延壽片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

郭 強(qiáng)

（河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州 450003）

延壽片收載于 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二冊，由何首烏、豨薟草、菟絲子、杜仲、女貞子、桑葉等14味中藥組成，具有補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)壯筋骨之功效。用于肝腎不足，頭昏目花，耳鳴重聽，四肢酸麻，腰酸無力，夜尿頻數(shù)，須發(fā)早白等癥[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只收載了性狀和檢查項(xiàng)，并無定性鑒別和含量測定，為了有效地控制該制劑的質(zhì)量，本文采用TLC法對(duì)何首烏、豨薟草進(jìn)行了鑒別，采用HPLC法測定何首烏中二苯乙烯苷的含量，作為控制本制劑內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)。

1 材料

Waters2695高效液相色譜儀 （配四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、Waters2487紫外檢測器）；安捷倫1100高效液相色譜儀 （配四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、VWD紫外檢測器）；延壽片 （內(nèi)部自制）；何首烏對(duì)照藥材 （批號(hào)：120934-200507，供鑒別用）；奇壬醇 （批號(hào)：111726-200604，供含量測定用）；二苯乙烯苷 （批號(hào)：110844-200607，供含量測定用），乙腈為德國Merck公司色譜醇，水為超純水，其余溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1 .1 何首烏的鑒別[2]取本品0.3g，研細(xì)，加入三氯甲烷50ml，超聲10分鐘，放冷，濾過，殘?jiān)右掖?0ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至3ml，作為供試品溶液。另取何首烏對(duì)照藥材0.25g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按其處方比例制備不含何首烏的陰性樣品，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法 (附錄ⅥB)試驗(yàn)：吸取上述三種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一用羧甲基纖維素鈉制備的硅膠H薄層板上使成條狀，以三氯甲烷-甲醇 （7∶3）為展開劑，展至約3.5cm，取出，晾干，再以三氯甲烷-甲醇 （20∶1∶1為展開劑， 展至約7cm，取出， 晾干， 置紫外燈 （365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。

2.1 .2 豨薟草的鑒別[2-4]取本品3g，研細(xì)，加入三氯甲烷50ml，超聲20分鐘，放冷，濾過，殘?jiān)尤爰状?0ml，超聲處理15分鐘，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取奇壬醇對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法 (附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一用羧甲基纖維素鈉制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇 （4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。

2.2 二苯乙烯苷的含量測定[2，5-6]

2.2 .1 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，過四號(hào)篩，取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，搖勻，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 .2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取二苯乙烯苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

2.2 .3 陰性對(duì)照品溶液的制備 按處方取不含二苯乙烯苷的其他藥材，照本制劑的制備工藝制成陰性對(duì)照制劑，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 .4 色譜條件 用十八烷基硅烷基鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水 （25∶75）為流動(dòng)相，檢測波長為320nm，流速1.0ml·min-1， 柱溫35℃， 進(jìn)樣量10μl， 理論板數(shù)按二苯乙烯苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 .5 陰性干擾試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10μl，注入液相色譜儀。結(jié)果表明，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上有色譜峰，而陰性對(duì)照色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上則未出現(xiàn)明顯色譜峰，表明在該HPLC測定條件下，二苯乙烯苷的測定無明顯干擾。見圖1。

圖1延壽片樣品HPLC色譜圖

2.2 .6 線性關(guān)系考察 精密取二苯乙烯苷對(duì)照品，分別制 成 濃 度 為 102.4μg/ml、 204.8μg/ml、 307.2μg/ml、409.6μg/ml、 512.0μg/ml的樣品， 進(jìn)樣量10μl， 測定峰面積，將進(jìn)樣量與峰面積進(jìn)行線性回歸處理，方程為Y=2087652X-55963 （r=0.9999），二苯乙烯苷在102.4～512.0μg/ml之間呈良好的線性關(guān)系。

2.2 .7 精密度 精密吸取同一對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD=0.53%，表明精密度良好。

2.2 .8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液 （批號(hào)：100204）10μl，分別在0， 2，4，6， 8， 10h注入液相色譜儀中，測定二苯乙烯苷峰面積，結(jié)果表明本品在10h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.5%。

