冬奇子口服液對小鼠肝損傷保護作用的研究

黃啟超，馬青

冬奇子口服液對小鼠肝損傷保護作用的研究

黃啟超，馬青

目的通過建立四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝損傷模型，觀察冬奇子口服液對肝損傷的的保護作用，并初步探討冬奇子口服液的保肝機制。方法將50只ICR小鼠隨機分為5組：對照組，CCl4致肝損傷模型組，低、中、高劑量的冬奇子給藥組（1、2.5、5g/kg）。各組連續(xù)給藥7 d，末次給藥1h后，正常組腹腔注射調和油，其余各組腹腔注射0.1%CCl4調和油溶液（10 ml/kg），18 h后測定血清丙氨基轉移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉移酶（AST），肝組織丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。結果低、中、高劑量的冬奇子給藥組與肝損傷模型組比較，血清ALT分別降低16.27%（＜0.05）、64.96%（＜0.01）和113.77%（＜0.01）；血清AST分別降低33.79%（＜0.05）、61.20%（＜0.01）和87.31%（＜0.01）；肝組織MDA含量分別降低28.27%（＜0.05）、65.74%（＜0.01）和108.89%（＜0.01）；肝組織SOD活性分別增加13.82%（＞0.05）、27.31%（＜0.05）和40.73%（＜0.05）。結論冬奇子口服液對肝損傷具有保護作用，其機制可能與減少肝組織脂質過氧反應，增強SOD的抗自由基的能力有關。

丙氨酸氨基轉移酶；天門冬氨酸氨基轉移酶；肝損傷；丙二醛；超氧化物歧化酶；冬奇子口服液

冬奇子口服液由枸杞、五味子及麥冬等藥材組成，主要含有多糖、皂苷及黃酮等有效成分，這些物質具有抗衰老[1]，提高機體免疫力[2]等功效。據研究報道，3種單藥單獨均有抗氧化[3]、抗腫瘤[4]及抗疲勞[5]等功效。但對肝損傷保護作用的報道相對不多。本研究采用腹腔注射四氯化碳（CCl4）致小鼠肝損傷模型，觀察冬奇子口服液對肝損傷的保護作用，為今后臨床應用冬奇子口服液預防肝損傷提供實驗依據?，F將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 藥物及試劑冬奇子口服液制備[6]：稱取枸杞250g、五味子300g、麥冬300g，共3份按藥材與水的質量比1∶3浸泡于大燒杯中24 h。提取：中藥材（枸杞子、五味子、麥冬），超聲波提取25 min 3次，濃縮至1∶1后過濾、濾液冷藏備用。CCl4為南京試劑廠產品，用調和油配成0.1%溶液。血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、肝臟丙二醛（MDA）、肝臟超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒均為南京建成生物工程研究所。

1.2 動物及分組ICR小鼠（寧波大學實驗動物中心提供），體質量（21.3±1.9）g，雄雌兼用，自由飲水、進食，將動物編號，按隨機數字表法[7]分成正常對照組、CCl4損傷組、冬奇子給藥組1（DOL1組）、冬奇子給藥組2（DOL2組）、冬奇子給藥組3（DOL3組），每組10只。正常對照組（CON組）：0.9%氯化鈉注射液25m1· kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d后，腹腔注射調和油；CCl4損傷模型組（CCl4組）：0.9%氯化鈉注射液25m1·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.1%CCl4調和油溶液l0 ml·kg－1·d－1；DOL1組：給冬奇子口服液1 g ·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.1%CCl4調和油溶液l0 ml·kg－1·d－1；DOL2組：給冬奇子口服液2.5 g·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1h，腹腔注射0.1%CCl4調和油溶液l0ml·kg－1·d－1；DOL3組：給冬奇子口服液5 g·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.1%CCl4調和油溶液l0ml·kg－1·d－1；小鼠在腹腔注射CCl4后禁食過夜18 h后斷頭處死動物，立刻采血、取肝。測血清ALT和天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、肝組織MDA和SOD。

1.3 指標檢測血清ALT和AST含量測定，肝勻漿SOD活性，MDA含量的測定，均按照試劑盒說明書操作，采用全自動生化分析器檢測。

1.4 統(tǒng)計方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用均數±標準差表示，采用檢驗。＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 冬奇子口服液對CCl4肝損傷血清ALT和AST的影響ALT的改變：CCl4損傷組比對照組高68.32%（=3.17，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低16.27%（=2.23，＜0.05）、64.96%（=3.12，＜0.01）和113.77%（=3.56，＜0.01）。AST的改變：CCl4損傷組比對照組高51.13%（=3.21，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低33.79%（=2.45，＜0.05）、61.20%（=3.09，＜0.01）和87.31%（=3.25，＜0.01）。見表1。

2.2 冬奇子口服液對CCl4肝損傷肝組織MDA、SOD的影響MDA參數改變：CCl4損傷組與對照組比較，高59.42%（=3.19，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低28.27%（=2.38，＜0.05）、65.74%（=3.54，＜0.01）和108.89%（=3.87，＜0.01）。SOD參數改變：CCl4損傷模型組與對照組比較，降低106.45%（=3.74，＜0.01）。DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷模型組比較，分別增加13.82%（=0.96，＞ 0.05）、27.31%（=2.22，＜0.05）和40.73%（=2.44，＜0.05）。見表1。

