對一例疑似肉牛運(yùn)輸熱的診斷

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（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東泰安 271000；

2.萊蕪經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)張家洼街道辦事處，山東萊蕪 271113）

對一例疑似肉牛運(yùn)輸熱的診斷

岳瑞超1，程子龍1，薛仲行2，劉思當(dāng)1

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東泰安 271000；

2.萊蕪經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)張家洼街道辦事處，山東萊蕪 271113）

[目的]山東省泰安市某肉牛養(yǎng)殖場從山東省菏澤市引進(jìn)肉犢牛2天后，部分犢牛出現(xiàn)高熱、流涎、呼吸困難等癥狀，并且死亡2頭。為診斷該病例，并查明發(fā)病的原因，深入該牛場進(jìn)行了細(xì)致的信息收集和樣品采集，以進(jìn)行綜合診斷。[方法]對該病例的發(fā)病背景和臨床癥狀進(jìn)行了細(xì)致的調(diào)查，并對病死犢牛進(jìn)行了病理剖檢，而后采集了病料樣品以進(jìn)行組織病理學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢測及細(xì)菌分離鑒定等實(shí)驗(yàn)室診斷，最終匯總各項(xiàng)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合診斷并實(shí)施針對性的防治措施。[結(jié)果]調(diào)查發(fā)現(xiàn)該牛場所購犢牛來自不同養(yǎng)殖場，幾經(jīng)倒手，運(yùn)輸前已處于應(yīng)激狀態(tài)；犢牛發(fā)病急、發(fā)病率高、病情重，符合重癥運(yùn)輸熱的一般癥狀；剖檢病變主要是間質(zhì)性及漿液性復(fù)合型肺炎，心、肝、脾、腎等實(shí)質(zhì)器官發(fā)生急性變質(zhì)性病變；病原學(xué)檢測未檢測到副流感病毒3型，但存在巴氏桿菌感染，據(jù)病變推測可能還存在其它病毒、細(xì)菌感染。按照運(yùn)輸熱的治療手段對病重牛進(jìn)行了試驗(yàn)性治療措施，即在提供良好飼養(yǎng)環(huán)境的同時(shí)，注射慶大霉素，全群氟苯尼考飲水，取得了良好的防治效果。[結(jié)論]該例犢牛急性、熱性、致死性疾病為重癥運(yùn)輸熱，在加強(qiáng)飼養(yǎng)管理的同時(shí)給予適當(dāng)?shù)乃幬镏委熌軌蚝芎玫乜刂撇∏椴⒅斡摬　?/p>

牛運(yùn)輸熱；綜合診斷；防治

牛運(yùn)輸熱是由多種病原微生物感染引起的以高熱、間質(zhì)性及大葉性肺炎為主的一種應(yīng)激性綜合征，其臨床上主要表現(xiàn)為病牛高熱、流鼻液、流淚，膿性結(jié)膜炎，咳嗽，呼吸困難，流泡沫樣口涎[1]。過去認(rèn)為牛運(yùn)輸熱是由巴氏桿菌引起，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)該病是由多種病原體共同作用的結(jié)果[2]。

在我國，有很多小型肉牛養(yǎng)殖場或養(yǎng)殖戶多從外地購買架子?；驙倥＜杏?，由于運(yùn)輸不當(dāng)造成嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)，許多肉牛在抵達(dá)養(yǎng)殖場2～3天后，牛群便出現(xiàn)食欲減退、高熱、呼吸困難、流涎等運(yùn)輸熱病癥，并有一定程度的死亡，給養(yǎng)殖場帶來了很大的經(jīng)濟(jì)損失。

