關(guān)于盆腔炎性疾病動(dòng)物模型的研究概況

劉文娥，張婉妮(綜述)，陳燕霞(審校)

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，長(zhǎng)沙 41007； 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)七年制研究生班，長(zhǎng)沙 410007)

盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease，PID)是女性生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜發(fā)生的炎癥，是女性常見的多發(fā)病，其嚴(yán)重影響育齡期婦女的生殖健康和生活質(zhì)量。PID主要包括子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、盆腔腹膜炎等，若PID未得到及時(shí)、徹底的治療，可導(dǎo)致不孕、輸卵管妊娠、慢性盆腔痛，炎癥反復(fù)發(fā)作可嚴(yán)重影響婦女的生殖健康，增加家庭與社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。動(dòng)物模型對(duì)深入系統(tǒng)研究PID具有重要意義，隨著科研技術(shù)發(fā)展的不斷進(jìn)步，PID的造模方法也在不斷完善，現(xiàn)對(duì)相關(guān)方法綜述如下。

1 物理性方法

1.1異物置入法 將異物置入體內(nèi)，一方面會(huì)對(duì)正常組織產(chǎn)生刺激作用，引發(fā)局部炎性反應(yīng)；另一方面也會(huì)引起機(jī)體的免疫反應(yīng)。劉元等[2]、張晴等[3]麻醉大鼠后，于下腹正中切開2 cm，暴露子宮，沿左側(cè)子宮角上1 cm處做一橫切口，將酒精消毒的塑料管(管徑2 mm，長(zhǎng)5 mm，重2 mg)埋入子宮內(nèi)制備大鼠子宮炎癥模型。

1.2機(jī)械損傷法 機(jī)械損傷法是常用的造模方法，但很少單獨(dú)應(yīng)用，多與他方法聯(lián)合。實(shí)驗(yàn)多采用磨口針頭在宮腔內(nèi)來回抽拉數(shù)次，機(jī)械性損傷子宮內(nèi)膜組織，細(xì)菌通過破損處侵入或長(zhǎng)期刺激子宮，促使炎癥形成。黃淑鳳等[4]和常潤(rùn)等[5]在機(jī)械損傷的基礎(chǔ)上加以化學(xué)燒傷或細(xì)菌接種法均達(dá)到預(yù)期效果。

2 化學(xué)性方法

2.1苯酚膠漿法 該法是PID動(dòng)物模型中使用較早、應(yīng)用較為廣泛的造模方法之一，其通過苯酚對(duì)組織的化學(xué)性燒傷而達(dá)到致炎目的。研究中常用25%苯酚膠漿(苯酚5 mL、西黃芪膠1 g、甘油4 mL加水至20 mL制成或由液化苯酚、蒸餾水以及羧甲基纖維素鈉配置而成)。馬云等[6]麻醉大鼠后開腹，注射器針頭于子宮分岔處進(jìn)入宮腔內(nèi)，朝右側(cè)卵巢方向緩慢推注苯酚膠漿0.06 mL。造模后第11日，肉眼可見模型組右側(cè)子宮明顯水腫，有炎性包塊，與周圍組織粘連不清；鏡下顯示腔壁結(jié)構(gòu)紊亂，腺體萎縮變形，全層可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。汪明德等[7]、程靖等[8]和張彥等[9]均采用此法制備大鼠PID模型。付桂香等[10]采用苯酚膠漿大鼠陰道注射制備陰道及宮頸炎癥模型：用錐形靜脈切開針進(jìn)入大鼠陰道深部，并注入苯酚膠漿，每只0.3 mL，每3天注射1次，共3次。

苯酚膠漿法屬于化學(xué)性燒傷法，可造成炎性反應(yīng)與粘連，發(fā)病特點(diǎn)雖與人類PID相異，但在阻塞性輸卵管炎及不孕的研究中占優(yōu)勢(shì)。因苯酚膠漿法簡(jiǎn)單易行，造模時(shí)間短，在某種程度上仍為學(xué)者所接受。

2.2鹽酸法 鹽酸是一種強(qiáng)酸，體內(nèi)注射鹽酸可對(duì)正常組織產(chǎn)生刺激、腐蝕作用而致炎。傅汝廉等[11]最早使用鹽酸闌尾靜脈注射法建立闌尾炎性包塊模型，劉慶等[12]參考傅氏方法，向雙側(cè)宮腔注射0.3 N的鹽酸,除2只大鼠因麻醉原因死亡外，其余大鼠鏡下可見宮腔內(nèi)大量膿細(xì)胞積聚，部分上皮變性、壞死，黏膜下層充血水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

