獼猴B病毒抗體的檢測報告

王計平，鄔繼文，呂龍寶

（中國科學院昆明動物研究所，云南 昆明650223）

非人類靈長類動物在世界各國生物醫(yī)學研究中的作用日趨重要。猴皰疹病毒1型（B病毒）可以使人產生致死性感染[1]。B病毒感染獼猴、食蟹猴非常普遍，而且常常不伴有臨床癥狀或者潛伏感染。感染動物黏液、皮膚、口腔、生殖道分泌物均可傳染給其他動物。目前用于檢測實驗用猴群中B病毒感染主要是用人單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）作為抗原片、玻片免疫酶（IEA）檢測抗體的方法。曾有報道[2]，按照實驗動物質量國家標準ELISA檢測方法用于猴B病毒抗體檢測。

隨著生物醫(yī)學的迅速發(fā)展，無B病毒感染靈長類動物需求量越來越大，本文采用HSV-1為抗原，IEA檢測抗體方法對我中心飼養(yǎng)768只，2～4歲齡獼猴B病毒抗體進行檢測。檢出482只每隔2周連續(xù)檢測4次及每年檢測1次，連續(xù)檢測3年B病毒感染1.05%，說明B病毒抗體陰性猴再次感染率不高。用人單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1），猴皰疹病毒為抗原，采用IEA和ELISA檢測方法抽檢，72只B病毒抗體陽性母猴所生仔猴，5～6個月齡斷奶單籠關養(yǎng)后，檢測B病毒抗體，有3只仔猴B病毒抗體陽性，69只仔猴B病毒抗體陰性，陰性率為98.6%，說明母猴抗體陽性垂直傳染給仔猴幾率極低[3-5]。

1 材料與方法

1.1 大籠飼養(yǎng)健康實驗獼猴768只，雌雄各半。129只生育母猴，其中72只B病毒抗體陽性母猴生仔猴，單籠關養(yǎng)5～6月齡。

1.2 靜脈采血，3 000 r／min離心8min，分離血清。56℃、滅活30min，用樣品稀釋液1∶10稀釋，待查。

1.3 HSV-1抗原片，購自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所。

1.4 B病毒ELISA檢測試劑盒，購自珠海海泰生物制藥有限公司。

1.5 其余試劑均采用國產AR級。

1.6 B病毒ELISA檢測試劑盒。結果判定：以空白孔調零，450 nm波長測A450＜0.15為陰性，A450=0.1-0.2為可疑，A450＞0.21為陽性。

1.7 猴B病毒抗體檢測，以HSV-1為抗原，用IEA檢測法，檢查猴B病毒抗體，結果判定按說明書的指導進行。

表1 自繁殖仔猴B病毒抗體檢測

2檢測結果

2.1 獼猴B病毒檢查結果。用IEA方法檢查768只，B病毒抗體陰性482只，陽性286只。

2.2 將482只B病毒抗體陰性獼猴分群單獨飼養(yǎng)，1個月后每隔兩周用IEA法進行B病毒抗體檢測。于2005年3月1日、3月15日、3月30日和4月15日分4次檢測結果表明，第1次檢出B病毒抗體陽性猴3只，第2、第3次各檢出4只，第4次檢出6只。檢出率分別0.62%；0.83%；1.26%

2.3 將476只B病毒抗體陰性獼猴大籠群養(yǎng)，每籠8～10只。2006年3月至2008年3月每隔1年用IEA法進行B病毒抗體檢測，連續(xù)檢測3年。3次檢測結果發(fā)現(xiàn)，第1年檢出B病毒抗體陽性猴3只，檢出率0.6%；第2、第3次各檢出5只，檢出率1.05%。每次檢出B病毒抗體陽性動物隔離關養(yǎng)，次年再檢為陽性。3年的連續(xù)檢測，陽性感染率1.05%。為日后群養(yǎng)動物提供可行依據。

