伯樂質(zhì)控品復(fù)溶后在Sysmex CA7000凝血儀上穩(wěn)定性的研究

王秋菊，肖輝建，吳 雙，凌月明

伯樂質(zhì)控品復(fù)溶后在Sysmex CA7000凝血儀上穩(wěn)定性的研究

王秋菊，肖輝建，吳 雙，凌月明

目的：通過凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶時間（thrombin time，TT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）的伯樂質(zhì)控品在冷凍保存不同時間后復(fù)溶的檢測結(jié)果，研究伯樂質(zhì)控品復(fù)溶后-30℃冷凍保存對其在Sysmex CA7000凝血儀上檢測的穩(wěn)定性影響。方法：取3瓶干粉狀凝血質(zhì)控品復(fù)溶后分裝于14支具蓋離心管中，留1支當天檢測，其余13支-30℃冷凍保存，每天各取1支，快速復(fù)溶后隨標本一起進行質(zhì)控測試，測定結(jié)果導(dǎo)入伯樂質(zhì)控軟件中。結(jié)果：伯樂凝血質(zhì)控品復(fù)溶后PT、APTT、TT、FIB結(jié)果的日間CV值均小于5%，分裝后第2～14天的測定結(jié)果與開瓶當日的測定結(jié)果間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：伯樂凝血質(zhì)控品復(fù)溶后-30℃冷凍保存14 d內(nèi)，在Sysmex CA7000血凝儀上的檢測結(jié)果具有良好的穩(wěn)定性。

伯樂質(zhì)控品；Sysmex CA7000凝血儀；冷凍保存；穩(wěn)定性

0 引言

凝血結(jié)果的可靠性直接影響臨床對血液凝固功能的判斷，而室內(nèi)質(zhì)量控制是保證測定結(jié)果精密性和準確性的關(guān)鍵，能夠滿足為臨床判斷提供穩(wěn)定可靠的實驗數(shù)據(jù)的基本要求。室內(nèi)質(zhì)控的目的是檢測分析過程中的誤差，控制與分析有關(guān)的各個環(huán)節(jié)，保證檢測結(jié)果的可靠準確。質(zhì)控品的穩(wěn)定性是質(zhì)量控制過程中的重要一環(huán)，質(zhì)控物就是質(zhì)量控制的物質(zhì)基礎(chǔ)，所以在凝血質(zhì)控品的選擇上，準確性、穩(wěn)定性及有效性是首先考慮的，近年來，伯樂凝血質(zhì)控品以良好的穩(wěn)定性和有效期長等優(yōu)點備受關(guān)注。伯樂凝血干粉質(zhì)控品復(fù)溶后按其規(guī)定的條件放置于2～8℃下保存，但發(fā)現(xiàn)質(zhì)控檢測的結(jié)果并不是很穩(wěn)定，且有效期較短，復(fù)溶后只能在2～8℃下保存48 h，有的甚至導(dǎo)致失控，不是很穩(wěn)定，給實驗室?guī)磔^大的成本壓力?？紤]如果質(zhì)控液復(fù)溶分裝后在冷凍條件下能夠較長時間保持穩(wěn)定，可解決反復(fù)凍融帶來的不準確性問題，使穩(wěn)定性明顯提高，也可以大幅減少實驗室檢測成本的支出。為此，對伯樂凝血質(zhì)控品復(fù)溶后分裝放置于-30℃冷凍保存下解凍后在 Sysmex CA7000血凝儀上檢測結(jié)果的穩(wěn)定性進行研究，通過觀察其穩(wěn)定性，可避免失控時對儀器穩(wěn)定性狀況的錯誤判定。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

全自動血凝分析儀Sysmex CA7000；低溫保存箱為海爾DW-40L508；測定所用試劑均為德國Dade Behring Marburg公司提供；質(zhì)控品為美國伯樂公司的干粉質(zhì)控品，批號為78201、78202。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)控均值的測定

操作者在儀器每天處于良好的運行狀態(tài)時，按照《CNAS-CL43醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則》在臨床血液學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明要求，將質(zhì)控品連續(xù)檢測20 d，得到20個質(zhì)控項目凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶時間（thrombin time，TT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）的測定值，導(dǎo)入伯樂質(zhì)控軟件中，計算出其變異系數(shù)（CV）和測量均值（X），并以此作為質(zhì)控均值。

