中國(guó)雞群禽呼腸孤病毒抗體的檢測(cè)與分析

靳繼惠，文 楚，邵夢(mèng)瑜，趙 燁，于曉慧，袁希民，張立新，張嘉棟，鹿建山，張洪昌，甘孟侯，趙繼勛，呂春梅，何 佩，趙麗莉，秦秀慧，才學(xué)鵬，張國(guó)中

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀100193；2.北京康牧獸醫(yī)藥械中心，北京 海淀100085；3.中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽100125）

禽呼腸孤病毒屬于呼腸孤病毒科（Reovir?dae）、正呼腸孤病毒（Orthoreovirus），為分節(jié)段的雙鏈RNA病毒。病毒粒子無囊膜，呈二十面體對(duì)稱并具有雙層衣殼結(jié)構(gòu)。1954年，F(xiàn)ahey和Craw?ley首次從患慢性呼吸道病的雞呼吸道內(nèi)分離到病毒。ARV感染呈全球性分布，可感染雞、火雞及其他多種禽類[1]。ARV主要引起肉雞的病毒性關(guān)節(jié)炎和腱鞘炎，還可致患雞生長(zhǎng)抑制、飼料轉(zhuǎn)化率低以及免疫抑制造成繼發(fā)感染增加等[2-3]。

1985年王錫堃證實(shí)了我國(guó)雞群發(fā)生由ARV引起雞病毒性關(guān)節(jié)炎[4]。近年來國(guó)內(nèi)外ARV的感染情況呈現(xiàn)加重趨勢(shì)，臨床癥狀越來越多樣化，不同類型雞群均有疑似ARV感染情況存在，主要表現(xiàn)為腿和關(guān)節(jié)疾病、生長(zhǎng)不良、腺胃腫等，ARV感染雞群引起的經(jīng)濟(jì)損失越來越受到養(yǎng)禽業(yè)者的廣泛關(guān)注[5-6]。近幾年國(guó)內(nèi)對(duì)部分省市ARV的血清學(xué)調(diào)查有一些報(bào)告[7-11]，而在全國(guó)范圍內(nèi)大規(guī)模的進(jìn)行ARV抗體檢測(cè)卻鮮有報(bào)道。對(duì)我國(guó)雞群開展較全面的ARV抗體監(jiān)測(cè)、了解其抗體變化及感染情況十分必要。

國(guó)內(nèi)目前普遍采用ELISA方法檢測(cè)ARV抗體，該方法敏感性高、特異性強(qiáng)，適合大規(guī)模血清樣本的檢測(cè)。為了解我國(guó)雞群的ARV抗體水平及其變化規(guī)律，本研究應(yīng)用商品化的ARV抗體ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)我國(guó)19個(gè)省市的不同類型雞群進(jìn)行了ARV抗體的檢測(cè)與分析，以期為養(yǎng)禽生產(chǎn)中正確認(rèn)識(shí)和科學(xué)防控ARV感染奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 血清樣本 2010年1月至2013年6月間來自全國(guó)19個(gè)省市393個(gè)不同類型（肉雞、肉種雞、蛋雞、蛋種雞）雞群的血清樣本17 058份，包括商品肉雞血清3 497份、肉種雞血清12 424份、商品蛋雞血清91份、蛋種雞血清514份、麻雞血清93份、父母代麻雞血清190份、父母代蘆花雞血清121份、三黃雞血清60份、嶺南黃種雞血清48份和土雞血清20份。

1.2 檢測(cè)試劑盒 禽呼腸孤病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒為美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品，購(gòu)自北京愛德士元亨生物科技有限公司，檢測(cè)結(jié)果以ELISA抗體效價(jià)大于396判為ARV抗體陽性。

1.3 血清抗體的檢測(cè) 所有血清樣品均利用ARV抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，具體操作方法和判定標(biāo)準(zhǔn)均按參照試劑盒說明書進(jìn)行，樣品檢測(cè)工作由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜禽疫病診斷中心完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 ARV抗體檢測(cè)總體情況 本次檢測(cè)的393個(gè)雞群包括106個(gè)非免疫雞群和287個(gè)免疫雞群，共檢測(cè)樣本17 058份，其中陽性樣本15 680份，總體陽性率為92.83%。非免疫雞群共3 965份血清樣本檢測(cè)出2 963份為陽性，陽性率為74.72%。免疫雞群共13 093份血清樣本檢測(cè)出12 897份血清為陽性，陽性率為98.50%，具體檢測(cè)結(jié)果如表1所示。

檢測(cè)的非免疫雞群血清樣品中ARV抗體陽性率較高，表明在非免疫雞群中ARV感染較為普遍。圖1顯示的是某非免疫商品肉雞群不同日齡ARV抗體變化，該雞群ARV抗體呈現(xiàn)明顯的高-低-高的典型變化，1日齡時(shí)由于母源抗體的普遍存在，雞群ARV抗體水平較高，21日齡時(shí)母源抗體已逐漸消失，雞群ARV抗體多為陰性，隨后在35日齡和42日齡雞群ARV抗體水平呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，表明該雞群發(fā)生了ARV感染。圖2顯示有ARV感染臨床表現(xiàn)（腿和關(guān)節(jié)疾?。┎糠址敲庖唠u群的抗體檢測(cè)情況。

表1 免疫和非免疫雞群ARV抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 白羽商品肉雞ARV抗體檢測(cè)情況

