桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用研究

唐秀能++韋紅棉（等）

[摘要] 目的 觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用，探討其作用機制。 方法 各自分別取60只合格昆明小鼠，隨機分為空白對照組、阿司匹林組（0.4 g/kg）、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中、低劑量組，每組各12只。采用熱板法、扭體法和甩尾法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用，并測定熱板法小鼠血清丙二醛（MDA）、前列腺素E2（PGE2）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 結(jié)果 ①與空白對照組比較，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾，在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05 或P < 0.01），顯著降低小鼠血清MDA和PGE2含量，提高SOD活性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05 或P < 0.01）。②與空白對照組比較，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物均可顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01），其中桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中和低劑量組（6.0、3.0、1.5 g/kg）扭體抑制率分別為45.45%、35.65%和15.66%。③無論是與空白對照組比較還是與本組給藥前比較，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物在給藥后30、60、90、120 min能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05 或P < 0.01）。 結(jié)論 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，其機制之一可能與減少炎癥介質(zhì)釋放、清除氧自由基有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物；鎮(zhèn)痛；機制

[中圖分類號] R285 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）01（b）-0020-04

Study on analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi

TANG Xiuneng WEI Hongmian▲ LU Cuilin ZHOU Zhipin LI Jianzhe LIU Guanda

Ruikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning 530011， China

[Abstract] Objective To observe analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi and to explore its analgesic mechanisms. Methods 60 Kunming mice were selected individually in hot-plate method， body-torsion method and swinging-tail method， all of them were divided into blank control group， Aspirin group （0.4 g/kg）， Ageratum conyzoides.L. low dosage group， medium dosage group， high dosage group with 12 rats in each group. Hot-plate method， body-torsion method and swinging-tail method were used respectively to investigate the analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi， and then， the contents of malondialdehyde （MAD） and prostaglandin E2 （PGE2） and the activity of superoxide dismutase （SOD） in hot-plate mice serum were measured. Results ①Compared with blank control group， thermal stimulation threshold in hot-plate mice was enhanced by the ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi， the latency time of the mice's licking at 30， 60， 90， 120 min respectively were prolonged， the differences were statistically significant（P < 0.05 or P < 0.01）. Meanwhile， MDA and PGE2 productions were reduced and SOD level in mice serum enhanced， the differences were statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. ②Compared with model control group， mouse twisting munbers were remarkably reduced by Ageratum conyzoides.L. from Guangxi， the differences were statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. Body twisting inhibition rate in high， medium and low dosage group （6.0， 3.0， 1.5 g/kg） were 45.45%， 35.65% and 15.66% respectively. ③Not only compared with blank control group but also compared with former dose in each group， the latency of the tail flick response in the mice at 30， 60， 90， 120 min were prolonged respectively after given the ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi， the differences were statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion The ethanol extract of Ageratum conyzoides.L. from Guangxi has significantly analgesic effects， one of its analgesic mechanisms may be relate to its ability of scavenging oxygen free radicals and reducing the release of inflammatory cytokines.

[Key words] Ethanol extract of Ageratum conyzoides.L.； Analgesic； Mechanism

藿香薊屬于菊科植物藿香薊，又名勝紅薊、白花草、白花臭草、消炎草等，屬一年生草本植物，多以全草或葉及嫩莖入藥，傳統(tǒng)藥用功效為清熱解毒、止血、止痛等，在亞洲、非洲、南美洲等地均廣泛使用[1-2]。我國多分布于廣東、廣西、云南、貴州、四川、江西、福建等地，民間常用于治感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、療瘡濕疹、外傷出血、燒燙傷等[3]。本研究采用野生于廣西田間荒地的桂產(chǎn)藿香薊進行鎮(zhèn)痛作用研究，旨在探討其鎮(zhèn)痛作用及機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康昆明種小鼠：體重（20±2）g；SPF級。動物許可證號：SCXK桂2009-0002，廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。

