鴨病毒性肝炎研究進展

焦鳳超 李迎曉 陳宏智 〈信陽農(nóng)林學院動物科學系 河南 信陽 464000〉

鴨病毒性肝炎（Duckviral hepat it is,DVH），是由鴨肝炎病毒（Duckhep at it is virus,DHV）引起的一種高度致死性傳染病。本病常年發(fā)生，自然狀態(tài)下主要侵害4周齡內(nèi)的雛鴨，發(fā)病急、病程短、傳播快、發(fā)病率和死亡率高。臨床表現(xiàn)痙攣、抽搐和角弓反張等神經(jīng)癥狀，病理變化以肝腫脹和出血為特征，常造成重大的經(jīng)濟損失，嚴重威脅著養(yǎng)鴨生產(chǎn)。

本病于1945年最先由美國報道，Levine（1950）首次用雞胚分離到了病毒，隨后加拿大、意大利、英國、法國、印度和日本等國相繼報道了本病。黃均建（1963）在我國首先報道DHV的存在，后陸續(xù)在北京、浙江和福建等多個省市、地區(qū)發(fā)生和流行。本文主要就鴨病毒性肝炎血清型、分類、診斷方法及預(yù)防和治療等方面進行簡要綜述。

1 血清型及其分類

鴨肝炎病毒（Duckhepat it is virus,DHV）是鴨病毒性肝炎（Duckviralhepat it is,DVH）的病原，過去曾分為DHV-1、DHV-2和DHV-33種獨立的血清型。目前已證實DHV-1屬于小RNA病毒科；而DHV-2和DHV-3均屬于禽星狀病毒，應(yīng)從DHV的血清型中排除（Todd等，2009）。

Sandhu等（1992）首次分離到了DHV-1的變異株DHV-1 a，并通過雞胚交叉中和試驗證實DHV-1a與典型的DHV-1存在部分交叉反應(yīng)。林世棠（1996）報道了我國也存在DHV-1變異株，其血清中和試驗結(jié)果與Sandhu得到的結(jié)果相似。隨后，許多學者先后報道和證實了新型DHV(N-DHV)的流行（蘇敬良等，2002；鄭獻進等，2006；劉建等，2004；霍建梅等，2007；范書才等，2009）；研究者分別在我國臺灣和韓國鑒定出DHV的新血清型，暫稱之為“臺灣新型”和“韓國新型”，它們均不與 DHV-1產(chǎn)生交叉中和反應(yīng)（Kim等，2007；Tseng等，2007）。

微RNA病毒科研究小組建議在微RNA病毒科中增設(shè)禽肝炎病毒屬(Avihepatovirus)鴨甲型肝炎病毒 (Duck hepat it is av irus，DHAV)種，并將DHV-1和N-DHV歸屬其中。Oberste等（1999）通過對人腸病毒(Humane nteroviruses)VP1基因部分序列的同源性分析比較，建立了一種血清型分型標準：核苷酸序列相似性≥75%和/或推導的氨基酸序列相似性≥88%的毒株可判定為同一血清型。

袁率珍等（2010）應(yīng)用標準DHV病毒Ⅰ型 (DHV-1)抗血清和新型DHV(N-DHV)抗血清對國內(nèi)分離的7株DHV進行了血清中和試驗。同時，參照同屬微RNA病毒的人腸病毒的血清型分型標準對國內(nèi)分離的9株病毒的抗原相關(guān)VP1基因進行分型。研究結(jié)果表明，依據(jù)VP1基因序列相似性進行的血清型分型結(jié)果與依據(jù)抗原性鑒定進行的血清型分型結(jié)果一致。目前我國存在DHV-1和N-DHV 2種獨立的血清型，但尚未見血清亞型的流行。

2 免疫學診斷方法

血清學方法是診斷DHV-1的重要方法，主要包括中和試驗、凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、熒光抗體、膠體金和免疫組化等方法。

2.1 中和試驗

Levine等（1950）最早將病毒中和試驗用于DHV-1診斷鑒定。根據(jù)實驗材料的不同，分為雞胚、鴨胚、雛鴨或病毒適應(yīng)細胞中和試驗。許多學者進行了相關(guān)的研究，其中陳餛等（1996）在從鴨胚得到高純度病毒的基礎(chǔ)上設(shè)計了鴨病毒性肝炎微量中和試驗，用于進出口鴨苗的檢疫、鴨場的免疫監(jiān)測和免疫抗體消長規(guī)律的測定，與雞(鴨)胚中和試驗比較,其敏感性較高，成本低，但由于各毒株毒力強弱和對細胞的適應(yīng)性程度不同，使得微量中和試驗未能得到廣泛應(yīng)用。中和試驗雖是普遍認為的權(quán)威診斷方法，但其繁瑣、費時及成本高，不能用于快速診斷，不適于基層的推廣應(yīng)用。