鹽酸致炎法方法雖簡(jiǎn)單，但由于酸性太強(qiáng)，因而在實(shí)驗(yàn)研究中并不常用，其劑量與濃度的選擇需根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究的具體要求而定。

3 生物性方法

引起PID的病原體包括內(nèi)源性和外源性兩類，兩種病原體可單獨(dú)應(yīng)用，但?；旌洗嬖赱1]。生物性造模法更接近人類PID的致病過程，但造模時(shí)間較長(zhǎng)，一般需20 d左右[13]。造模所選菌液可為單一細(xì)菌，也可為混合菌液，混合菌液造模更有利于炎癥產(chǎn)生，也更接近人類PID致病特點(diǎn)。動(dòng)物造模中菌液濃度的選擇要合理，既要滿足實(shí)驗(yàn)的致炎目的，又不能引起菌血癥導(dǎo)致動(dòng)物死亡。

3.1內(nèi)源性病原體感染法 內(nèi)源性病原體主要來自于寄居于陰道內(nèi)的微生物群，包括需氧菌和厭氧菌，需氧菌主要是大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌，而厭氧菌主要是脆弱類桿菌。

孫曉瑋等[14]取大鼠下腹正中做長(zhǎng)0.8～1.0 cm的切口，暴露右側(cè)子宮，用注射器取0.1 mL大腸埃希菌菌液(濃度為6×109個(gè)/L)注入大鼠子宮。模型組大鼠肉眼可見子宮腫脹、發(fā)硬，與周圍組織粘連，形成硬結(jié)；鏡下可見管壁黏膜層與肌層結(jié)構(gòu)模糊，上皮細(xì)胞變性壞死脫落，組織充血水腫伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。衛(wèi)昊等[15]將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌按2∶1∶1比例溶于無菌性生理鹽水中，運(yùn)用比濁法配制成濃度為3×1011個(gè)/L的混合菌液，在大鼠右側(cè)子宮注入混合菌懸液0.1 mL。結(jié)果提示，模型組大鼠子宮黏膜上皮有明顯的變性壞死，肌層與固有層均有明顯的結(jié)締組織增生及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肌層排列紊亂，管腔有一定粘連阻塞，漿膜層有散在炎細(xì)胞浸潤(rùn)。師偉等[16]、楊林波等[17]和邱賽紅等[18]均采用混合菌液接種法造模成功。

以上方法均為開腹后子宮注射器接種。此外，馮平安等[19]采用小鼠腹腔直接注射脆弱類桿菌懸液0.35 mL、大腸埃希菌菌液0.5 mL制備小鼠盆腔炎模型。李俊良等[20]采用逆行宮腔插管灌注細(xì)菌法，將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌以1∶1配制成濃度為1×1010/L的菌液后多次經(jīng)陰道注入宮腔內(nèi)以持續(xù)刺激宮腔。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雙側(cè)輸卵管水腫、充血、盆腔積液，雙側(cè)輸卵管壁增厚，呈串珠樣改變。

3.2外源性病原體感染法 外源性病原體主要為性傳播疾病的病原體，如解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟菌等，其主要沿生殖道黏膜上行蔓延感染。

劉弘等[21]采用苯甲酸雌二醇預(yù)處理(皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.2 mL，每周1次，共4次)小鼠，然后給予小鼠陰道多次接種解脲支原體血清8型感染液制備PID模型。造模后小鼠陰道發(fā)紅，分泌物增多，宮頸肥大，子宮及輸卵管水腫；陰拭子培養(yǎng)支原體均為陽性；病理切片顯示生殖器官4個(gè)部位均有明顯的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。韓建德等[22]給予雌性小鼠陰道內(nèi)接種小鼠肺炎沙眼衣原體，3周內(nèi)輸卵管發(fā)生急性炎癥，3周后輸卵管出現(xiàn)扭曲、阻塞、積水等慢性炎性改變。

此外，朱葉等[23]和師振予等[24]將解脲支原體、金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌按 1∶1∶1的比例混合配制成濃度為3×1015/L的混合菌液，并將其注入大鼠一側(cè)宮腔內(nèi)制備PID模型；李鑫等[25]將蘸有金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌以及解脲支原體混合菌液的醫(yī)用明膠片經(jīng)陰道塞至宮腔內(nèi)，連續(xù)4次，制備PID模型。

