磺胺間甲氧嘧啶與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞常見病原菌的藥敏試驗

吳 波段龍川羅厚強

1.浙江省溫州市動物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州 325000；2.溫州科技職業(yè)學(xué)院動物科學(xué)系，浙江溫州 325006

磺胺間甲氧嘧啶與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞常見病原菌的藥敏試驗

吳 波1段龍川2羅厚強2

1.浙江省溫州市動物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州 325000；2.溫州科技職業(yè)學(xué)院動物科學(xué)系，浙江溫州 325006

采用磺胺間甲氧嘧啶（SMM）與恩諾沙星（EFs）聯(lián)合用藥對黃羽肉雞常見病原菌大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌進行了體外藥物敏感性試驗。結(jié)果表明，SMM對3種病原菌的MIC值分別為256、1 024、256 μg/mL；EFs對3種病原菌的MIC值分別為32、16、2 μg/mL。SMM與EFs聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果表明對大腸桿菌和禽多殺性巴氏桿菌呈現(xiàn)協(xié)同作用，對沙門氏菌呈現(xiàn)相加作用。

磺胺間甲氧嘧啶；恩諾沙星；黃羽肉雞；藥敏試驗

當前，黃羽肉雞養(yǎng)殖過程中大多數(shù)病毒性疫病通過強制性疫苗注射等方法得到了有效控制[1]，然而細菌性疫病仍然呈現(xiàn)多發(fā)態(tài)勢，如大腸桿菌病、雞白痢、雞霍亂等。這幾種病在養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)頻率較高，養(yǎng)殖戶往往憑經(jīng)驗用藥，治療程序不一，療效差別很大。用藥時病情出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，暫停則死亡，停藥1～2 d后，病情又出現(xiàn)反復(fù)，死亡增加，難以治愈；長期反復(fù)用藥，使病原菌產(chǎn)生很強的耐藥性[2]，加大治療成本的同時又無法有效控制疫情，給養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟損失。

本試驗選取磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星2種藥物，通過這2種藥物對溫州地區(qū)黃羽肉雞常見病原菌（大腸桿菌、沙門氏菌、禽多殺性巴氏桿菌）的體外聯(lián)合藥敏試驗，研究兩者合用的抑菌效果，為篩選出經(jīng)濟有效的黃羽肉雞常見病聯(lián)合用藥方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）供試藥品。磺胺間甲氧嘧啶鈉，商品名制菌磺，含量45%，生產(chǎn)批號：20140121，購自廣東大華農(nóng)動物保健品有限公司。乳酸恩諾沙星，由浙江國邦藥業(yè)有限公司提供，批號121108-1，含量99.5%。

2）受試菌株。大腸桿菌（ATCC25922）、沙門氏菌（ATCC14028）、禽多殺性巴氏桿菌（ATC12948），購自杭州天和微生物試劑有限公司。

3）培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基：MuellerHinton（簡稱MH）培養(yǎng)基，血清MH肉湯培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基：血清瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基。上述各種培養(yǎng)基均按常規(guī)方法制備，并置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方 法

1）培養(yǎng)基的制備。按MH肉湯粉使用說明書配置；用于培養(yǎng)沙門氏桿菌和禽多殺性巴氏桿菌時，可在培養(yǎng)基中加入5%血清。MH瓊脂經(jīng)高壓滅菌后，每個平板分裝15 mL制成瓊脂平板，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2）藥液的配制。試驗前精密稱取磺胺間甲氧嘧啶鈉和乳酸恩諾沙星，無菌操作配制成2 mg/mL的藥液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3）菌液的配制。挑取特征性菌落先接種血平板，置37℃過夜培養(yǎng)，次日挑選單個菌落1～2個接種于5 mL培養(yǎng)基（加5%血清）中，37℃培養(yǎng)16～18 h。本試驗要求的各菌液濃度為105cfu/mL，依據(jù)計數(shù)的結(jié)果用MH肉湯將各原菌液做相應(yīng)的稀釋。

4）單用藥物最小抑菌濃度（MIC）測定。采用試管二倍稀釋法分別測定每種藥物對每種受試菌株的MIC值，每種測定做3次重復(fù)，確定每種藥物對每種受試菌株的MIC值。

5）聯(lián)合藥敏試驗。采用微量稀釋棋盤法，以各種藥物對應(yīng)各種受試菌株的MIC值的2、1、1/2、1/4倍等濃度在96孔細胞培養(yǎng)板上分別進行聯(lián)合藥敏試驗。置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h左右，觀察結(jié)果。

