小鼠肝大部切除術(shù)的改進(jìn)

張 誠(chéng), 姚菊芳

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院1.普外科; 2. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室, 上海 200127)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

小鼠肝大部切除術(shù)的改進(jìn)

張 誠(chéng)1, 姚菊芳2

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院1.普外科; 2. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室, 上海 200127)

目的 改進(jìn)小鼠肝大部切除模型的技術(shù)。方法 在小鼠部分肝切除之前，預(yù)先結(jié)扎小鼠肝臟左葉及中葉的Glisson系統(tǒng)，然后建立模型，比較術(shù)后結(jié)果。結(jié)果 經(jīng)改進(jìn)后的小鼠肝切除模型發(fā)生出血及膽漏等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)明顯降低，提高了術(shù)后生存率。結(jié)論 預(yù)先結(jié)扎Glisson系統(tǒng)技術(shù)是一種更加理想的小鼠大部肝切除方法。

小鼠; 肝大部切除術(shù)

嚙齒類動(dòng)物的肝大部切除是肝病實(shí)驗(yàn)研究中十分常用的一種動(dòng)物模型[1～3]。1931年，Higgins和Anderson等人創(chuàng)制了該模型[4]，這種模型直接結(jié)扎大鼠肝臟的上三葉肝蒂并隨之切除(70%肝組織)，術(shù)式簡(jiǎn)單，對(duì)術(shù)者的外科技術(shù)尤其是顯微外科技術(shù)要求不高，因而得到廣泛應(yīng)用。但是與大鼠相比，小鼠肝葉尤其是肝葉血管膽管組織纖小且結(jié)構(gòu)有差別，直接應(yīng)用該術(shù)式有一定的并發(fā)癥發(fā)生率，主要包括出血、膽瘺等，從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果[5～6]。

曾有作者通過分兩次分別結(jié)扎切除小鼠左外葉和中葉的方法改進(jìn)該模型[7～8], 作者在以往的實(shí)驗(yàn)研究中曾使用該方法, 發(fā)現(xiàn)其依然存在一定的并發(fā)癥率和死亡率。因此, 作者試圖通過先整體結(jié)扎待切除肝葉的Glisson系統(tǒng)(包含門靜脈、肝動(dòng)脈和膽管)再進(jìn)行分葉切除的方法進(jìn)一步優(yōu)化該模型, 實(shí)踐證明作者的改進(jìn)方法顯著降低了動(dòng)物的并發(fā)癥率和死亡率。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及肝臟解剖結(jié)構(gòu)

清潔級(jí)雄性C57 BL/6小鼠208只, 8～12周齡，20～25 g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司[SCXK(滬) 2012-0002]，飼養(yǎng)于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(滬)2011-0121]。飼養(yǎng)室溫20～24℃，自由飲食。小鼠正常肝臟解剖示意圖見圖1。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材及試劑

顯微手術(shù)器械(上海醫(yī)療器械廠)，手術(shù)顯微鏡(上海醫(yī)療器械股份有限公司醫(yī)用光學(xué)儀器廠), 7-0 SurgiPro聚乙烯線(美國(guó)泰科醫(yī)療)，4-0愛惜康絲線(強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司)，恒溫電熱毯(上海奧爾科特生物科技有限公司)，戊巴比妥(美國(guó)Sigma)，乳酸林格氏液(上海百特醫(yī)療用品有限公司)。

1.3 麻醉及手術(shù)步驟

1.3.1 麻醉及圍手術(shù)期處理 以戊巴比妥鈉60 mg/kg腹腔注射誘導(dǎo)及維持麻醉。麻醉成功后小鼠平臥固定于帶有保溫及體溫監(jiān)測(cè)裝置的手術(shù)臺(tái)上。在肝葉切除后, 腹腔內(nèi)以0.3 m l林格氏液(已預(yù)熱至39℃)沖洗。為補(bǔ)足手術(shù)過程中丟失的體液, 術(shù)后皮下注射0.5 m l林格氏液, 并且置于恒溫環(huán)境下直至麻醉蘇醒。

圖1 小鼠正常肝臟解剖示意圖

1.3.2 傳統(tǒng)70%肝大部切除方法 手術(shù)步驟與文獻(xiàn)報(bào)道的方法基本一致[7～11]。主要步驟包括: 肋緣下橫切口進(jìn)腹充分暴露肝臟。銳性分離肝周韌帶，游離各肝葉。輕提起肝左外葉，以4-0絲線結(jié)扎此葉肝蒂根部并切除(圖2A)，同樣的方法以4-0絲線結(jié)扎肝中葉并將其切除(圖2 B、C)。