圖2 部分發(fā)病雞群ARV抗體檢測(cè)情況

檢測(cè)免疫雞群的ARV抗體陽性率為98.50%，并且存在一定比例的免疫雞群抗體水平偏高的現(xiàn)象。雞群免疫抗體ELISA滴度通常介于2 000～15 000之間，監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，部分雞群ELISA抗體滴度值可達(dá)到20 000以上并且臨床存在ARV感染的臨床表現(xiàn)，表明部分免疫雞群仍存在ARV感染情況。圖3顯示免疫肉種雞群ARV抗體的消長(zhǎng)情況。

圖3 白羽肉種雞群ARV抗體消長(zhǎng)情況

2.2 不同地區(qū)雞群ARV抗體檢測(cè)結(jié)果分析 對(duì)來自不同地區(qū)的血清樣本檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行分析表明，除了山東省和廣東省外，其他各個(gè)省市的樣本陽性率均在90%以上，其中黑龍江和寧夏兩省的樣本陽性率均達(dá)到了100%，而陽性率最低的山東和廣東兩省也分別達(dá)到了75.31%和87.87%，具體結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明，我國(guó)不同地區(qū)雞群中ARV抗體的陽性率普遍較高。

表2 不同地區(qū)雞群ARV抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同類型雞群ARV抗體檢測(cè)結(jié)果分析 商品肉雞、肉種雞、商品蛋雞和蛋種雞的ARV抗體陽性率分別為72.66%，98.48%，93.40%和95.53%，結(jié)果如表3所示，結(jié)果表明，我國(guó)不同類型雞群均具有較高的ARV抗體陽性率，其中商品肉雞群和部分商品蛋雞群均為非免疫雞群，同樣表明不同類型雞群ARV感染較為普遍。

表3 不同類型雞群ARV抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 部分地方品種雞群ARV抗體檢測(cè)結(jié)果分析

我國(guó)不同地區(qū)的鐵腳麻雞、黃雞、土雞和嶺南黃雞ARV抗體平均ELISA滴度均在2 000以上，其中廣西省黃雞的ARV平均ELISA抗體滴度達(dá)到了12 000以上，具體檢測(cè)結(jié)果如圖4所示。結(jié)果表明，我國(guó)地方品種雞群也普遍存在ARV感染。

圖4 部分地方品種雞群ARV抗體檢測(cè)情況

3 討論

2006年崔治中等采用ELISA方法對(duì)山東、吉林、北京、河南、遼寧5個(gè)省市8個(gè)公司不同品種不同日齡雞群進(jìn)行了ARV抗體檢測(cè)，在檢測(cè)的75個(gè)雞群中有74個(gè)雞群為ARV抗體陽性（96%），其中1 764份雞血清的ARV平均抗體陽性率為75.1%，研究表明，我國(guó)多數(shù)雞群中都存在著ARV的感染[9]。2011年，趙圓圓等采用ELISA方法進(jìn)行了安徽省ARV感染的血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明，所有被檢的雞群都存在不同程度的抗體陽性率，ARV感染在安徽雞群中已經(jīng)普遍存在[11]。

本研究首次在全國(guó)范圍內(nèi)對(duì)不同類型雞群ARV抗體進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)，所有的血清樣本都來自中國(guó)大陸的主要養(yǎng)禽生產(chǎn)地區(qū)。檢測(cè)結(jié)果表明，采樣的19個(gè)省市、393個(gè)雞群的17 058份雞血清中，共檢測(cè)出15 680份ARV抗體陽性血清，平均陽性率為92.83%，其中免疫雞群的陽性率為98.50%，非免疫雞群的陽性率為74.72%。部分免疫雞群存在的抗體偏高現(xiàn)象、非免疫雞群存在較高的抗體陽性率表明我國(guó)雞群ARV感染普遍存在。臨床上也存在部分雞群有疑似ARV感染的表現(xiàn)，比如生長(zhǎng)不良、腿和關(guān)節(jié)疾病等，并且分離出了病原，分離的病原和臨床發(fā)生疾病的關(guān)系問題還需要進(jìn)一步分析和探討[8]。在我們采樣的省份中，除了山東省和廣東省外，其他各個(gè)省市的血清陽性率均在90%以上，并且不同類型雞群的血清陽性率及部分地方品種雞群的ARV抗體水平也較高。這些結(jié)果表明，ARV抗體水平與雞群的地域分布、雞群類型和品種關(guān)系不大，ARV感染在我國(guó)雞群中較為普遍。

ARV可水平傳播亦可經(jīng)卵垂直傳播，雞群由于感染了ARV會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的免疫功能降低、對(duì)其他傳染病的易感性增加，同時(shí)該病毒在感染雞群后多呈現(xiàn)亞臨床感染，誘發(fā)非特異性并發(fā)癥或免疫抑制，導(dǎo)致其處于免疫抑制狀態(tài)，當(dāng)對(duì)雞群進(jìn)行新城疫和高致病性禽流感等疫苗免疫時(shí)易于造成免疫失敗[12]。本研究表明，我國(guó)雞群中ARV的感染可能普遍存在，并且可能潛在對(duì)我國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成了威脅。本研究?jī)H對(duì)國(guó)內(nèi)雞群ARV抗體情況進(jìn)行了檢測(cè)分析，從血清學(xué)水平了解了我國(guó)雞群的ARV感染的初步情況，要想進(jìn)一步搞清楚ARV在我國(guó)雞群的危害和流行狀況，還應(yīng)繼續(xù)開展ARV感染的分子流行病學(xué)調(diào)查及免疫保護(hù)分析研究。

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