1.2.2 質(zhì)控品復(fù)溶后不同保存時間的測定

取3瓶伯樂干粉凝血質(zhì)控品，各加無菌注射用水1 mL復(fù)溶，該過程嚴格按照本實驗室復(fù)溶標準操作規(guī)程操作，將其中2瓶質(zhì)控液倒入另一瓶質(zhì)控液中，充分混勻消除瓶間差后分裝成14支，每支200μL。取1支當天在CA7000血凝儀上測定，另13支放入-30℃冰箱冷凍保存。之后每天取1支冷凍分裝質(zhì)控品常溫下復(fù)溶，完全解凍后與常規(guī)標本一起進行檢測，連續(xù)測定14 d。按該方法操作5次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

將每天的質(zhì)控結(jié)果分別進行統(tǒng)計，并導(dǎo)入到伯樂質(zhì)控軟件程序中。使用SPSS13.0和Excel 2003統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，多組間的比較用單因素方差分析，組間均數(shù)比較用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同保存時間內(nèi)所測質(zhì)控結(jié)果

伯樂凝血質(zhì)控品復(fù)溶后不同保存時間內(nèi)PT、APTT、TT、FIB測定的±s和CV值見表1。

表1 凝血質(zhì)控品溶解分裝后在-30℃下不同保存時間的穩(wěn)定性比較

2.2 檢測結(jié)果比較

由表1可知，不同保存時間內(nèi)PT、APTT、TT、FIB兩水平所測結(jié)果相對比較穩(wěn)定，且比較方差分析顯示不同保存時間測定結(jié)果之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；t檢驗顯示冷凍分裝后第2～14天的PT、APTT、TT、FIB檢測結(jié)果與第1天的檢測結(jié)果差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

Sysmex CA7000凝血儀是檢驗科常見的凝血儀器，其具有精密度好、準確性高、分析檢測范圍寬、檢測限低、樣本間及試劑間攜帶污染率低的特點，已有文獻證實[1]，它是檢測結(jié)果準確性必備的基礎(chǔ)條件。本儀器對PT、APTT、TT的測定采用光學(xué)法，即PT是在體外模擬人體內(nèi)外源性凝血的全部條件，測定血漿凝固所需的時間，用以反映外源性凝血途徑和共同凝血途徑凝血因子是否異常，是篩檢凝血功能最基本的試驗之一；APTT是在外界環(huán)境下模擬人體內(nèi)內(nèi)源性凝血所需的條件，測定血漿凝固所需的時間，用以反映內(nèi)源凝血因子是否異常，是篩檢止凝血功能最常用的試驗之一；TT是在纖維蛋白原逐漸變成纖維蛋白時，入射光發(fā)生散射，測定散射光或透射光發(fā)生變化，從而測定血漿凝固時間；SysmexCA7000凝血儀對FIB的檢測采用Clauss法，即在被檢血漿中加入凝血酶，從國際標準品FIB參照血漿測定的標準曲線中可獲得被檢血漿的FIB實際含量[2]。采用全自動儀器法檢測，操作簡便、檢測快速、準確性高，且儀器可連續(xù)記錄凝血過程中光、電或機械運動的變化，試劑、校準品、質(zhì)控品均是配套來源，保證了實驗高精度。

《臨床實驗室管理辦法》要求對有質(zhì)控品供應(yīng)的檢驗項目及各級臨床檢驗中心開展室間質(zhì)量評價的檢驗項目必須進行室內(nèi)質(zhì)量控制。室內(nèi)質(zhì)量控制是保證臨床實驗室檢驗質(zhì)量最重要的環(huán)節(jié)。質(zhì)控品是質(zhì)控的物質(zhì)基礎(chǔ)，質(zhì)控品的穩(wěn)定性是日常室內(nèi)質(zhì)量評價的必要條件[3]。所以，日常在使用Sysmex CA7000凝血儀檢測前，除了需要保證儀器處于良好穩(wěn)定的狀態(tài)下，還需要有良好穩(wěn)定性的質(zhì)控品進行室內(nèi)質(zhì)量評價。

而質(zhì)控品保存復(fù)溶環(huán)節(jié)對其穩(wěn)定性有直接的影響，如質(zhì)控品中凝血因子的穩(wěn)定性較差，可評價該種凝血質(zhì)控品質(zhì)量較差。有文獻報道，凝血因子在室溫下的穩(wěn)定性較差，其保存時間與保存溫度有關(guān)[4-5]，常溫下樣品應(yīng)在2 h內(nèi)完成測定，若常溫下不能及時檢測，應(yīng)置于低溫下保存。本科室選擇伯樂凝血質(zhì)控品對Sysmex CA7000凝血儀日常檢測前進行室內(nèi)質(zhì)量評價。考慮干粉質(zhì)控品在復(fù)溶時瓶間差較大[6]，本方法試采用一次性溶解3瓶同一批號凍干質(zhì)控品混合后分裝低溫冷凍保存的方法，以降低該因素影響；并將溶解后的質(zhì)控品在-30℃下分裝冷凍保存14 d復(fù)融后檢測，以消除反復(fù)凍融后的誤差。