表1 冬奇子口服液對CCl4肝損傷小鼠血清ALT和AST含量的影晌

3 討論

本實驗選用經典的CCl4化學性肝損傷動物模型來觀察冬奇子口服液的保肝作用。目前認為，CCl4引起肝細胞中毒與自由基加速脂質過氧化有關[8]，其過程如下：肝內主要被微粒體細胞色素P-450氧化酶代謝，生成兩個活性自由基(CCl3·和Cl·)及一系列氧活性物與蛋白質共價結合導致蛋白合成障礙，脂質分解代謝紊亂，引起肝細胞內三酰甘油蓄積。CCl3·能迅速與氧結合轉化為過氧化三氯甲烷自由基(CCl3O2·)導致脂質過氧化，引起細胞膜的變性傷害，使酶滲漏及細胞病變，壞死。CCl4誘發(fā)急性肝損傷病理學表現為肝細胞彌漫性變性、壞死、炎性細胞浸潤，與臨床病毒性肝炎病理變化極為相似。另一種觀點認為[9]，白介素-6（IL-6）、IL-8可能參與肝臟炎性損傷過程。乙型肝炎病毒感染能誘導肝細胞合成大量腫瘤壞死因子（TNF-），而TNF-又可誘導肝細胞合成IL-6、IL-8，IL-6、IL-8可能又促進肝內炎癥反應，介導肝細胞損傷，誘導各類細胞分化增殖，從而使慢性肝炎持續(xù)存在，導致纖維化形成。

本文結果顯示：CCl4損傷組比對照組高68.32%，表現出高血清ALT，肝細胞嚴重受損；DOL1、DOL2和DOL3分別與CCl4損傷組比較，分別降低16.27%、64.96%和113.77%，說明冬奇子口服液可以降低ALT，并且存在劑量依賴性關系。（2）血清天AST的改變：CCl4損傷組比對照組高51.13%，出現高血清AST，表明肝細胞受損；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低33.79%、61.20%和

87.31%，表明冬奇子口服液可以降低丙氨基轉移酶，且也存在劑量依賴性關系。（3）MDA參數改變：CCl4損傷組與對照組比較，高59.42%，表明肝組織脂質過氧反應增加，自由基增多，肝細胞的氧化作用顯著增強；DOL1、DOL2和DOL3分別與CCl4損傷組比較，分別降低28.27%、65.74%和108.89%，表明冬奇子口服液具有減少肝組織脂質過氧反應，增強抗自由基的能力，并存在劑量依存關系。（4）肝組織超SOD參數改變：CCl4損傷模型組與對照組比較，降低106.45%，表明SOD清除自由基能力降低，肝組織抗氧化作用顯著減弱。DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷模型組比較，分別增加13.82%、27.31%和40.73%，表明冬奇子口服液可以增強肝臟組織SOD含量和抗自由基的能力，也存在劑量依存關系。

綜上，本研究提示冬奇子口服液能防止CCl4引起的小鼠血清ALT的升高。其可能機制在于減少MDA肝組織脂質過氧反應，增強SOD抗自由基的能力。另外，冬奇子口服液含有的枸杞多糖具有降低細胞因子（IL-6、IL8）對肝損傷的作用[9]。

[1]宋琳琳,趙宏,沙靖全,等.冬奇子口服液延緩皮膚衰老的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2012,23(6):1344-1346.

[2]徐志毅.復方枸杞袋泡茶對免疫力低下小鼠免疫功能的影響[J].臨床合理用藥, 2011,4（3C）:26-27.

[3]孫波,黃旻,王娟,等.不同產地枸杞中-胡蘿卜素的含量及其抗氧化活性研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2012,23（7）:1666-1667.

[4]何彥麗,杜標炎,王慧峰,等.枸杞多糖對實驗性肝癌小鼠腫瘤細胞FasL表達的影響及其抗腫瘤作用機制[J].廣州中醫(yī)藥大學學報,2010,27（2）:126-129.

[5]龔夢鴿,謝媛媛,鄒忠杰.枸杞對陰虛小鼠的抗疲勞作用[J].中國實驗方劑學雜志, 2012,18（14）:171-174.

[6]宋琳琳,佟麗華.冬奇子口服液的研制及質量標準的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學, 2009,32（3）:22-23.

[7]顏虹.醫(yī)學統(tǒng)計學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:429.

[8]冀潤利,趙青娥.水飛薊素對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護作用[J].中國應用生理學雜志,2012,28（3）:279-280,287.

[9]章培軍,邢雁霞,劉斌鈺,等.枸杞多糖對實驗性肝損傷保護作用的研究[J].中國藥物與臨床,2011,11（11）:1286-1287.

10.3969/j.issn.1671-0800.2014.04.039

R575.2；R285.5

A

1671-0800(2014)04-0438-03

315211寧波，寧波大學陽明學院（黃啟超）；寧波大學醫(yī)學院（馬青）

馬青，Email：maqing@nbu.edu.cn