1.1.2 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的制備 桂產(chǎn)藿香薊地上部分陰干后粉碎，精確稱取2 kg，加20倍量95%乙醇浸泡1 h后加熱回流提取1 h，置冷后過濾，留置第1次濾液；藥渣加10倍量95%乙醇，加熱回流提取1 h，置冷后過濾，留置第2次濾液。合并2次濾液，減壓回收乙醇，提取液減壓濃縮，再分別配成實驗所需的相應(yīng)濃度的桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物[4]。

1.1.3 藥物、試劑及儀器 阿司匹林腸溶片，湖南新匯制藥股份有限公司，批號121104；鹽酸嗎啡片，青海制藥廠，批號20130317；冰醋酸、甲醇、氫氧化鉀均為分析純；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供；GJ-8402型熱板測痛儀，浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 對小鼠熱板實驗的影響 將雌性小鼠放在水溫調(diào)節(jié)到55℃的恒溫水浴熱板上，以小鼠舔后足的時間為痛閾指標(biāo)。所有小鼠在給藥之前均進行測痛，以痛閾值10～30 s為合格鼠。將合格小鼠60只隨機分為5組：空白對照組、阿司匹林組（0.4 g/kg）、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中、低劑量組（分別相當(dāng)于生藥6.0、3.0、1.5 g/kg），每組各12只。1次/d，連續(xù)灌胃給藥7 d，末次給藥后0.5、1、1.5、2 h各重復(fù)測定小鼠痛閾值，當(dāng)痛閾值大于60 s時停止測試，按60 s記痛閾值。所有痛閾值測定結(jié)束后，立即行小鼠眼球取血，3500 r/min離心15 min，棄下層沉淀，留上清液。將上清液置于-20℃冰箱保存，隨后按照試劑盒說明書的方法測定前列腺素E2（PGE2）、MDA的含量和SOD活性[5]。

1.2.2 對醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響 另取一批小鼠60只，體重（20±2）g，雌雄各半，分組及給藥同“1.2.1”項下。末次給藥后1 h，每只小鼠腹部注射0.6%醋酸溶液0.2 mL，立即記錄注射后15 min內(nèi)各組小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，并計算扭體抑制率[6-7]。扭體抑制率（%）=[（空白對照組小鼠扭體均數(shù)-給藥組小鼠扭體均數(shù)）/空白對照組小鼠扭體均數(shù)]×100%。

1.2.3 對甩尾法實驗的影響 另取一批小鼠，將小鼠尾尖3 cm滲入（48.0±0.5）℃恒溫水中，以小鼠第1次甩尾反應(yīng)時間作為痛閾指標(biāo)，所有小鼠在給藥之前均進行測痛，以痛閾值10～30 s為合格鼠，共60只。隨后分組及給藥同“1.2.1項下”。末次給藥后1 h，測定小鼠痛閾值，當(dāng)痛閾值大于60 s時停止測試，按60 s記痛閾值[8]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0對數(shù)據(jù)進行分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠熱板實驗的影響

與空白對照組比較，阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期（P < 0.05 或P < 0.01），桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。本組給藥前后比較，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期（P < 0.05或P < 0.01），桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠血清PGE2、MDA含量及SOD活性的影響

與空白對照組比較，阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠血清PGE2、MDA含量及SOD活性具有顯著的影響。阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組均能顯著降低小鼠血清PGE2、MDA含量，明顯提高小鼠血清SOD活性（P < 0.05 或P < 0.01）。見表2。

2.3 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響

與空白對照組比較，阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組均可顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)（P < 0.05或P < 0.01），桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)的趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

2.4 桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠甩尾反應(yīng)的影響

與空白對照組比較，阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠甩尾反應(yīng)具有顯著影響。阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期（P < 0.05或P < 0.01），桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。組內(nèi)給藥前后比較，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期（P < 0.05或P < 0.01），桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表4。