國內(nèi)制備PID模型多采用小動(dòng)物，如大鼠、小鼠、豚鼠、兔等，小動(dòng)物模型具有成本低、易于處理、并能夠改變其基因(如敲除小鼠基因)等優(yōu)點(diǎn),但其與人類疾病機(jī)制相差甚遠(yuǎn)。自非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(non-human primates,NHPs)允許用于人類生物、生理、解剖的研究后，國外多傾向使用NHPs用于生物醫(yī)學(xué)研究。雌性NHPs生殖系統(tǒng)的大小和形態(tài)與女性相似[26]。國外多采用沙眼衣原體感染NHPs(黑猩猩、狨猴、獼猴、狒狒等)制備PID模型，通過多次重復(fù)逆行性宮頸、子宮內(nèi)膜或輸卵管直接接種沙眼衣原體致宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎或輸卵管炎模型，其更類似于人類PID模型[27]。但NHPs本身價(jià)格昂貴,且還需要專業(yè)設(shè)施以及職業(yè)技術(shù)人員來照顧這些動(dòng)物，所需的成本巨大，對(duì)于很多實(shí)驗(yàn)室來說都是無法完成的。

4“病證結(jié)合”制備PID動(dòng)物模型

目前，關(guān)于建立不同證型的PID動(dòng)物模型的研究報(bào)道較少，且單一。凌娜等[28]制備了陽虛證慢性盆腔炎大鼠動(dòng)物模型：在采用混合菌接種法(大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌比例2∶1∶1)制備大鼠盆腔炎的基礎(chǔ)上，將造模后的大鼠用地塞米松混懸液(18 mg/L)2 mL+生理鹽水2 mL，每日下午17：00～19：00灌胃，連續(xù) 7 d，中間休息1 d，共灌胃16次。采用地塞米松混懸液灌胃后實(shí)驗(yàn)大鼠逐漸出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、神志萎靡、蜷縮、拱背、足部腫脹、體毛稀疏尤以尾部突出等脾腎陽虛的表現(xiàn)。

黃青等[29]對(duì)大鼠皮下注射0.08 mg/100 g的鹽酸腎上腺素后，將大鼠放入0 ℃冰水中，5 min后取出，2 h后再次注射鹽酸腎上腺素0.08 mg/100 g，再次放入0 ℃冰水中5 min，制備大鼠盆腔炎急性血瘀模型。通過測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)提示造模的準(zhǔn)確性。

葉秋香等[30]采用苯酚膠漿法疊加冰浴法建立寒凝血瘀證慢性盆腔炎大鼠模型，即在苯酚膠漿法建立盆腔炎模型的基礎(chǔ)上，將大鼠放入冰浴槽中，不斷加入水和冰塊，直至測(cè)水溫為0 ～1 ℃、水面與直立大鼠頸部相平為止，每日冰浴1次，每次20 min，連續(xù)2周。

5 小 結(jié)

PID是一個(gè)全球性的健康問題，其嚴(yán)重影響著女性的正常工作、學(xué)習(xí)和生活。隨著對(duì)PID研究的不斷深入，其造模方法也在不斷的發(fā)展與改進(jìn)，使其更加接近人類疾病的致病特點(diǎn)。但研究中仍然存在很多弊端，如動(dòng)物造模多采用開腹手術(shù)，實(shí)際過程中難免造成腹腔感染，嚴(yán)重影響動(dòng)物造模術(shù)后的存活率、造模效果及實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性；逆行性宮腔混合菌液接種接近人類上行感染機(jī)制，但接種感染率低，需多次重復(fù)試驗(yàn)，實(shí)際造模效果難以判定；NHPs價(jià)格昂貴，且數(shù)量有限，而小動(dòng)物模型無法真實(shí)復(fù)制人類疾病模型。因此開發(fā)出一種高效、安全、持久、快捷的造模方式仍是擺在研究者面前長(zhǎng)期而艱巨的任務(wù)。

此外，中醫(yī)“病證結(jié)合”PID動(dòng)物模型尚不夠成熟，僅見于個(gè)別報(bào)道，且局限在血瘀、陽虛等方面，而濕熱、氣滯、氣虛等方面的研究還很欠缺，關(guān)于中醫(yī)證候與PID的相關(guān)性研究還需要研究者不斷大膽創(chuàng)新，使動(dòng)物造模及診治上更加凸顯中醫(yī)特色。

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