不同生境靈芝對環(huán)境適應(yīng)性差異研究

韓曦，王佳巍，湯偉權(quán)，李濱勝

（黑龍江省森林植物園，黑龍江 哈爾濱150040）

靈芝（Ganoderma lucidum）隸屬于真菌門層菌綱非褶菌目靈芝科靈芝屬［1］，又稱靈芝草、木靈芝和菌靈芝［2］，是中醫(yī)藥學(xué)寶庫中的珍品。不僅能夠治療癌癥、腦溢血和心臟病，還對胃腸、肝臟、腎臟、白血病、神經(jīng)衰弱、慢性支氣管炎、哮喘、過敏等疾病有顯著療效。近年來，國際藥學(xué)界發(fā)現(xiàn)靈芝所含的“長壽元素”有機(jī)鍺是人參的4～5倍，因此被譽(yù)為“健康食品之冠”，并享譽(yù)世界［3－5］。

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和社會(huì)的進(jìn)步，人們的健康和保健意識不斷增強(qiáng)，靈芝的需求日益增高，產(chǎn)業(yè)化發(fā)展也在不斷深入。本文以大興安嶺地區(qū)2種靈芝品種為對象，多角度進(jìn)行生物學(xué)特性研究，確定最佳的生長條件，以便更好地指導(dǎo)菌種的選擇和栽培，促進(jìn)靈芝產(chǎn)業(yè)健康、有序發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株為大興安嶺北坡靈芝LZ01、南坡靈芝LZ02。

供試培養(yǎng)基：固體PDA培養(yǎng)基和不同成分的完全培養(yǎng)基。

1.2 試驗(yàn)方法

對在大興安嶺北坡、南坡采摘的2種靈芝菌種進(jìn)行分離和純化，在PDA培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)。進(jìn)行不同溫度、pH值、氮源、碳源及碳氮比的處理，每個(gè)處理重復(fù)5次，測定2菌種在不同條件下的生長速度，了解不同條件對兩種靈芝生長的影響，進(jìn)一步確定它們的菌絲最佳生長條件。

具體做法：（1）溫度設(shè)16℃、20℃、24℃、28℃、32℃，共5個(gè)梯度；（2）pH值4～8設(shè)定5個(gè)梯度，全部放置在25℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；（3）氮源培養(yǎng)按0.2%的氮含量分別加入酵母菌、黃豆粉、甘氨酸、硫氨酸、蛋白胨配成不同氮源完全培養(yǎng)基，置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱，無光條件下培養(yǎng)；（4）碳源培養(yǎng)按2%的碳含量分別加入葡萄糖、蔗糖、淀粉、麥芽糖、乳糖配成不同碳源，置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱，無光條件下培養(yǎng)；（5）碳氮比培養(yǎng)以葡萄糖和甘氨酸配成5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、40∶1等5種碳氮比培養(yǎng)基，置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱，無光條件下培養(yǎng)。上述處理均待菌絲萌發(fā)后觀察菌絲狀態(tài)，接種后培養(yǎng)72h，測量菌絲半徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對菌絲生長的影響

圖1 不同溫度2種菌絲生長速度

2種靈芝菌絲在16～32℃下均能生長，但表現(xiàn)不同。當(dāng)溫度為16℃時(shí)2種靈芝菌絲生長緩慢，隨溫度的升高2種菌絲生長速度逐漸加快；24℃為LZ02菌絲生長速度最快點(diǎn)，而LZ01菌絲生長速度最快點(diǎn)則為28℃；溫度為32℃時(shí)2種菌絲生長速度變慢。差異顯著性檢測表明，當(dāng)溫度為24～28℃時(shí)，2種靈芝菌絲生長速度無顯著差異，說明它們最適生長溫度范圍為24～28℃。見圖1。

2.2 pH值對菌絲生長的影響

圖2 不同pH值2種菌絲生長速度

2種靈芝菌絲在pH 4～8均可生長。當(dāng)pH 4～6時(shí)，兩種菌絲生長速度都較快，表現(xiàn)為菌落菌絲濃密，生長勢旺盛。而當(dāng)pH進(jìn)一步上升時(shí)，菌絲生長速度明顯減緩。LZ01菌絲最適pH為5，LZ02菌絲最適pH為6。差異顯著性檢測結(jié)果表明，當(dāng)pH為4～6時(shí)，其生長速度無顯著差異，偏酸性的環(huán)境更有益于LZ01和LZ02的生長。見圖2。