另外，對于新型DHV和DHV-1型的相互鑒別診斷，目前主要也是用血清中和試驗。袁率珍等（2010）采用固定病毒稀釋血清法對采集自我國不同地區(qū)和不同時期的 PLK、YB1、YB2、YB3、YB5、HY2和HY3等9株DHV進行血清中和試驗，證明我國目前流行的DHV中存在DHV-1和N-DHV兩種血清型。

2.2 間接凝集試驗和間接凝集抑制試驗

Golubnichi等（1976）報道間接血凝試驗比中和試驗更敏感，Vashhenko（1982）用間接血凝試驗診斷DHV-1，結(jié)果表明間接血凝試驗與中和試驗的結(jié)果符合率為90%。羅函祿等（1990）報道了在獲得純化的DHV-1的基礎(chǔ)上進行間接血凝抑制試驗檢測DHV的研究。該法具有特異、靈敏、簡便和快速等優(yōu)點，可用于本病發(fā)病初期的診斷,免疫抗體效價的測定和流行病學調(diào)查等。孫泉云等（1996）將間接血凝抑制試驗與中和試驗進行了比較，陽性符合率為84.6%。由于DHV的純度要求較高，加上非特異性凝血因子的影響，以及不同批次制備的紅細胞在敏感性和穩(wěn)定性方面有波動，限制了該方法的推廣應(yīng)用。

2.3 熒光抗體試驗

熒光抗體試驗是一種快速準確診斷的方法。郭玉璞等（1984）應(yīng)用間接熒光抗體證實了北京地區(qū)流行的DHV是由DHV-1引起的。劉建（2004）采用熒光抗體法檢測感染鴨肝炎強毒后死亡鴨的腎細胞，檢測到了DHV-1的存在，為臨床上快速診斷鴨病毒性肝炎提供了一種檢測方法。

2.4 免疫膠體金

程安春等（1994）用膠體金免疫電鏡技術(shù)檢測DHV-1，而張小飛等（1997）建立了檢測DHV的斑點免疫金滲濾法(Dotimmunity goldfil trationassay,DIGFA)，該法既可定性，亦可定量，對純化DHV的最小檢測量為4.12ng/點，其敏感性為抗原斑點試驗的2倍。特異性阻斷試驗和交叉反應(yīng)試驗證明DIGFA檢測DHV具有較高的特異性。對DHV雞胚尿囊液DIGFA法檢出率為100%，對36份臨床樣本檢測陽性率為83.3%。

3 免疫預(yù)防和治療

DVH在全國各養(yǎng)鴨地區(qū)均有不同程度的發(fā)生和流行。由于DHV主要侵害3周齡以內(nèi)雛鴨，同時也可引起4～6周齡或更大周齡鴨發(fā)病，成年鴨呈隱性感染，但能排毒，再加上N-DHV的流行和傳播，這對控制本病的發(fā)生和流行是一個巨大阻礙。預(yù)防本病的首要方法是給母鴨或雛鴨接種鴨病毒性肝炎疫苗，新生雛鴨被動或主動獲得保護，鴨病毒性肝炎的疫苗主要有滅活疫苗和弱毒疫苗兩種。我國還沒有正式批準文號的DVH疫苗。

3.1 弱毒疫苗

通常認為弱毒苗的免疫效果要好于滅活疫苗。潘文石等（1980）將在北京分離的一強毒株經(jīng)雞胚傳代后制成雞胚化弱毒疫苗，免疫產(chǎn)蛋種鴨，其母源抗體保護雛鴨，獲得較好效果。張衛(wèi)紅等（1992）將這株在雞胚上傳了81代的DHV-1弱毒進行試驗，表明安全性很好，制成鴨病毒性肝炎弱毒疫苗免疫雛鴨，在免疫后5天可達100%保護指數(shù)，可持續(xù)6周。孫林珍（1992）將從巢湖麻鴨病雛肝臟懸液中分離并致弱的DHV-1弱毒A 66制備的肝炎弱毒疫苗經(jīng)不同途徑免疫1日齡雛鴨，結(jié)果顯示皮下注射組在免疫后2天即對ATCC強毒攻擊具有100%的保護率；口服組和滴鼻組在免疫5后天才能全部保護，1次飲水免疫組和2次飲水免疫組在6日齡時對強毒攻擊的保護率分別為60%和90%；用該弱毒疫苗免疫日齡雛鴨和成年鴨，免疫期分別至少為45天和6個月。

