晚期非小細(xì)胞肺癌靶向治療中循環(huán)DNA檢測(cè)EGFR基因突變應(yīng)用價(jià)值

陳祥娜

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建福州 350003

晚期非小細(xì)胞肺癌靶向治療中循環(huán)DNA檢測(cè)EGFR基因突變應(yīng)用價(jià)值

陳祥娜

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建福州 350003

目的結(jié)合該院在非小細(xì)胞癌（NSCLC）靶向治療中，循環(huán)DNA檢測(cè)EGFR基因突變的相關(guān)情況，對(duì)其臨床價(jià)值進(jìn)行評(píng)估。方法 從該院中選取接受EGDR TIKs治療的54例患者，分別對(duì)其進(jìn)行血清采集和組織采集，并制作成標(biāo)本，對(duì)DNA進(jìn)行提取檢測(cè)。結(jié)果 女性出現(xiàn)基因變異的情況高于男性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；組織類型、臨床分析以及EGFR TIKs無基因突變誤差，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；血清樣本測(cè)定EGDR基因突變，特異性為97.30%；靈敏度為41.18%；所有患者的客觀緩解率為27.78%，疾病控制率為48.15%；EGFR TKIs對(duì)晚期患者的客觀緩解率為50.00%，對(duì)野生型的患者則只有16.67%。結(jié)論在EGDR基因突變的測(cè)定中，血清循環(huán)DNA具有一定的價(jià)值，且可有效優(yōu)化晚期肺癌靶向治療患者的臨床效果。

NSCLC；循環(huán)DNA；EGDR基因突變

靶向治療的出現(xiàn)極大的改善了晚期非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后。肺癌組織的EGFR基因突變可以有效預(yù)測(cè)靶向藥物EGFRTKI的臨床療效。目前臨床上多采用手術(shù)或穿刺標(biāo)本來檢測(cè)EGFR基因突變。但這種有創(chuàng)操作在一定程度上限制了EGFR基因突變的檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者循環(huán)血中游離DNA含量顯著高于正常人，并與原發(fā)腫瘤組織具有高度的遺傳一致性[1-2]。鑒于此，該院2011年1月—2014年6月期間在NSCLC靶向治療中，運(yùn)用血清循環(huán)DNA檢測(cè)EGFR基因突變，對(duì)其臨床價(jià)值進(jìn)行評(píng)估?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從該院2011年 1月—2014年6月所接診的 NSCLC患者中，選取54例采用小分子表皮生長因子受體細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶抑制劑（EGDR TIKs）治療的患者；其中女性23例，男性31例，患者平均年齡為（65.41±1.24）歲；其中19例為非腺癌，35例為腺癌；患者中26例為Ⅲb期，28例為Ⅳ期；在進(jìn)行采樣時(shí)，24例為曾經(jīng)或者正在接受EGDR TIKs治療，30例為首次接受EGDR TIKs臨床治療。在獲得患者同意之后，對(duì)其進(jìn)行血清樣本的采集，并同時(shí)進(jìn)行石蠟組織標(biāo)本的制作，所有患者均滿足以下幾點(diǎn)：①患者年齡在20歲或以上；②經(jīng)細(xì)胞學(xué)或者病理學(xué)證實(shí)，患者為Ⅲb期或Ⅳ期，其中包括了初次治療后復(fù)發(fā)或者未接受過化療治療的患者；③經(jīng)ECOG功能狀態(tài)評(píng)分，測(cè)評(píng)結(jié)果為0～2分，具有能夠測(cè)量的病灶；④具有較高的依從性，并且能夠及時(shí)到院或者電話接受隨訪；⑤無重要臟器功能障礙。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 ①血清樣本采集：提前一日叮囑患者清晨空腹接受靜脈血采集，每例患者采集5 mL，于黃色促凝管內(nèi)室溫放置4 h后，離心分離血清，-80℃下保存待用；②石蠟組織樣本采集：選取肺穿標(biāo)本或者手術(shù)標(biāo)本腫瘤部分，切取10張6 μm的蠟片，置于Eppendorf管內(nèi)編號(hào)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 DNA的提取 ①血清樣本DNA的提?。涸撗芯窟x取Qiagen公司試劑盒QIAamp DNA Blood Mini Kit，并按照說明書進(jìn)行血清循環(huán)DNA的提?。虎谑灲M織樣本DNA的提?。罕狙芯窟x取QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，并按照說明書進(jìn)行血清循環(huán)DNA的提取。

1.2.3 EGFR突變檢測(cè) 該研究使用ARMS（amplified refractory mutation system）法進(jìn)行EGFR突變檢測(cè)。

1.3 EGFR TIKs的治療方法

為患者提供EGFR TIKs口服治療，每日服用尼洛替尼150 mg，在進(jìn)食前1 h或者進(jìn)食后2 h服用；或者在空腹?fàn)顟B(tài)下，與食物共同服用的情況下，服用250 mg吉非替尼。直到患者出現(xiàn)不可耐受的藥物毒副作用或者腫瘤疾病進(jìn)展；在治療前1周對(duì)患者的身體狀態(tài)進(jìn)行全面評(píng)估。

2 結(jié)果

2.1 血清及組織標(biāo)本中

EGFR基因突變型患者的臨床分布特征 女性出現(xiàn)基因變異的情況高于男性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；組織類型、臨床分析以及EGFR TIKs無基因突變誤差，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 血清EGFR基因突變檢測(cè)的真實(shí)性和可靠性評(píng)價(jià)