以上數(shù)據(jù)顯示，凝血質(zhì)控品溶解分裝后在-30℃下不同保存時間的PT、APTT、FIB 3個檢測項目日間CV值均小于5%，符合CLIA′88規(guī)定的可接受范圍；因CLIA′88對TT項目的總誤差（TEa）沒有具體

（????）（????）要求，筆者按PT及APTT項目的要求設(shè)定TT的TEa為15%，所以TT項目符合要求，說明Sysmex CA7000血凝儀在檢測伯樂質(zhì)控品PT、APTT、TT、FIB 4個項目的穩(wěn)定性較好。置于-30℃下不同保存時間PT、APTT、TT、FIB測定結(jié)果之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，冷凍分裝后第2～14天的測定結(jié)果與第1天的測定結(jié)果間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明復(fù)溶后分裝放置在-30℃冷凍條件下保存14 d內(nèi)能夠保持良好的穩(wěn)定性。Sysmex CA7000血凝儀在使用伯樂凝血質(zhì)控品時，可應(yīng)用該方法，以減小室內(nèi)質(zhì)控測試項目的不精密度，滿足日常Sysmex CA7000血凝儀室內(nèi)質(zhì)控工作的需要。綜上所述，一次性溶解數(shù)瓶干粉質(zhì)控品混勻后分裝保存于-30℃下、用時復(fù)溶的質(zhì)控品具有質(zhì)控血清特性，可降低干粉質(zhì)控品瓶間差導(dǎo)致的不準確性，保證檢測結(jié)果的穩(wěn)定性、有效性及即時性，可降低實驗室成本，避免浪費檢測時間，并能夠迅速把準確可靠的檢驗結(jié)果提供給臨床醫(yī)師，讓其對病患作出正確的診斷和治療。該方法不僅能保證質(zhì)量，而且可節(jié)約成本，使用方便，值得在中小型實驗室進行推廣。

[1]馮厚梅，孫德華，鄭磊.Sysmex CA7000全自動凝血儀性能評價[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2011，26（1）：58-62.

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[6]林增文，鄒偉民，卓綺玲，等.DATE凍干質(zhì)控血清瓶間差及復(fù)溶后穩(wěn)定性測定[J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗，2000，15（4）：50-51.

（收稿：2013-10-13 修回：2014-05-08）

（欄目責任編校：李 影 傅 靂）

Post-redissolution stability research on Bio-Rad coagulation quality control materials by Sysmex CA7000 coagulation system

WANG Qiu-ju,XIAO Hui-jian,WU Shuang,LING Yue-ming
(Department of Clinical Laboratory,the 180th Hospital of the PLA,Quanzhou 362000,Fujian Province,China)

ObjectiveTo explore the effects of Bio-Rad coagulation quality control materials with different storage time by detecting prothrombin time (PT),activated partial thromboplastin time (APTT),thrombin time (TT)and fibrinogen (FIB),and to study its post-resolution stability on Sysmex CA7000 coagulation system after-30℃ cryopreservation. MethodsTotally 3 bottles of powder quality control materials redissolved and then loaded into 14 centrifuge tubes with covers,and 1 tube was tested on the day.The remained 13 tubes were reserved at-30℃,and then redissolved for quality control test one by one in 13 days.The test results were introduced into Bio-Rad quality control software.ResultsThe daytime CV values for PT,APTT,TT and FIB were all less than 5%,and there was no statistical difference between the results on the day and the ones on 2 to 14 days after loading (P＞0.05).ConclusionSysmex CA7000 coagulation system proves that Bio-Rad coagulation quality control materials has high post-redissolution stability after 14-day-30℃ cryopreservation.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（11）：98-99，108]

Bio-Rad coagulation quality control material;CA7000 coagulation system;cryopreservation;stability

R318.6；TH776

A

1003-8868（2014）11-0098-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.11.098

王秋菊（1986—），女，檢驗師，主要從事臨床檢驗方面的研究工作。

362000福建泉州，解放軍180醫(yī)院檢驗科（王秋菊，肖輝建，吳雙，凌月明）