鄭獻進等（2007）將1株DHV變異株用雞胚傳了63代，培育出該變異株的雞胚化弱毒疫苗株。該苗對1日齡雛鴨安全無致病性，1日齡雛鴨免疫后，7天時的中和抗體達到高峰期，并對同型的強毒有100%的保護率，隨后中和抗體效價有所下降，但可持續(xù)到4周齡。

3.2 滅活疫苗

路振香等（2005）用白油、司本-80和硬脂酸鋁作為油相，吐溫-80和收獲的雞胚尿囊液作為水相制出油包水型油佐劑滅活疫苗，研究結(jié)果表明該油佐劑滅活疫苗安全性可靠，接種后未見異常反應(yīng)，免疫14 d后保護率可達100%。范文明等（1993）以鴨病毒性肝炎病毒1型ATCC毒株接種健康鴨胚，收集致死的全胚組織作制疫苗材料，用福爾馬林滅活，以麩氨酸鈉終止其作用。先后試制疫苗11批，在實驗室免疫雛鴨71只，經(jīng)強毒攻擊后，總的保護率為90.4%，本疫苗免疫雛鴨3 d后可產(chǎn)生較堅強的免疫力。陳克強等（2000）用雛鴨病毒性肝炎病毒型上海地區(qū)毒株，以蜂膠為佐劑，制成雛鴨病毒性肝炎蜂膠滅活苗。經(jīng)實驗室和現(xiàn)場初步試驗，顯示對雛鴨具有良好的安全性和免疫原性。每羽接種0.5m L，7d后攻毒的總保護率為85.7%，保護指數(shù)為82.1%。

3.3 聯(lián)合疫苗

在生產(chǎn)實踐中為減少工作量和免疫接種對鴨的應(yīng)激，常將疫苗制成二聯(lián)疫苗或多聯(lián)疫苗，達到一針預(yù)防多種疾病的目的。張大丙（1995）將鴨肝炎病毒和鴨瘟病毒的雞胚弱毒制成了二聯(lián)疫苗，免疫1日齡易感雛鴨，經(jīng)攻毒試驗和中和試驗，雛鴨5日齡時能分別抵抗各自強毒攻擊，說明這2株弱毒在同一鴨體內(nèi)都能迅速產(chǎn)生免疫力，互不干擾；程安春等（1996）對鴨瘟-鴨病毒性肝炎二聯(lián)疫苗的配比、穩(wěn)定性、保護條件、保存期、攻毒試驗、免疫后抗體消長規(guī)律及二聯(lián)疫苗的田間試驗、免疫途徑等進行了比較全面的研究，也證明了二聯(lián)疫苗免疫成鴨的效果與各自單疫苗基本一致。

鑒于目前的流行和發(fā)病形式，篩選出毒力弱、免疫原性好的DHV-1和N-DHV毒株制成單苗混合疫苗或聯(lián)苗進行區(qū)域性或全國性預(yù)防是當務(wù)之急。

3.4 高免蛋黃抗體

由于鴨病毒性肝炎的發(fā)病日齡較早，給新生雛鴨進行免疫接種往往難以得到可靠的免疫效果，因此，在臨床上多采用給種母鴨接種疫苗，雛鴨依靠體內(nèi)獲得的卵黃抗體來預(yù)防雛鴨病毒性肝炎的發(fā)生或用高免蛋黃抗體治療已經(jīng)感染了鴨病毒性肝炎的雛鴨。于洪勛等（2004）利用感染鴨病毒性肝炎死亡雛鴨的肝臟經(jīng)甲醛滅活制成滅活疫苗，免疫產(chǎn)蛋雞2次，收集再免后的高免蛋，提取卵黃抗體，大規(guī)模地用于防治鴨病毒性肝炎，效果良好。

雖然市場上的產(chǎn)品很多，但截至目前，國內(nèi)僅有鴨倍舒獲得了鴨病毒性肝炎精制蛋黃抗體的批準文號，但僅能用于預(yù)防和治療DHV-1的感染，而對于N-DHV的治療和預(yù)防效果仍然存在疑問。

4 展望

隨著國內(nèi)外對DHV的分子生物學和免疫學研究的不斷深入，DHV血清型/基因型分布將逐漸清晰，必將出現(xiàn)越來越多有效的疫苗和治療產(chǎn)品，這對于有效控制我國鴨病毒性肝炎的發(fā)生和流行具有重要意義。