通過血清樣本測(cè)定EGFR基因突變，其特異性達(dá)到了97.30%；靈敏度則達(dá)到了41.18%。見表2。

2.3 EGFR基因突變與EGFR TKIs療效關(guān)系

所有患者的客觀緩解率為27.78%，疾病控制率為48.15%；其中EGFR TKIs對(duì)晚期患者的客觀緩解率為50.00%，而對(duì)野生型的患者則只有16.67%。見表3。

3 討論

人類表皮生長因子受體（EGFR）是一種受體酪氨酸激酶，正常情況表達(dá)于上皮細(xì)胞表面，而在一些惡性腫瘤中常過度表達(dá)。EGFR基因突變包括基因擴(kuò)增和點(diǎn)突變，主要集中在18、19、20、21號(hào)外顯子上，第19外顯子的缺失和第21外顯子的L858R點(diǎn)突變，占到89%～95.5%，與腫瘤對(duì)TKIs的敏感度有重要關(guān)系。60%～85%的NSCLC細(xì)胞存在EGFR過度表達(dá)/突變，這部分患者接受腫瘤分子靶向治療（EGFR抑制劑）的臨床療效優(yōu)于常規(guī)化療。臨床研究表明，肺癌細(xì)胞中有EGFR酪氨酸激酶基因編碼區(qū)外顯子19缺失或外顯子21突變的患者，靶向藥物易瑞沙的有效率高達(dá)80%以上[3]。該研究中主要針對(duì)19和21外顯子的突變型檢測(cè)，其中19外顯子突變?yōu)?5.56%(10/18)，21外顯子突變?yōu)?4.44%(8/18)；所檢測(cè)出的基因突變型(19DelK746-A750、19DelK745-E749、19DelK745-A750；21 L858R、21 L861Q)與當(dāng)前研究顯示的已檢測(cè)出的基因突變類型及突變率相符。

表1 EGFR基因突變型的單因素分析

表2 血清EGFR基因突變檢測(cè)篩查試驗(yàn)分析

表3 EGFR基因突變與EGFR TKIs療效關(guān)系

一些臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，通過篩查EGFR基因突變對(duì)肺癌初治患者進(jìn)行吉非替尼治療，中位無進(jìn)展生存時(shí)間達(dá)到12個(gè)月，中位生存時(shí)間達(dá)到20個(gè)月[4]。因而針對(duì)EGFR突變進(jìn)行選擇性靶向治療，患者可以顯著獲益[5]。

2013年5月，美國病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)、國際肺癌研究協(xié)會(huì)(IASLC)和美國分子病理學(xué)會(huì)(AMP)三大權(quán)威機(jī)構(gòu)發(fā)布了一項(xiàng)基于循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的肺癌分子檢測(cè)指南，建議所有晚期肺腺癌患者不論性別、種族、是否吸煙或伴有其他臨床危險(xiǎn)因素，均應(yīng)接受EGFR突變和ALK融合基因檢測(cè)，以判斷是否適于接受酪氨酸激酶抑制劑治療[6]。但是對(duì)于晚期肺癌患者，其腫瘤組織標(biāo)本往往難以獲得，或不能取得足夠適合檢測(cè)的標(biāo)本。這就需要一種能方便取得EGFR突變信息的檢測(cè)方法[7-8]。

在該次研究中，對(duì)血清循環(huán)DNA與腫瘤組織DNA的突變檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明，血清游離DNA檢測(cè)到的突變類型與組織檢測(cè)到的類型無差異，依據(jù)血清EGFR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行選擇性靶向治療，可以使患者顯著受益。由于血液采集方便，患者易于接受，血清EGFR檢測(cè)技術(shù)可以作為腫瘤組織EGFR檢測(cè)的補(bǔ)充與替代，值得臨床推廣應(yīng)用。但是，由于檢測(cè)還具有一定的局限性，故表現(xiàn)出相應(yīng)的假陰性率，故在實(shí)際應(yīng)用中，還需要與其他檢測(cè)手段同時(shí)使用。

[1]R M Bremnes,R Sirera,C Camps.Circulating tumour-derived DNA and RNA markers in blood:a tool for early detection,diagnostics,and follow-up[J].Lung Cancer,2005,49(1):1-12.

[2]Ciuleanu T,Stelmakh L,Cicenas S,et al.Efficacy and safety of erlotinib versus chemotherapy insecond-line treatment of patients with advanced, non-small-cell lung cancer with poor prognosis(TITAN):arandomised multicentre,open-label,phase 3 study[J].Lancet Oncol,2012,13(3): 300-308.

[3]車德海,田強(qiáng),曹京燕,等.DNA直接測(cè)序技術(shù)檢測(cè)EGFR基因突變指導(dǎo)厄洛替尼一線治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床觀察[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2011,19(10):2009-2013.

[4]黃進(jìn)肅，董強(qiáng)剛，許凱黎，等.血清循環(huán)DNA的EGFR基因突變于肺癌選擇性靶向治療研究[J].腫瘤，2007,27（12）：968-972.

[5]Brevet M,Johnson ML,Azzoli CG,et al.Detection of EGFR mutations in plasma DNA from lungcancer patients by mass spectrometry genotyping is predictive of tumor EGFR status and response to EGFRinhibitors[J]. Lung Cancer,2011,73(1):96-102.

[6]劉宏杰,葉斌,程靜，等.肺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者外周血循環(huán)DNA的定量分析[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2011,16(2):209-213.

[7]劉麗榮,張小蕾.不同DNA抽提方法在乳腺癌血清循環(huán)DNA提取中的效果比較[J].吉林醫(yī)學(xué),2010,31(16):2368-2369.

[8]王書航,王潔.優(yōu)化非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKI治療[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2012：40-41.

R73

A

1674-0742（2014）11（b）－0053-02

2014-08-16）

陳祥娜（1985.1-），女，山東臨沂人，研究生，技師，研究方向：分子病理。