丹皮酚對動脈粥樣硬化大鼠抗氧化作用研究

王 惠，騫秀芳，朱 哲，李 燦

（武警北京總隊第二醫(yī)院藥劑科，北京 100027）

丹皮酚對動脈粥樣硬化大鼠抗氧化作用研究

王 惠，騫秀芳，朱 哲，李 燦

（武警北京總隊第二醫(yī)院藥劑科，北京 100027）

目的：研究丹皮酚對動脈粥樣硬化（AS）大鼠的抗氧化作用。方法：用高脂飼料喂養(yǎng)和維生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型，然后分為正常組、模型組、陽性組（辛伐他汀10 mg/kg）、丹皮酚3個劑量組（20、10、5mg/kg），每組10只。灌胃給藥4周后各組取主動脈，在光鏡下進行病變分級評分。取血清測定SOD活力和MDA含量。結果：丹皮酚能改善AS大鼠的主動脈病變，高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。與模型組比較，丹皮酚各劑量組AS大鼠血清SOD活性顯著升高（P＜0．01），血清MDA含量降低（P＜0．05或P＜0．01）。結論：丹皮酚治療AS作用可能與增強SOD活性、減少MDA含量、減輕氧自由基的損傷有關。

丹皮酚；大鼠；動脈粥樣硬化；超氧化物歧化酶；丙二醛

丹皮酚（paeonol，PA）是毛茛科植物牡丹的根皮及蘿摩科植物徐長卿的根或全草中的活性成分之一，具有改善血流、神經保護、抑制脂質過氧化、抗炎鎮(zhèn)痛等作用，臨床多用于治療心腦血管、炎癥及免疫系統(tǒng)等疾?。?，2］。有報道證實丹皮酚可用于防治家兔動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）［3，4］。我們建立AS大鼠模型，對丹皮酚抗氧化作用進行了研究，總結如下。

1 材料與方法

1.1 動物和飼料

SD大鼠，雄性，體質量（200±20）g，由河北省實驗動物中心提供，合格證號SCXK（冀）2008-1-003。

1.2 藥品和試劑

丹皮酚（純度99%），由Sigma公司提供，用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成適當濃度的混懸液。辛伐他汀片由魯南貝特制藥有限公司提供，藥片粉碎后以生理鹽水配成所需濃度。維生素D3注射液由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和考馬斯亮藍試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 主要儀器

KDC-160HR型高速離心機（中國科大創(chuàng)新股份有限公司生產），CHK-213型光學顯微鏡（日本奧林巴斯公司生產），AU400型全自動生化分析儀（日本奧林巴斯公司生產），UV-2201型紫外分光光度計（日本島津公司生產）。

1.4 方 法

建立模型、分組及給藥：取大鼠60只，隨機分為正常組、模型組、陽性組（辛伐他汀10mg/kg）、PA高劑量組（20mg/kg）、PA中劑量組（10mg/kg）、PA低劑量組（5mg/kg），每組10只。正常組給予普通飼料，其他組均給予高脂飼料喂養(yǎng)，連續(xù)8周。給藥前除正常組外，其他各組腹腔注射維生素D37×105U/kg，每天1次，連續(xù)3天［5］。之后開始灌胃給藥，給藥體積按20mL/kg，每天1次。正常組和模型組給予等體積的0.5%CMC-Na溶液。連續(xù)給藥4周，期間繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)。

指標的檢測：末次給藥后禁食不禁水12h，腹主動脈采血，3500r/min離心5min分離血清，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，硫代巴比妥酸法測定MDA含量，具體操作按試劑盒說明書進行。

主動脈病變分級：動物處死后，分離主動脈周圍的結締組織，剝離全長動脈，將其固定于4%多聚甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片，行HE染色，光鏡下觀察主動脈病變，并進行分級評分［6］。

2 結 果

丹皮酚對AS大鼠主動脈病變分級的影響見表1。

表1 各組大鼠主動脈病變分級比較 只

各組大鼠SOD活性和MDA含量見表2。

表2 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較 （±s）

表2 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較 （±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 n 劑量（mg/kg） SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）正常組 10 - 96.58±12.77 8.05±1.13模型組 10 - 40.92±10.45**19.24±4.00**PA高劑量組 10 20 69.31±18.02△△14.02±3.16△△PA中劑量組 10 10 70.88±19.94△△14.36±2.21△△PA低劑量組 10 5 59.63±13.45△△15.93±2.07△陽性組 10 10 106.26±27.08△△12.89±2.07△△