1.3.3 改進(jìn)的肝大部切除術(shù) 同樣于小鼠肋緣下橫切口進(jìn)腹充分暴露肝臟。銳性分離肝周韌帶，游離各肝葉。在結(jié)扎小鼠肝臟左外葉及中葉之前，以7-0 SurgiPro聚乙烯線縫扎阻斷肝左葉及肝中葉的Glisson系統(tǒng)(圖2D)，阻斷入肝血流及膽管，此時(shí)可以觀察到小鼠肝左外葉及肝中葉顏色明顯變淺。之后步驟與傳統(tǒng)方法相同，逐步切除小鼠肝臟左外葉及中葉(圖2A～C)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS11.0，卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

按傳統(tǒng)方法，對(duì)78只小鼠實(shí)行肝切除。另有130只小鼠接受了改進(jìn)的肝切除方法。術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率及生存率如表1。

圖2 傳統(tǒng)及改進(jìn)的小鼠肝大部切除術(shù)

表1 兩種術(shù)式的術(shù)后小鼠并發(fā)癥率及生存率

3 討論

按傳統(tǒng)方法進(jìn)行的小鼠肝切術(shù)中，出血是較常見的并發(fā)癥。出血常發(fā)生在切除后的肝葉殘端，大多數(shù)情況下，可以通過填塞明膠海綿等止血材料有效控制出血。作者按傳統(tǒng)方法實(shí)施手術(shù)，有2只小鼠在術(shù)后7 d內(nèi)死于出血。同時(shí)觀察到有5只小鼠發(fā)生膽瘺，其中有3只死亡。另外還有2只的死亡原因不明。

作者對(duì)傳統(tǒng)方法改進(jìn)實(shí)施手術(shù)，并發(fā)癥率大大降低，僅有1只小鼠死于術(shù)后無法控制的出血(手術(shù)過程中，縫扎肝葉Glisson系統(tǒng)時(shí)損傷門靜脈)，另一只死于在打開腹膜時(shí)腸道的損傷，這些主要都是由于操作者手法不熟練，而非該術(shù)式本身的缺陷所致。整個(gè)小鼠肝切除過程時(shí)間控制在15～20 min,與傳統(tǒng)的肝切術(shù)式相比手術(shù)時(shí)間沒有延長(zhǎng)。

傳統(tǒng)方法實(shí)施的小鼠肝大部切除主要存在的并發(fā)癥是出血和膽管并發(fā)癥。由于小鼠Glisson系統(tǒng)與肝靜脈之間存在一定的距離，用絲線結(jié)扎肝葉時(shí)不可避免會(huì)切割小鼠的肝實(shí)質(zhì)及脈管結(jié)構(gòu)，造成肝動(dòng)脈及膽管損傷，從而導(dǎo)致出血及膽瘺，影響動(dòng)物的術(shù)后生存，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。作者的術(shù)式改進(jìn)主要是在結(jié)扎小鼠肝葉前，先阻斷所切肝葉的Glisson系統(tǒng)。值得注意的是，小鼠的門靜脈位于肝中葉下方，如果先整塊結(jié)扎肝葉，會(huì)牽拉到腔靜脈，從而造成腔靜脈狹窄，進(jìn)而導(dǎo)致殘余肝葉壞死。為了解決這個(gè)問題，作者就在結(jié)扎肝葉前，于肝中葉側(cè)面做了一個(gè)小切口，然后切除肝葉。由于結(jié)扎了肝葉的Glisson系統(tǒng)，阻斷了肝葉血流，有效地減少了肝切后出血的發(fā)生。

除了減少了手術(shù)并發(fā)癥的發(fā)生及提高了生存率，作者的方法還有以下優(yōu)點(diǎn)。第一，結(jié)扎肝葉前阻斷G lisson系統(tǒng)，使切除肝葉中血液量減少，這樣切除肝葉后可以減少失血量，從而有助于小鼠圍手術(shù)期恢復(fù)。由于切下的肝臟標(biāo)本不含血液，減少了對(duì)肝組織檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。第二，由于先縫扎了切除肝葉的Glisson系統(tǒng)，可以以此結(jié)扎線為標(biāo)志，在此平面上結(jié)扎肝葉，從而減少腔靜脈狹窄及殘余肝葉充血的發(fā)生。

總之，小鼠肝大部切除模型是肝臟生理及病理生理研究中十分常用的動(dòng)物模型[11]。既往的術(shù)式有一定的并發(fā)癥率。作者的手術(shù)改進(jìn)在于小鼠肝葉整塊結(jié)扎前先結(jié)扎肝葉的Glisson系統(tǒng)，該步驟易于實(shí)施，十分安全，并且無需顯微器械的輔助。這個(gè)簡(jiǎn)單的改進(jìn)只在原來術(shù)式的基礎(chǔ)上多花費(fèi)20 s左右，實(shí)踐證明能顯著減少手術(shù)并發(fā)癥的發(fā)生，進(jìn)一步提高術(shù)后生存率，更為重要的是有助于得到穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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Q95-33

A

1674-5817(2014)01-0050-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.010

2013-07-17

張 誠(chéng)(1983-), 男, 碩士, 醫(yī)師, 主要從事外科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究, E-mail: 18930518352@163.com

姚菊芳, E-mail: yaoshirley@163.com