3 討論

熱板法和甩尾法是兩種較為典型的物理刺激致痛模型，扭體法致痛模型中較為典型的化學(xué)刺激模型。本實驗采用物理刺激致痛模型和化學(xué)刺激致痛模型的方法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對實驗小鼠的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果顯示，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾，在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期和小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期，能顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果比較具有顯著性差異。說明桂產(chǎn)藿香薊乙醇具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

產(chǎn)生疼痛的主要原因大多由PGE2、白三烯和氧自由基過多引起[9]。PGE2是一種非常重要致痛介質(zhì)，可直接作用于神經(jīng)末梢引起疼痛，下調(diào)痛覺感受器的痛閾值，提高其對其他致痛因子的敏感性，也可啟動疼痛所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在外周和中樞都有重要的作用[10-12]，同時能增強組胺、5-羥色胺、緩激肽等其他炎癥、疼痛介質(zhì)的協(xié)同作用[13-14]。MDA是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，在外周和中樞氧自由基均有致痛作用。SOD是自由基有力的清除劑，可通過減少自由基的大量產(chǎn)生而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。本研究結(jié)果顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能降低實驗小鼠血清中PGE2和MDA含量，提高小鼠血清SOD活性，提示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用可能與減少炎癥介質(zhì)釋放、清除氧自由基有關(guān)。

有文獻(xiàn)報道，小鼠熱板法實驗的舔足底反應(yīng)不僅僅是脊髓反應(yīng)，而且可能和高級中樞有關(guān)[15]，而對冰醋酸引起小鼠疼痛的扭體法實驗可能外周鎮(zhèn)痛有關(guān)[16]，本實驗顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對熱板法和扭體法實驗小鼠均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，可以推測桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用與中樞和外周均有關(guān)系。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Okunade AL. Ageratum conyzoides L.（Asteraceae） [J]. Fitoterapia，2002，73（1）：1-16.

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[4] 張慧芹，蔡華丹，楊美娟，等.茵陳蒿湯水提物和醇提物對D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷保護作用的比較研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，36（2）：113-116.

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[9] Grisham MB，Granger DN，Lefer DJ. Modulation of leukocyte-endothelial interaclions by teactive metabolites of oxygen and nitrogen relevance to ischemic heart disease [J]. Free Radic Bio Med，1998，25（4-5）：404-433.

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[12] Gühring H，Gorig M，Ates M，et al. Suppressed injury-induced rise in spinal Prostaglandin E2 production and reduced early thermal hyperalgesia in iNOS-deficient mice [J]. J Neurosci，2000，20（17）：6714-6720.

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[14] 李玉林.病理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：60-69.

[15] 程體娟，楊軍英，王奮剛，等.嘛呢骨痹液的抗炎鎮(zhèn)痛作用實驗研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2004，15（1）：32-34.

[16] 黃慶芳，馮承恩，房志堅，等.金鈕扣提取物的解熱、鎮(zhèn)痛作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（13）：1066-1068.

（收稿日期：2013-11-08 本文編輯：李繼翔）

3 討論

熱板法和甩尾法是兩種較為典型的物理刺激致痛模型，扭體法致痛模型中較為典型的化學(xué)刺激模型。本實驗采用物理刺激致痛模型和化學(xué)刺激致痛模型的方法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對實驗小鼠的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果顯示，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾，在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期和小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期，能顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果比較具有顯著性差異。說明桂產(chǎn)藿香薊乙醇具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

產(chǎn)生疼痛的主要原因大多由PGE2、白三烯和氧自由基過多引起[9]。PGE2是一種非常重要致痛介質(zhì)，可直接作用于神經(jīng)末梢引起疼痛，下調(diào)痛覺感受器的痛閾值，提高其對其他致痛因子的敏感性，也可啟動疼痛所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在外周和中樞都有重要的作用[10-12]，同時能增強組胺、5-羥色胺、緩激肽等其他炎癥、疼痛介質(zhì)的協(xié)同作用[13-14]。MDA是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，在外周和中樞氧自由基均有致痛作用。SOD是自由基有力的清除劑，可通過減少自由基的大量產(chǎn)生而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。本研究結(jié)果顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能降低實驗小鼠血清中PGE2和MDA含量，提高小鼠血清SOD活性，提示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用可能與減少炎癥介質(zhì)釋放、清除氧自由基有關(guān)。

