HPLC法測(cè)定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量

劉 峰

（日照市藥品檢驗(yàn)所，山東日照276800）

HPLC法測(cè)定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量

劉 峰

（日照市藥品檢驗(yàn)所，山東日照276800）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量。方法色譜柱為ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈－0.1%磷酸溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為223 nm，柱溫為30℃，流速為1 mL· min－1。結(jié)果天麻素和芍藥苷的線(xiàn)性范圍分別是0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg，平均加樣回收率分別為為98.3%，96.7%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于天麻素眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的定量測(cè)定。

天麻眩暈寧合劑；天麻素；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

天麻眩暈寧合劑屬于國(guó)家中藥保護(hù)品種，具有祛痰定眩、和胃止嘔的功效；臨床用于眩暈、惡心、嘔吐、舌淡、苔白滑等癥，尤適用于美尼爾氏綜合征。由天麻、白芍、半夏、甘草等十二味中藥組方而成。天麻、白芍為天麻眩暈寧合劑的主藥之一，天麻臨床上用于頭痛眩暈，肢體麻木，小兒驚風(fēng)，癲癇，抽搐，破傷風(fēng)等；白芍具有平抑肝陽(yáng)，養(yǎng)血收陰之功效。本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)［1～4］采用HPLC法同時(shí)測(cè)定天麻素和芍藥苷，為控制天麻眩暈寧合劑的質(zhì)量提供可靠、準(zhǔn)確快速的方法。

1 儀器與試藥

LC－20ATVP高效液相色譜儀（日本島津公司）；Agilent1200高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；XS105DU電子天平（瑞士，梅特勒－托利多）；Millipore超純水儀（美國(guó)Millipore公司）。天麻素對(duì)照品，芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110807－200205，110736－200527）；乙腈為色譜純，甲醇、磷酸均為分析純；天麻眩暈寧合劑購(gòu)自日照真誠(chéng)大藥房有限公司天津路藥店（陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠，批號(hào)：130624、130702、130711、130729）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)：223 nm；柱溫：30℃；流速：1 mL·min－1；進(jìn)樣量：20μL；天麻素、芍藥苷的保留時(shí)間分別為：8.25、12.568 min。流動(dòng)相梯度洗脫條件見(jiàn)表1，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取干燥后的天麻素對(duì)照品10.20 mg、芍藥苷對(duì)照品36.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超聲（300W，40 kHz）20 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫順序

圖1 HPLC色譜圖

2.3 供試品溶液的制備 取本品，搖勻，精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇超聲（300 W，40 kHz）20 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 空白試驗(yàn) 按天麻眩暈寧合劑制備方法制成缺天麻、白芍的陰性對(duì)照品，再按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液，并按上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在天麻素、芍藥苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥味對(duì)天麻素、芍藥苷的測(cè)定無(wú)干擾。

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下溶液，0.5、1、2.5、5、10、20 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，連同天麻素、芍藥苷對(duì)照品溶液一并進(jìn)樣20μL進(jìn)行測(cè)定。以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程為：天麻素Y＝1 152X－124.32，r＝0.999 6；芍藥苷Y＝15 921.1X－654.2，r＝0.999 2

線(xiàn)性范圍：天麻素、芍藥苷分別為0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg，表明線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別在0、5、10、15、20、25 h測(cè)定，結(jié)果顯示，在25 h內(nèi)測(cè)定供試品溶液中天麻素、芍藥苷峰面積的RSD為0.85%，0.79%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)的樣品6份（每份3 mL），按“2.3”項(xiàng)下方法制備溶液并進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果天麻素的平均值為0.433 8 mg·mL－1，RSD為0.92%，芍藥苷的平均值為1.462 0 mg·mL－1，RSD為0.95%。

2.8 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定，計(jì)算天麻素、芍藥苷峰面積的RSD為0.62%、0.38%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，精密量取已知含量的樣品6份（批號(hào)為130624，測(cè)得天麻素、芍藥苷含量為0.433 8 mg·mL－1和1.462 mg·mL－1）各5 mL，分別準(zhǔn)確加入天麻素對(duì)照品溶液0.157 mg ·mL－1、芍藥苷對(duì)照品溶液0.574 5 mg·mL－1各10 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算含量及加樣回收率，天麻素、芍藥苷的平均回收率（n＝6）為98.3%，RSD為0.46%和96.7%，RSD為0.73%，結(jié)果見(jiàn)表2、3。

