M L, et al. Neuroprotective properties of resveratrol and derivatives[J]. Annals of the New York Academy of Sciences, 2011, 1215: 103-108.

[34]De Strooper B, Saftig P, Craessaerts K, et al. Deficiency of presenilin-1 inhibits the normal cleavage of amyloid precursor protein[J]. Nature, 1998, 391(6665): 387-390.

[35]Yasojima K, McGeer E G, McGeer P L. Relationship between beta amyloid peptide generating molecules and neprilysin in Alzheimer disease and normal brain[J]. Brain Res, 2001, 919(1): 115- 121.

[36]Miller B C, Eckman E A, Sambamurti K, et al. Amyloid-beta peptide levels in brain are inversely correlated with insulysin activity levels in vivo[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2003, 100 (10): 6221-6226.

[37]Schenk D, Barbour R, Dunn W, et al. Immunization with amyloid-beta attenuates Alzheimer-disease-like pathology in the PDAPP mouse[J]. Nature, 1999, 400: 173-177.

[38]Orgogozo J M, Gilman S, Dartigues J F, et al. Subacute meningoencephalitis in a subset of patients with AD after Abeta42 immunization[J]. Neurology, 2003, 61: 46-54.

[39]DeMattos R B, Bales K R, Cummins D J, et al. Brain to plasma amyloid-pefflux: a measure of brain amyloid burden in a mouse model of Alzheimer′s disease[J]. Science, 2002, 295: 2264-2267.

[40]Rinne J O, Brooks D J, Rossor M N, et al. 11C-PiB PET assessment of change in fibrillar amyloid-beta load in patients with Alzheimer′s disease treated with bapineuzumab: a phase 2, double-blind, placebo-controlled, ascending-dose study[J]. Lancet Neurol, 2010, 9(4): 363-372.

[41]Holmes C, Boche D, Wilkinson D, et al. Long-term effects of Abeta42 immunisation in Alzheimer′s disease: follow-up of a randomised, placebo-controlled phase I trial[J]. Lancet, 2008, 372(9634): 216-223.

[42]Wilcock D M, Gharkholonarehe N, Van Nostrand W E, et al. Amyloid reduction by amyloid-beta vaccination also reduces mouse tau pathology and protects from neuron loss in two mouse models of Alzheimer′s disease[J]. J Neurosci, 2009, 29(25): 7957-7965.

[43]Williams P, Sorribas A, Howes M J. Natural products as a source of Alzheimer′s drug leads[J]. Nat Prod Rep, 2011, 28: 48-77.