影響羊胚胎移植受胎率的主要因素

袁東波尹念春陳家樹

1.四川省南充市動物疫病預(yù)防控制中心，四川南充 637000；2.四川省遂寧市動物疫病預(yù)防控制中心，四川遂寧 629000；3.四川省南充市農(nóng)牧局，四川南充 637000

影響羊胚胎移植受胎率的主要因素

袁東波1尹念春2陳家樹3

1.四川省南充市動物疫病預(yù)防控制中心，四川南充 637000；2.四川省遂寧市動物疫病預(yù)防控制中心，四川遂寧 629000；3.四川省南充市農(nóng)牧局，四川南充 637000

近年來，為大力發(fā)展養(yǎng)羊產(chǎn)業(yè)，豐富我國優(yōu)質(zhì)羊品種資源，減少從國外直接引種的風(fēng)險，羊胚胎移植技術(shù)廣泛應(yīng)用于養(yǎng)羊生產(chǎn)實踐，在羊純種快速擴繁中取得了良好的效果，然而羊胚胎移植受胎率一直是制約羊純種快速擴繁的重要因素，受到大家的關(guān)注。本文針對影響羊胚胎移植受胎率的主要因素進行了分析。

1 供卵及胚胎質(zhì)量

供卵及胚胎質(zhì)量對移植能否成功關(guān)系密切。即使密切同期化的供受體，如果移植了異常胚胎，如細胞卵裂不規(guī)則、細胞固縮、細胞發(fā)育遲緩等，移植后也會失敗。因此，在胚胎移植過程中，對胚胎質(zhì)量的鑒定十分重要。

1.1 供體羊的年齡不同，卵的質(zhì)量不同

成年母羊排卵移植后的成功率大于育成羊。在體外培養(yǎng)條件下，成年母羊的胚胎比初情期前幼齡母羊（5～7月齡）的胚胎正常發(fā)育的比例大，發(fā)育快，有較強的生命力。

1.2 成年母羊處理前的激素內(nèi)環(huán)境

在性周期的第16天注射孕馬血清促性腺激素（PMSG）后獲得的卵，有90%以上為受精卵，而在性周期的第10天注射PMSG后獲得的卵，其受精卵則低于90%。所以成年母羊處理前的激素內(nèi)環(huán)境決定排卵時的卵泡刺激發(fā)生時間。當(dāng)卵泡受刺激時，孕酮水平及其存在的時間長短，可能是決定卵質(zhì)量的重要因素。

1.3 誘發(fā)超數(shù)排卵時的卵巢反應(yīng)

超數(shù)排卵后卵受精率低，則胚胎采集率和移植妊娠率也低。受精率低經(jīng)常發(fā)生在某一頭供體所排的卵中，甚至出現(xiàn)所有卵都不受精的現(xiàn)象。卵子不受精的原因，可能由于超數(shù)排卵時引起母畜內(nèi)分泌紊亂，排出不成熟的卵子。就胚胎質(zhì)量而言，每個卵巢排8～10個卵為合適。

1.4 哺乳期泌乳母羊排卵數(shù)較少

帶羔哺乳母羊的胚胎比干乳期母羊胚胎的生命力低，把這兩種母羊的胚胎相互交換移植后結(jié)果表明，不育的原因出現(xiàn)在供體。

1.5 不同個體對激素的反應(yīng)差異

在相同的飼養(yǎng)管理條件下，當(dāng)注射同等劑量的促性腺激素時，有的個體超排效果很好，排卵很多；有的起不到超數(shù)排卵的效果，只排1個卵；有的沒有發(fā)情表現(xiàn)，甚至不排卵。從胚胎培養(yǎng)實驗表明，不同個體的卵，雖處于相同的發(fā)育階段，且在同樣的培養(yǎng)條件下，但卵的活力差異大。經(jīng)驗認為一只供體經(jīng)過超數(shù)排卵處理后，當(dāng)采集到較多的受精卵，且卵的發(fā)育階段較為一致時，把這些胚胎移植后，常可獲得較高的受胎率，對這樣的母羊可重復(fù)采卵和移植。

