獺兔源性大腸桿菌對小鼠的致病性研究

王艷萍，董 林，徐倩倩，郭時金，沈志強(qiáng)

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州256600；2.山東綠都安特動物藥業(yè)有限公司，山東 濱州256600）

大腸桿菌O123是主要寄生于人和動物腸道內(nèi)的一種細(xì)菌，本文中大腸桿菌O123是由規(guī)?；H兔養(yǎng)殖場分離的一株致獺兔大腸桿菌性腹瀉的一種大腸桿菌，該菌主要引起的幼兔、仔兔腸道傳染病，以水樣、膠凍樣糞便和嚴(yán)重脫水為主要特征。

1 試驗材料

1.1 試驗菌株 兔源大腸桿菌，分離自山東省濱州市某大型獺兔養(yǎng)殖場，經(jīng)山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院鑒定為大腸桿菌O123。

1.2 實驗動物 小鼠60只，體重18～22 g，購自山東省實驗動物中心。

2 試驗方法

2.1 小鼠致病性試驗 將60只小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只。把大腸桿菌O123進(jìn)行增菌培養(yǎng)，使其含菌量為3.4×108、1.7×108、0.85×108、0.425×108和0.225×108，按0.5mL/只腹腔接種小鼠，對照組接種營養(yǎng)肉湯，攻毒后，連續(xù)觀察7 d，記錄精神狀態(tài)、飲欲、食欲、發(fā)病及死亡情況。

2.2 臨床觀察 對感染后的小鼠每日觀察臨床癥狀，對因發(fā)病而死亡小鼠立刻剖檢，存活小鼠7日后剖檢，觀察病理變化，無菌取心、肝、脾、肺等在麥康凱平板上劃線進(jìn)行病原分離，于37℃溫箱培養(yǎng)24～48 h后進(jìn)行革蘭染色、鏡檢，觀察所分離菌株是否為攻毒細(xì)菌。若是，則證明該細(xì)菌具有致病性。

2.3 病理組織學(xué)檢查 將心、肝、脾、肺、腎、腸等器官放入福爾馬林溶液固定，經(jīng)酒精梯度脫水、石蠟包埋、切片、H.E.染色，顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)觀察[1]。

3 結(jié)果與分析

3.1 臨床癥狀表現(xiàn) 以大腸桿菌O123腹腔注射小鼠，約半小時后出現(xiàn)精神委靡、食欲不振、眼瞼粘連、扎堆等現(xiàn)象，對照組小鼠沒出現(xiàn)明顯臨床癥狀。

3.2 死亡情況 12 h后出現(xiàn)陸續(xù)死亡，第1組全部死亡，第2組死亡率7只，第3組死亡3只，第4組死亡1只，第5組全部存活。對照組小鼠沒有出現(xiàn)死亡。取攻毒死亡小鼠心、肝、脾、肺、腸系膜淋巴結(jié)等在麥康凱平板上劃線培養(yǎng)，涂片染色，鏡檢，均發(fā)現(xiàn)所接種細(xì)菌。

3.3 剖檢觀察 剖檢注射兔大腸桿菌O123的小鼠小腸黏膜水腫、變薄，有出血點，其他臟器未見明顯眼觀病變（見中插彩版圖1）。

3.4 組織病理學(xué)觀察 十二指腸廣泛充血、出血，腸上皮細(xì)胞變形和壞死，絨毛變短、脫落，腸腔內(nèi)有大量脫落的上皮細(xì)胞，基底膜下層水腫（見中插彩版圖2）。

4 討論

2011年，李基棕[2]做了豬場環(huán)境大腸桿菌對小鼠的致病性研究，發(fā)現(xiàn)，小鼠出現(xiàn)精神委靡、拉稀、眼簾黏連、消瘦、被毛蓬亂等臨床癥狀，致死率達(dá)51.3%，其中來源于污水和空氣的樣本菌株對小鼠的致死率最高達(dá)66.7%。剖檢因攻毒死亡小鼠發(fā)現(xiàn)，肝臟腫大、邊緣呈暗紫色、脾臟腫大、十二指腸水腫等病變。病理組織學(xué)觀察可見，肺臟出現(xiàn)毛細(xì)血管充血、肺氣腫及肺泡間隔增寬，心肌纖維排列紊亂、斷裂，肝細(xì)胞腫大、變性及肝竇出血，十二指腸腸絨毛脫落等病變，上皮細(xì)胞變性壞死。說明，豬場環(huán)境大腸桿菌對小鼠致病性較強(qiáng)，以小鼠建立動物模型研究其致病機(jī)制對大腸桿菌病的診斷和防治具有重要意義。

本試驗以兔源大腸桿菌對昆明系小鼠攻毒結(jié)果，發(fā)現(xiàn)除十二指腸出現(xiàn)病變外，其余各器官均出現(xiàn)明顯病理變化，說明兔源大腸桿菌O123適合用于腹瀉模型的制作。

圖1 小鼠剖檢

圖2 十二指腸組織

5 結(jié)論

兔源大腸桿菌以腹腔注射0.5mLO123可用于制作小鼠腹瀉模型。

[1]歐德淵，李詩舉，王群輝，等.高致病性豬藍(lán)耳病的病理學(xué)觀察[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2008，32（6）：3-4.

[2]李基棕，周碧君，王開功，等.豬場環(huán)境大腸桿菌對小白鼠的致病性研究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，6（39）：147-149.