3 討 論

AS是引起多種心腦血管疾病的病理生理基礎。氧化應激在AS的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，通過氧化作用、誘導血管基因表達、促進局部炎癥反應和細胞增殖，從多方面參與AS的病理進程［7］。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化反應的代謝產物，其含量變化反映了機體內脂質過氧化的程度，從而間接反映機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度［8］。SOD是機體內主要的抗氧化酶-超氧自由基清除劑，其活性高低代表了組織清除自由基的能力［9］。

觀察顯示丹皮酚可減弱脂質過氧化反應，增加氧自由基清除能力，從而能夠拮抗AS時產生的氧自由基對機體細胞的損害。此外，丹皮酚能夠抑制AS大鼠的主動脈粥樣病變。

丹皮酚對大鼠早期AS具有一定的治療作用，其作用可能與增強SOD活性、減少MDA含量，減輕自由基的損傷、保護血管內皮細胞有關。

［1］ 楊正生，彭振輝，姚青海，等．丹皮酚的藥理作用研究進展［J］．中國藥物與臨床，2011，11（5）：545-547．

［2］ Liu J，Wang S，F(xiàn)eng L，et al．Hypoglycemic and antioxidant activities of paeonol and its beneficial effect on diabetic encephalopathy in streptozotocin-induced diabetic rats ［J］．J Med Food，2013，16（7）：577-586．

［3］ 劉瑾．丹皮酚干預兔實驗性動脈粥樣硬化的實驗研究［D］．濟南：山東中醫(yī)藥大學碩士學位論文，2009．

［4］ Li H，Dai M，Jia W．Paeonol attenuates high-fat-dietinduced atherosclerosis in rabbits by anti-inflammatory activity ［J］．Planta Med，2009，75（1）：7-11．

［5］ 周紅，吳曉燕，袁藝標，等．三種劑量維生素D3結合高脂飼料建立大鼠動脈粥樣硬化模型的比較［J］．中國動脈硬化雜志，2012，20（11）：995-998．

［6］ 王偉，楊濱，王嵐，等．丹參山楂藥對對大鼠動脈粥樣硬化的影響［J］．中國中藥雜志，2011，36（6）：784-789．

［7］ Yokoyama M．Oxidant stress and atherosclerosis［J］．Curr Opin Pharmacol，2004，4（2）：110-115．

［8］ Viigimaa M，Abina J，Zemtsovskaya G，et al．Malondialdehyde-modified low-density lipoproteins as biomarker for atherosclerosis［J］．Blood Press，2010，19（3）：164-168．

［9］ Huang TT，Zou Y，Corniola R．Oxidative stress and adult neurogenesis--effects of radiation and superoxide dismutase deficiency［J］．Semin Cell Dev Biol，2012，23（7）：738-744．

Objective：To investigate the anti-oxidative stress effect of paeonol （PA） against atherosclerosis（AS）in rats.Methods：Rats model of AS was established by administration of high-fat diet and vitamin D3（i.p.）.Rats were divided into 6 groups（n = 10）at random，namely normal，model，positive（simvastatin，10 mg/kg）and PA high，medium and low dose groups（20，10 and 5 mg/kg，respectively）. After 4 weeks of oral treatment，the aortic pathologic changes were observed under microscope and graded.The sera of all rats were collected to determine the SOD activities and MDA contents.Results：Administration of PA improved the severity of aortic pathology in AS rats，and the pathologic grade of PA high dose group showed a significant difference compared with that of model group（P＜0.05）.PA （20，10 and 5 mg/kg）significantly increased the SOD activities（P＜0.01）and reduced the MDA contents（P＜0.05 or P＜0.01）in serum of AS rats compared to the model group.Conclusion：Therapeutic effect of PA against AS maybe due to its action on SOD activities and MDA contents.

paeonol；atherosclerosis；SOD；MDA

R255.741.4

B

1004-2814（2014）11-0988-03

2014-07-02

騫秀芳