1.6 季節(jié)對超排效果和卵質(zhì)量的影響

實驗表明秋末冬初效果最佳，早春次之，夏季最差。

2 胚胎發(fā)育階段與移植部位

2.1 受體的妊娠率隨移植胚胎日齡的增加而相應(yīng)提高

3日齡胚胎的移植妊娠率最低，5日齡以后的胚胎對逆境（如溫度的驟變）的耐受力較好。有研究表明，實際胚齡（或者說是子宮環(huán)境）4日齡胚胎移植到受體發(fā)情3天的子宮中比3日齡胚胎移植到發(fā)情3天的子宮中有更高的胚胎存活率。

2.2 母羊發(fā)情的生殖道內(nèi)部形態(tài)和生理機能變化

羊的早期胚胎在輸卵管內(nèi)運行滯留的時間約72 h左右，所以72 h前采到的早期胚胎應(yīng)移入輸卵管內(nèi)；超過72 h，胚胎進入子宮，由子宮采到的早期胚胎應(yīng)移入子宮內(nèi)。有實驗指出為了提高輸卵管移植胚胎的生存率，滿足在發(fā)情后72 h或更晚時間采胚、受體發(fā)情開始時間與供體相差不超過早晚12 h、移植8細胞胚等條件，大約75%的受體能夠成功妊娠。

2.3 胚胎移植的部位

在胚胎移植中，要根據(jù)移入胚胎的日齡、原來所處的部位來決定移植的部位。一般移植部位往往和采集胚胎的部位相對應(yīng)。即從輸卵管采集的胚胎移植到輸卵管，從子宮角采集的胚胎移植到子宮角，才能獲得較好的移植結(jié)果。胚胎移植到輸卵管時，移植到輸卵管深部受胎率高。胚胎移植到子宮角時，5～6日齡的胚胎移植到輸卵管一側(cè)子宮角接合部附近（即子宮角項部）比子宮角中部有較高的存活率，以后隨日齡的增加，胚胎移植的部位可以相應(yīng)移向子宮角基部。胚胎移植到子宮，達到較好受胎率的同步差范圍較輸卵管寬。移植子宮的胚胎，一般是桑椹胚和囊胚。在母羊發(fā)情后的第7天，孕酮在卵巢靜脈內(nèi)的濃度達到最大濃度，并相對恒定地維持到第15天，因此，在母羊發(fā)情稍后時期，供體與受體將可能有一段幅度較大的同步時間，移植成功率較大。

3 胚胎移植數(shù)量

移植時胚胎的數(shù)量對受胎率有很大的影響。一般雙胚移植比單胚移植可以獲得更高的受胎率。

4 胚胎的體外保存

鮮胚移植時，胚胎從供體取出后到移植給受體之前，在體外有短暫停留和保存的時間，這期間胚胎及其保存液應(yīng)放在密閉的容器內(nèi)，防止保存液的蒸發(fā)和污染，維持保存液與胚胎之間的滲透壓和無菌，并在適宜溫度條件下保存胚胎。無論保存時間長短，要求保存后再移植的胚胎有繼續(xù)發(fā)育的能力。在體外培養(yǎng)和保存過程中，pH值的變化對胚胎的生存有較大害處。移植時胚胎在體外的溫度迅速下降，移植成功率隨之下降。受體在25～30℃環(huán)境中，移植的成功率較高，而在5～15℃環(huán)境中，移植的成功率低。

凍胚移植時，胚胎從超低溫環(huán)境（如液氮罐）中取出后要迅速放到37℃（經(jīng)驗表明解凍溫度調(diào)至38～40℃時有較好緩沖溫度變化的作用）環(huán)境中解凍，以迅速越過低溫打擊區(qū)，移植后的成功率才高。

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2014-07-10

袁東波，男，1980年生，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)碩士。