6）結(jié)果判定

以分級抑菌濃度（FIC）指數(shù)作為聯(lián)合藥敏試驗的判斷依據(jù)，計算公式如下：

FIC指數(shù)≤0.5為協(xié)同作用；0.5＜FIC指數(shù)≤1為相加作用；1＜FIC指數(shù)≤2為無關(guān)作用；FIC指數(shù)＞2為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 單用藥物最小抑菌濃度（MIC）測定值

磺胺間甲氧嘧啶鈉對大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的MIC值測定結(jié)果分別為256、1 024、256 μg/mL；乳酸恩諾沙星單獨用藥對大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的MIC值測定結(jié)果分別為32、16、2 μg/mL。

2.2 聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果

磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果見表1～4。

表1 磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對大腸桿菌的聯(lián)合藥敏試驗

表2 磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對沙門氏菌的聯(lián)合藥敏試驗

由表1可知，SMM單藥的 MIC為 256 μg/mL，EFs的MIC值為32 μg/mL；聯(lián)合用藥時，SMM與EFs的MIC值分別為64、8 μg/mL，明顯低于單藥的MIC值。將表2的MIC值代入FIC指數(shù)化公式，求得聯(lián)合用藥的FIC指數(shù)=（64/256）+ （8/32）=0.5。

由表2可知，SMM單藥的MIC值為1 024 μg/mL，EFs單藥的MIC值為16 μg/mL；聯(lián)合用藥時，SMM與EFs的MIC值分別為512、2 μg/mL，低于單藥的MIC值。將表3的MIC值代入FIC指數(shù)化公式，求得聯(lián)合用藥的FIC指數(shù)=（512/1 024）+ （2/16）=0.625。

表3 磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對禽多殺性巴氏桿菌的聯(lián)合藥敏試驗

表4 聯(lián)合用藥效果

由表 3可知，SMM單藥的 MIC值為 256 μg/mL，EFs單藥的MIC值為2 μg/mL；聯(lián)合用藥時，SMM與EFs的MIC值分別為64、0.5 μg/mL，明顯低于單藥的MIC值。將表4的MIC值代入FIC指數(shù)化公式，求得聯(lián)合用藥的FIC指數(shù)=（64/256）+ （0.5/2）=0.5。

3小 結(jié)

試驗結(jié)果顯示，磺胺間甲氧嘧啶鈉對3種病原菌的敏感程度依次為大腸桿菌=禽多殺性巴氏桿菌＞沙門氏菌；乳酸恩諾沙星對3種病原菌的敏感程度依次為禽多殺性巴氏桿菌＞沙門氏菌＞大腸桿菌，尤其對禽多殺性巴氏桿菌高度敏感。聯(lián)合藥敏試驗對多殺性巴氏桿菌和大腸桿菌的FIC指數(shù)均小于0.5，表明SMM和EFs聯(lián)合用藥效果為協(xié)同作用；聯(lián)合藥敏試驗對沙門氏菌的FIC指數(shù)為0.625，表明SMM和EFs聯(lián)合用藥效果為相加作用。

乳酸恩諾沙星是氟喹諾酮類高效殺菌藥，為動物專用的廣譜殺菌藥，對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌及鏈球菌等均有殺菌效用[3]。該藥物分子能與細菌DNA回旋酶亞基A結(jié)合，抑制該酶的切割與連接功能，阻止細菌DNA的復(fù)制，從而呈現(xiàn)抗菌作用，且具有廣譜抗菌活性及強滲透性[4]。磺胺間甲氧嘧啶鈉則是緩效抑菌藥，其抗菌機制是干擾細菌的葉酸代謝，阻礙葉酸合成，影響細菌繁殖，起抑菌作用，但病原菌易通過葉酸代謝途徑改變從而產(chǎn)生耐藥性[5]，2種藥物聯(lián)用時可以從不同途徑抑制并且殺死細菌[6]，起到協(xié)同作用。對大腸桿菌和禽多殺性巴氏桿菌的感染采用SMM與EFs聯(lián)用進行治療時，可減少2種藥物單用的劑量，并保證其對常見病原菌引起黃羽肉雞疫病的治療效果，同時又有可能降低治療成本并且使病原菌不易產(chǎn)生耐藥性。對于革蘭氏陽性病原菌（如金黃色葡萄球菌）感染，此2種藥物聯(lián)用反而呈現(xiàn)拮抗作用[7]，因此在實際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)臨床和實驗室診斷結(jié)果對癥下藥。

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2014-11-11

溫州市科技計劃項目（2013N0010）

吳波，男，1981年生，碩士生，獸醫(yī)師。