2.3 氮源對菌絲生長的影響

圖3 不同氮源2種菌絲的生長速度

2種靈芝菌絲在供試的5種氮源中均能生長，但影響不同。以蛋白胨為氮源的菌絲生長速度最快，菌落菌絲生長最為濃密，其后依次是酵母菌、黃豆粉、甘氨酸、硫氨酸。差異顯著性檢測表明，以蛋白胨、酵母菌、黃豆粉為氮源時(shí)，其菌絲生長速度無顯著差異，并且生長速度快；而以甘氨酸、硫氨酸為氮源時(shí)，生長速度變慢：可見有機(jī)氮源對這2種靈芝品種生長較好。綜合生長速度和生長勢來看，蛋白胨為2菌種適宜生長的氮源。見圖3。

2.4 碳源對菌絲生長的影響

圖4 不同碳源2種菌絲的生長速度

2種靈芝菌絲在供試的5種碳源中均能生長，但對菌絲生長的影響不同。LZ01以可溶性淀粉為碳源時(shí)，菌絲生長速度最快，菌落菌絲最濃密、生長勢旺盛，其后依次為麥芽糖、蔗糖、果糖、葡萄糖。LZ02則是以葡萄糖為碳源時(shí)，菌絲生長速度最快，菌落菌絲最濃密、生長勢旺盛。其后依次為蔗糖、麥芽糖、果糖、可溶性淀粉。見圖4。

2.5 不同碳氮比對菌絲生長的影響

圖5 2種靈芝菌絲在不同碳氮化下菌絲生長速度

2種靈芝菌絲在5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、40∶1等5種碳氮比的培養(yǎng)基上均能生長，但對菌絲生長的影響不同。當(dāng)碳氮比為5∶1時(shí)，2種靈芝菌絲生長緩慢；隨著碳氮比比值增大，2種菌絲生長速度逐漸加快；在試驗(yàn)范圍內(nèi)，當(dāng)碳氮比為40∶1時(shí)，2種菌絲生長速度最快，菌落菌絲最濃密、生長勢旺盛。見圖5。

3 結(jié)論

3.1 2種靈芝菌種在不同溫度、pH、氮源、碳源、碳氮比等培養(yǎng)條件下，其菌絲生長表現(xiàn)出一定的差別。3.2 2種靈芝菌絲適宜的生長溫度范圍為24～28℃。其中LZ01最適生長溫度在28℃，LZ02則為24℃，此結(jié)果與其分別生長于陰、陽面的生境差異相吻合。

3.3 2種靈芝菌絲在pH4～6的環(huán)境下生長較快，其中LZ01菌絲最適pH值為5，LZ02菌絲最適pH值為6，表現(xiàn)出偏酸性的環(huán)境對其生長更為有益。

3.4 2種靈芝菌種既能利用有機(jī)氮源，也能利用無機(jī)氮源，但綜合生長速度和生長勢來看，有機(jī)氮源對其生長較有利，其中以蛋白胨最佳。

3.5 5種供試的碳源中，可溶性淀粉為LZ01最適生長碳源；葡萄糖為LZ02最適生長碳源，其他碳源下菌絲生長速度差別不明顯。

3.6 5種碳氮比試驗(yàn)中，隨著比值的增大，2種菌絲生長速度逐漸加快。

4 討論

2種靈芝菌絲的最適溫度、pH和碳源等方面呈現(xiàn)出不同，是靈芝本身生理因素所致，還是環(huán)境因素影響，或者是生理因素和環(huán)境共同作用，還有待于進(jìn)一步研究。但是通過對試驗(yàn)的總體認(rèn)識和把握將有助于研究者進(jìn)一步揭示溫度、pH、碳氮源、碳氮比對不同生境靈芝菌絲生長的影響。

［1］吳興亮，戴玉成.中國靈芝圖鑒［M］.北京：科學(xué)出版社，2005

［2］陳若蕓.靈芝化學(xué)研究［C］／／中國菌物協(xié)會(huì).首屆藥用真菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集，2005

［3］虞和澎.靈芝栽培技術(shù)［J］.成都大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1994，13（1）：62－64

［4］盧振，陳金和，王雨來.靈芝的研究及應(yīng)用進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2003，14（9）：577－580

［5］周選圍.靈芝的有效成分及經(jīng)濟(jì)價(jià)值［J］.中學(xué)生物教學(xué)，1997（1）：40－41