2014年3月山東省泰安市某肉牛養(yǎng)殖場從山東省菏澤市引進(jìn)100千克左右的肉犢牛37頭，路途運(yùn)輸約4個(gè)小時(shí)。犢牛來自幾個(gè)養(yǎng)殖場，沒有專用運(yùn)牛車運(yùn)送，而是由普通貨車運(yùn)輸，該貨車空間較小比較擁擠。犢牛到達(dá)養(yǎng)殖場第2天后發(fā)現(xiàn)個(gè)別牛出現(xiàn)精神沉郁，目光呆滯，離群獨(dú)處，食欲廢絕，反芻停止，體溫38.9℃～40.8℃，流鼻涕、大量流涎流淚，到第4天大約有50%的牛陸續(xù)發(fā)病，其中有3頭牛比較嚴(yán)重，病牛呼吸困難，張口呼吸，嚴(yán)重的出現(xiàn)腹式呼吸，鼻鏡干燥，第5天突然死亡2頭?，F(xiàn)將綜合診斷及防治情況介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2頭發(fā)病死亡肉犢牛由泰安市某肉牛場提供；病理組織學(xué)切片及染色相關(guān)儀器材料由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動科院生物切片室提供；DL2000 DNA Marker、無RNase雙蒸水、2×Taq酶（5 U/μL）等購自大連寶生物工程有限公司；EasyPureTMViral DNA/ RNA Kit購自北京全式金生物科技有限公司；血瓊脂平板培養(yǎng)基，瑞氏染色液購自青島海博生物技術(shù)有限公司；EasyScriptTMOne-Step RT-PCR SuperMix購自北京全式金生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 臨床癥狀及剖檢觀察

詳細(xì)詢問發(fā)病牛場的發(fā)病背景，臨床表現(xiàn)，剖檢病死牛，觀察內(nèi)臟器官的病理變化。

1.2.2 病理組織學(xué)檢查

分別取病死牛的肝臟、肺臟、脾臟、心臟、腎臟等組織，用10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色，鏡檢。

1.2.3 細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

無菌操作取病死牛的脾臟，在血平板上進(jìn)行劃線，于37℃恒溫箱培養(yǎng)，24小時(shí)后，挑取單個(gè)菌落，分別進(jìn)行革蘭氏染色和瑞氏染色，鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)；用氟苯尼考、慶大霉素、左旋氧氟沙星、硫酸新霉素、粘桿菌素藥敏片做藥敏試驗(yàn)。

1.2.4 病毒的分子生物學(xué)檢測

采集病牛鼻分泌物及病死牛氣管黏液進(jìn)行RNA的提取，然后RT-PCR，引物設(shè)計(jì)及反應(yīng)條件按周玉龍等（2011）的方法進(jìn)行牛副流感3型的PCR檢測，并對其產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳[3]。

2 結(jié)果

2.1 剖檢變化及組織病理學(xué)觀察

剖檢病死?？梢娬麄€(gè)肺臟呈暗紅色，質(zhì)硬如肝，切面較干燥呈顆粒狀，入水下沉，切面小葉間質(zhì)水腫、變寬（圖1A，B），氣管內(nèi)有泡沫樣黏液（圖1C），氣管黏膜充血腫脹，支氣管和縱隔淋巴結(jié)腫大出血，心臟、肝臟、腎臟腫脹、顏色變淡（圖1D），脾臟腫脹呈暗紅色，質(zhì)地變軟。所取病料經(jīng)常規(guī)石蠟切片，HE染色，顯微鏡下觀察，可見肺支氣管腔內(nèi)中含有黏液、脫落的上皮細(xì)胞、大量嗜中性粒白細(xì)胞及紅細(xì)胞構(gòu)成的炎性滲出物，肺組織廣泛性肺泡壁增厚，肺泡壁充血，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤增生，肺泡腔狹窄（圖2B），許多肺泡腔內(nèi)充滿漿液（圖2A）；脾臟淋巴組織出血、壞死（圖2C），髓竇漿液滲出，并見許多嗜中性粒白細(xì)胞浸潤（圖2D）；心肌纖維顆粒變性（圖2E）；肝廣泛性細(xì)胞空泡及脂肪變性（圖2F）。

圖1 剖檢病理變化

圖2 組織病理學(xué)變化（HE染色，100×）

2.2 細(xì)菌分離鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)