有文獻(xiàn)報道，小鼠熱板法實驗的舔足底反應(yīng)不僅僅是脊髓反應(yīng)，而且可能和高級中樞有關(guān)[15]，而對冰醋酸引起小鼠疼痛的扭體法實驗可能外周鎮(zhèn)痛有關(guān)[16]，本實驗顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對熱板法和扭體法實驗小鼠均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，可以推測桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用與中樞和外周均有關(guān)系。

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[4] 張慧芹，蔡華丹，楊美娟，等.茵陳蒿湯水提物和醇提物對D-氨基半乳糖胺誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷保護作用的比較研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，36（2）：113-116.

[5] 周秋雯，徐建國.慢性疼痛動物模型的研究進展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報，2008，21（6）：638-642.

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[7] 張芬，?；埒P，薛莉君，等.瓦松鎮(zhèn)痛作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2011，22（12）：2478-2479.

[8] 唐秀能，黃仁彬，黃媛恒，等.月光花豆乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用及其機制研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（12）：3153-3154.

[9] Grisham MB，Granger DN，Lefer DJ. Modulation of leukocyte-endothelial interaclions by teactive metabolites of oxygen and nitrogen relevance to ischemic heart disease [J]. Free Radic Bio Med，1998，25（4-5）：404-433.

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[13] Magder S，Neculcea J，Neculcea V，et al. Lipopolysaccharide and TNF-alpha produce very similar changes in gene expression in human endothelial cells [J]. J Vasc Res，2006， 43（5）：447-461.

[14] 李玉林.病理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：60-69.

[15] 程體娟，楊軍英，王奮剛，等.嘛呢骨痹液的抗炎鎮(zhèn)痛作用實驗研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2004，15（1）：32-34.

[16] 黃慶芳，馮承恩，房志堅，等.金鈕扣提取物的解熱、鎮(zhèn)痛作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（13）：1066-1068.

（收稿日期：2013-11-08 本文編輯：李繼翔）

3 討論

熱板法和甩尾法是兩種較為典型的物理刺激致痛模型，扭體法致痛模型中較為典型的化學(xué)刺激模型。本實驗采用物理刺激致痛模型和化學(xué)刺激致痛模型的方法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對實驗小鼠的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果顯示，桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾，在給藥后30、60、90、120 min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期和小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期，能顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果比較具有顯著性差異。說明桂產(chǎn)藿香薊乙醇具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

產(chǎn)生疼痛的主要原因大多由PGE2、白三烯和氧自由基過多引起[9]。PGE2是一種非常重要致痛介質(zhì)，可直接作用于神經(jīng)末梢引起疼痛，下調(diào)痛覺感受器的痛閾值，提高其對其他致痛因子的敏感性，也可啟動疼痛所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在外周和中樞都有重要的作用[10-12]，同時能增強組胺、5-羥色胺、緩激肽等其他炎癥、疼痛介質(zhì)的協(xié)同作用[13-14]。MDA是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，在外周和中樞氧自由基均有致痛作用。SOD是自由基有力的清除劑，可通過減少自由基的大量產(chǎn)生而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。本研究結(jié)果顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能降低實驗小鼠血清中PGE2和MDA含量，提高小鼠血清SOD活性，提示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用可能與減少炎癥介質(zhì)釋放、清除氧自由基有關(guān)。

有文獻(xiàn)報道，小鼠熱板法實驗的舔足底反應(yīng)不僅僅是脊髓反應(yīng)，而且可能和高級中樞有關(guān)[15]，而對冰醋酸引起小鼠疼痛的扭體法實驗可能外周鎮(zhèn)痛有關(guān)[16]，本實驗顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對熱板法和扭體法實驗小鼠均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，可以推測桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用與中樞和外周均有關(guān)系。

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（收稿日期：2013-11-08 本文編輯：李繼翔）