表2 天麻素回收率試驗(yàn)

表3 芍藥苷回收率試驗(yàn)

2.10 樣品測(cè)定 取4個(gè)批號(hào)天麻眩暈寧合劑，按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液并按上述色譜條件測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品的含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果（n＝4）

2.11 耐用性試驗(yàn) 試驗(yàn)考察了不同儀器和色譜柱對(duì)樣品含量的影響，采用3根不同品牌的色譜柱Hypersil C18柱，Shimadzu VP－ODSC18柱，Agilent HC－C18柱，規(guī)格均為4.6 mm×250 mm，5μm，分別在2臺(tái)不同的儀器上，按照上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 不同儀器和色譜柱測(cè)得的樣品含量

3 討論

3.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高 天麻眩暈寧合劑是一種治療美尼爾氏癥有效的中成藥，原標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)鉤藤，陳皮進(jìn)行了定性鑒別，文獻(xiàn)［2］報(bào)道中對(duì)天麻進(jìn)行了含量測(cè)定，其他藥材未進(jìn)行控制，容易給不法分子偷工減料，制造假劣藥品帶來(lái)可乘之機(jī)，本方法可以對(duì)其中含有的有效成分天麻、白芍進(jìn)行定性鑒別和定量含量測(cè)定。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 HPLC法測(cè)定天麻素、芍藥苷的含量，需選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)波長(zhǎng)。筆者通過(guò)試驗(yàn)，取“2.2”項(xiàng)下天麻素對(duì)照品、芍藥苷對(duì)照品溶液，采用雙光束分光光度法在200～350 nm處掃描，天麻素對(duì)照品在221 nm處有最大吸收，芍藥苷對(duì)照品在230 nm波長(zhǎng)有最大吸收，本試驗(yàn)選取223 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)取得滿(mǎn)意效果。

3.3 流動(dòng)相的選擇 在選用流動(dòng)相時(shí)，參考文獻(xiàn)［3～6］報(bào)道分別使用甲醇－0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液（28∶72）、甲醇－水－冰醋酸（23∶75∶2）等進(jìn)行試驗(yàn)，分離效果都不理想，改用以乙腈－0.1%磷酸溶液作梯度洗脫，分離度達(dá)到了2.0，可以用來(lái)測(cè)定。

［1］趙成.HPLC法測(cè)定天麻眩暈寧合劑中天麻素的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2008，12（1）：23－24.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：54－55.

［3］桂雙英，朱友，徐衡.婦康寶口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，23（3）：47－49

［4］吳基威，朱銳金.高效液相色譜法測(cè)定茴桂婦炎膠囊中芍藥苷的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（11）：43.

［5］唐富麗，秦郁文.HPLC法測(cè)定逍遙合劑中芍藥苷的含量［J］.齊魯藥事，2011，30（4）：202－203

［6］趙輝，武曉紅，蒲曉輝.HPLC法同時(shí)測(cè)定天舒膠囊中阿魏酸和天麻素［J］.中成藥，2014，36（1）：111－114.

Determ ination of gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning M ixture by HPLC

LIU Feng
（Rizhao Institute for Drug Control，Rizhao 276800，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning Mixture.MethodsThe optimum HPLC condition was as follows：Hypersil C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm），mobile phase：actonitrile－0.1%phosphoric acid solution，detection wavelength：223 nm，column temperature：30℃，flow rate：1 mLmin－1.ResultsTherewere good linearity between peak areas and injection quantity of gastrodin and paeoniflorin within the range of0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg.The average recoverywas98.3%for gastrodin，96.7% for paeoniflorin.ConclusionThe HPLCmeasurementwas reasonable，stable and accurate.Themethod could detect gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning Mixture.

Tianma Xuanyunning Mixture；Gastrodin；Paeoniflorin；HPLC；Determination

R927.2

：A

2095－5375（2014）07－0386－003

劉峰，男，副主任醫(yī)師，研究方向：藥品檢驗(yàn)，E－mail：liufeng7663＠163.com。