用血瓊脂平板劃線分離細(xì)菌，倒置放在37℃培養(yǎng)箱中過夜，可見在血瓊脂上形成灰白色濕潤而黏稠菌落，無溶血現(xiàn)象。在45°折光下，呈現(xiàn)鮮明的藍(lán)綠色并帶金光，邊緣有狹窄的紅黃色帶。挑取單個(gè)菌落、涂片，經(jīng)瑞氏染色，鏡下觀看，呈典型兩極著色，革蘭氏染色呈革蘭氏陰性短桿菌。藥敏試驗(yàn)表明最敏感的藥物為慶大霉素，其次是氟苯尼考。

2.3 生化鑒定

取血瓊脂板菌落，進(jìn)行生化試驗(yàn)。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其能分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇、半乳糖，只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；該菌不發(fā)酵乳糖、鼠李糖、菊糖、山梨醇。

2.4 病毒分子生物學(xué)檢測

電泳結(jié)果顯示，牛副流感3型病毒為陰性。

2.5 藥物治療

病牛全群用0.01%的氟苯尼考飲水，連用4天，有明顯癥狀的病牛肌肉注射慶大霉素，按10mg/kg體重，每天注射1次，連用3～5天，病牛未再發(fā)生死亡，癥狀逐漸消失。

3 討論

3.1 根據(jù)發(fā)病背景，結(jié)合臨床癥狀、剖檢病變、實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果以及臨床藥物治療效果綜合判定，該病例為因運(yùn)輸繼發(fā)病毒與細(xì)菌尤其是巴氏桿菌感染引起的間質(zhì)性、漿液性復(fù)合型肺炎。

3.2 通過病毒的分子生物學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，該病例的病原體并非是牛副流感病毒3型，但也不能排除其他病毒如傳染性牛鼻氣管炎病毒、腺病毒等感染，從細(xì)菌分離結(jié)果來看，確定有巴氏桿菌感染。另外，病理組織學(xué)觀察肺組織具有明顯的間質(zhì)性肺炎病變，所以很可能同時(shí)存在支原體感染。

3.3 運(yùn)輸熱是在運(yùn)輸應(yīng)激作用下引起的多種病毒、細(xì)菌感染所致的以肺炎為主要表現(xiàn)的呼吸系統(tǒng)感染。與此病有關(guān)的主要病原微生物有病毒（主要有副流感病毒、流感病毒、傳染性牛鼻氣管炎病毒、牛腺病毒、呼腸孤病毒、鼻病毒、腸病毒、牛病毒性腹瀉病毒）、細(xì)菌（主要有巴氏桿菌、支原體、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、化膿棒狀桿菌、放線桿菌等，其中巴氏桿菌是牛運(yùn)輸熱最重要的病原之一）[4]。一般來說，正常牛體內(nèi)會攜帶多種上述病毒、細(xì)菌，這些病原微生物在正常情況下不會造成攜帶牛發(fā)病，而當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，機(jī)體免疫抵抗力下降，首先，潛伏的副流感病毒、流感病毒、傳染性牛鼻氣管炎病毒等呼吸道常在病毒大量復(fù)制擴(kuò)散，感染致病。呼吸道條件性致病菌尤其是巴氏桿菌和支原體等病原微生物繼發(fā)感染，從而導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)多病原混合感染[5]。該牛場所購犢牛來自不同養(yǎng)殖場，幾經(jīng)倒手，運(yùn)輸前已處于應(yīng)激狀態(tài)，另外，又是對運(yùn)輸熱較敏感的犢牛，這是該病例發(fā)生的主要原因。

3.4 據(jù)細(xì)菌分離及藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物對發(fā)病牛群進(jìn)行緊急防治是最實(shí)際的處理措施，由于該牛群發(fā)病率已經(jīng)超過50%，鑒于病重牛已停止采食及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，采取對病重牛注射慶大霉素及全群氟苯尼考飲水的防治方案，這兩種藥物屬于廣譜抗生素，藥理上兩者具有協(xié)同作用，對巴氏桿菌、嗜血桿菌、支原體等呼吸道常在病原菌都具有良好療效。