2.2 .9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào) （批號(hào)：100204）樣品6份，按供試品溶液制備方法制備6份供試液，分別測定二苯乙烯苷含量，結(jié)果含量平均值為6.25mg·g-1，RSD=1.2%，表明樣品的重復(fù)性良好。

2.2 .10 加樣回收率試驗(yàn) 取本品已知含量的樣品 （批號(hào)：100204，二苯乙烯苷含量：6.25mg·g-1）6份，每份約0.3g， 精密加入對(duì)照品溶液 （濃度：0.076mg·ml-1，配制方法：精密量取二苯乙烯苷對(duì)照品15.20mg，加入稀乙醇溶解并定容至200ml）25ml，按上述含量測定方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表1，平均回收率為100.0%，RSD=2.17%。

表1二苯乙烯苷回收率測定 (n=6)

2.2 .11 樣品測定 取10批樣品按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，注入液相色譜儀，按2.2.4的色譜條件進(jìn)樣并按外標(biāo)一點(diǎn)法測定，測定十批樣品的含量測定結(jié)果見表2。

表2樣品含量測定

根據(jù)表2結(jié)果，10批樣品含量測定結(jié)果的平均值為6.25mg·g-1，按含量結(jié)果平均值的80%折算成每片的含量作為含量測定的指標(biāo)，暫定本品每片含何首烏以二苯乙烯苷（C20H22O9）計(jì)，不得少于5mg。

3 討論

3.1 指標(biāo)選定依據(jù) 何首烏為方中君藥，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便的療效，用于瘡癰，瘰疬，風(fēng)疹瘙癢，久瘧體虛，腸燥便秘。制法中一部分何首烏與黑豆煎煮濃縮成稠膏，具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨、化濁降脂的功效，主要用于血虛萎黃，眩暈耳鳴，須發(fā)早白，腰膝酸軟，肢體麻木，崩漏帶下，高脂血癥。二苯乙烯苷是何首烏的主要藥理活性成分，因此將鑒別何首烏對(duì)照藥材和何首烏中二苯乙烯苷的定量列入本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。豨薟草為方中臣藥，具有祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)、解毒的功效，用于風(fēng)濕痹痛，筋骨無力，腰膝酸軟，四肢麻痹，半身不遂，風(fēng)疹濕瘡。選定豨薟草列入本品鑒別項(xiàng)。

3.2 薄層鑒別方法選定過程 薄層色譜研究中，曾選定對(duì)桑葉、地黃、牛膝進(jìn)行鑒別研究，結(jié)果供試品色譜相應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)微弱不易見，同時(shí)陰性對(duì)照有干擾。考慮是處方投料較少，同時(shí)處方藥味較多?？紤]暫不列入標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 含量測定方法的選擇 參照相關(guān)文獻(xiàn)，二苯乙烯苷含量測定方法比較成熟，而且HPLC方法準(zhǔn)確度高，專屬性好。

3.4 含量測定提取方法選擇 含量測定中，對(duì)供試液提取溶劑選用了甲醇、70%甲醇、乙醇、稀乙醇四種，結(jié)果只有稀乙醇提取的二苯乙烯苷含量相對(duì)較高，且藥典何首烏項(xiàng)下也是用稀乙醇提取，故選定稀乙醇作為提取溶劑。提取方法比較了超聲提取和回流提取，結(jié)果同為30分鐘時(shí)間條件下，回流所得含量更高；加入稀乙醇量比較了10ml、25ml、50ml，結(jié)果同樣條件下，10ml所得含量結(jié)果較小，而25ml與50ml的結(jié)果接近，故選用加入稀乙醇25ml，回流30分鐘作為本品的提取方法。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑，第二冊[S].北京，1990：98.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典，一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：164-165，345-346.

[3]林達(dá)，洪美華.薄層色譜法鑒別心舒寧片中的豨薟草[J].現(xiàn)代食品與藥品雜志，2007，17（4）：41-42.

[4]王術(shù)平，張淑香，張彥文，等.舒樂沖劑中豨薟草的定性鑒別[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2011，9（5）：188.

[5]李濤，王天志.HPLC測定制首烏及首烏延壽片中二苯乙烯苷的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2005，20（5）：436-438.

[6]陳小凱，段啟，何偉，等.麒麟丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高研究[J].中國藥房，2013，24（23）：2164-2166.