2.4 用HSV-1抗原片IEA方法和ELISA，抽檢129只母猴所生仔猴，其中72只B病毒抗體陽性母猴所生仔猴，5～6個月齡離乳單籠關養(yǎng)，每隔1周檢測1次，共檢3次。B病毒檢測結果（見表1）。其中1只B病毒抗體為陽性，71只B病毒抗體為陰性，陰性率為98.6%。

3討論

用人單純皰疹病毒1型（HSV-1）為抗原[6]，玻片免疫酶檢測抗體的方法，對動物研究所動物中心飼養(yǎng)獼猴B病毒抗體陰性動物分區(qū)，起到了很大促進作用。該方法方便快捷，而且普通實驗室條件就可進行。用該方法檢測B病毒抗體陰性動物，得到日本食品農醫(yī)藥品安全評價中心認可。他們用這些動物進行藥理、病理試驗。

B病毒抗體陰性482只動物，進行4次檢測，第1次檢出9只B病毒抗體陽性動物，檢出率1.88%。第2次、第3次各檢出11只，檢出率分別為2.28%、2.28%。第4次檢出12只B病毒抗體陽性動物，檢出率2.49%。檢測是否表明B病毒感染的動物未排毒，因為我們僅采用一種檢測方法還須進一步證實。另外由于飼養(yǎng)環(huán)境改變和動物健康、應急等因素，也可能導致病毒活化，出現(xiàn)抗體陽性。Weir[7]報道，B病毒潛伏感染，發(fā)生病毒活化和排毒，常不伴有臨床癥狀。感染猴子雖然從黏膜排毒，但并不經常排泄B病毒，通常排毒時間需要幾小時。他們對常規(guī)動物檢疫、繁殖、剖腹產、正常分娩等是否會引起血清陽性猴子病毒的排泄和傳播也進行研究。發(fā)現(xiàn)16只血清陽性猴仔在剖腹產或正常分娩后每周檢疫1次持續(xù)3周的檢疫中，也沒有排毒。

HSV-1作為抗原，用IEA和ELISA方法，對72只B病毒抗體陽性母猴和離乳后5～6月齡單籠關養(yǎng)仔猴進行檢測。檢測結果71只B病毒抗體陰性，陰性率98.6%。表明母猴直接傳播給仔猴的幾率極低。饒軍華[8]等報道，仔猴體內攜帶B病毒母源抗體隨著月齡變化，5月齡時B病毒水平下降至最低水平，之后病毒抗體水平逐漸上升。這也給我們提供仔猴最佳的離乳時間。采用兩種方法檢測72只仔猴和72只B病毒抗體陽性母猴，3次檢測結果都一致，表明兩種方法都可行，用HSV-1抗原片IEA方法更簡單快捷，結果說明母猴抗體陽性垂直傳染給仔猴幾率極低。

[1]田克恭.實驗動物病毒性疾病[M].北京：農業(yè)出版社，1992．

[2]賀爭鳴，衛(wèi)禮，鞏薇，等.猴B病毒抗體ELISA檢測方法的建立和研究成果[J].中國實驗動物學報，2003，11（3）：161-164．

[3]饒軍華，劉曉明，田克恭，等.獼猴SPF種群的建立及保持過程中B病毒抗體監(jiān)測研究[J].中國比較醫(yī)學雜志，2003，13（5）：294-296.

[4] Weigler B J，Roberts JA，Hird DW，etal.A cross sectionalsur?vey for B virus antibody of group housed rhesusmacaques[J].Lab Anim Sci，1990，40：257-261．

[5] 饒軍華，王海英，劉曉明，等.B病毒感染的預防和治療方法[J].中國比較醫(yī)學雜志，2005，15（4）：240．

[6]李紹東，周亞敏，段幸生，等.猴B病毒相關抗體及B病毒抗體檢測的比較研究[J].中國實驗動物學報，1995，3（2）：94-97．

[7] Weir E C，et al.Infresvirus simiae from seropositive macaques Lab Anim Sci[J].1993Dec 1；42（6）：541-544．

[8]饒軍華，劉曉明，王海英，等.人工馴養(yǎng)條件下食蟹猴B病毒抗體水平變化規(guī)律研究[J].中國實驗動物學報，2007，17（1）：12-14．