4 防治建議

4.1 為防止本病發(fā)生首先要做好肉牛長途運(yùn)輸?shù)臏?zhǔn)備工作，在裝載車輛內(nèi)鋪上5～8cm厚的墊草，防止運(yùn)輸過程中?；箵p傷，減輕牛的應(yīng)激反應(yīng)；在裝載牛只的車輛兩邊用帆布遮擋，減少直流風(fēng)對牛的鼻孔及口腔直吹；不要過度擁擠；加強(qiáng)護(hù)理，盡量減輕運(yùn)輸過程導(dǎo)致的應(yīng)激反應(yīng)。購牛到場后及時(shí)做好護(hù)理及藥物防治工作，前三天可選擇氟苯尼考、多西環(huán)素進(jìn)行藥物預(yù)防。自繁自養(yǎng)模式是肉牛場解決該病的根本措施，所以，有條件的肉牛場最好建立自己的繁殖牛群，做到自繁自養(yǎng)。

4.2 牛只到達(dá)新牧場時(shí)，前三天要密切關(guān)注牛群狀況，逐個(gè)測量體溫，如有異常立刻隔離觀察，并采取適當(dāng)?shù)闹委煷胧?/p>

4.3 購牛時(shí)若需要長途運(yùn)輸，建議在運(yùn)輸前使用鎮(zhèn)靜類藥物，降低在運(yùn)輸過程中牛只對外界環(huán)境變化的敏感性。運(yùn)輸前可以一次性肌肉注射鹽酸氯丙嗪注射液，劑量按每千克體重1～1.5mg（藥量大小視運(yùn)輸距離而定）[6]。

[1]唐萬泉. 牛運(yùn)輸熱[J]. 遼寧畜牧獸醫(yī)，1984 （5）：36-37.

[2]徐百萬. 動物檢疫檢驗(yàn)工作[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：162-163.

[3]周玉龍，吳海濤，任亞超，等. 牛副流感病毒 3 型的分離鑒定及感染?？贵w消長規(guī)律的研究[J]. 中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2011，27（1）：23-27.

[4]南京農(nóng)學(xué)院.家畜病理生理學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1984：80-81.

[5]陳懷濤，許樂仁.獸醫(yī)病理學(xué)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：792-793.

[6]劉思當(dāng).牛運(yùn)輸熱的診治[J]. 山東畜牧獸醫(yī)，2011（11）：42.

Diagnosis of a Suspected Shipping Fever Case in Beef Cattle

Yue Ruichao1，Cheng Zilong1，Xue Zhonghang2，Liu Sidang1

College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University，Tai’an，Shandong 271000；
2. Zhangjiawa Sub-District Off ce，Laiwu Economic Zone，Laiwu，Shandong 271113）

In a cattle farm in Tai'an city，Shandong province，some of cattle appeared fever，salivating and dyspnea two days after purchasing from Heze city and two of them died. To explore the causes，comprehensive investigation and diagnosis were performed with regard to the background，clinical syndrome，necropsy，pathology，viral molecular biological detection and bacteria isolation and identif cation，and then specif c treatments were taken. The investigation showed that the purchased cattle were from different farms，had been handed over for several times and were in the stress state before transportation. Calves got ill acutely and severely with high morbidity，showing typical signs of shipping fever. The pathologic changes included interstitial and serous pneumonia and acute degeneration in heart，liver，spleen and kidney. Parainf uenza virus type 3 was not detected，pasteurella was detected and other virus and bacteria existed possibly. Application of gentamycin and f orfenicol in combination with environment improvement resulted in good effect.

cattle shipping fever；diagnosis；treatment

S858.23

：B

：1005-944X（2014）11-0060-04

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助（SDAIT-12-011-04）

劉思當(dāng)