補腎活血方對鵪鶉動脈粥樣硬化的防治作用及其量效相關(guān)性

李明秀，王 毅，陳學(xué)忠

四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所老年科，四川 成都 610031

隨著社會工業(yè)化、人口老齡化，心腦血管病的發(fā)病率及死亡率呈上升趨勢，嚴(yán)重威脅中老年人的健康與生命。動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的重要病理基礎(chǔ)，對中老年人的健康和生存質(zhì)量有極大影響，本研究探討補腎活血方對高脂血癥所致AS的防治作用及對AS斑塊穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 動物與飼料 鵪鶉，體質(zhì)量(70～90)g，4周齡，雄性，由新津縣鵪鶉養(yǎng)殖專業(yè)戶提供，并配給全價顆粒飼料。高脂飼料各原料配伍比例［1］：膽固醇∶蛋黃粉∶豬油∶花生油∶基礎(chǔ)飼料 =1∶8∶6∶6∶79。取膽固醇69.9 g、蛋黃粉571.5 g，預(yù)先混合；再取豬油(微波爐中加熱，融化)428.7 g、花生油428.7 g混合均勻；將上述配伍原料混合物混合后再加5.5 kg基礎(chǔ)飼料制備成一定濕度的高脂飼料。每次制作6天食用量。每日平均每只造模組鵪鶉攝食量約11.5 g，含膽固醇0.15 g、豬油0.89 g、蛋黃粉1.19 g、花生油0.89 g?；A(chǔ)飼料由新津縣鵪鶉養(yǎng)殖專業(yè)戶提供。

1.2 藥品 補腎活血方浸膏(批號：110306，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所提供)含生藥量為0.3 g/mL，人用量為0.7 g(原生藥)/kg。該方主要由淫羊藿 30 g，水蛭 6 g，姜黃 15 g，川芎 15 g，天麻15 g等中藥組成，配制方法：淫羊藿和水蛭加70%乙醇回流提取3次、濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，藥液放置備用；川芎、姜黃加水浸泡過夜，水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油8小時，濾過，收集藥液，放置備用；川芎、姜黃藥渣與靈芝等其他組分加水煎煮濾過，合并上述藥液，濃縮成浸膏，置4℃冰箱備用。辛伐他?。阂?guī)格：20mg/片，成都華宇制藥有限公司，批號：20110608。

1.3 方法

1.3.1 分組及給藥 100余只鵪鶉適應(yīng)性飼養(yǎng)2周，淘汰體弱者，按體質(zhì)量隨機分組；對照組給予基礎(chǔ)飼料，其他各造模組均以高脂飼料喂養(yǎng)至實驗結(jié)束；各造模組適應(yīng)性高脂飼料喂養(yǎng)1周后開始給予相應(yīng)藥物；對照組與模型組以生理鹽水灌胃，見表1。

表1 實驗分組及給藥方法

1.3.2 指標(biāo)檢測

1.3.2.1 血清總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的檢測 給藥 3、6、9、12周時取鵪鶉翅膀下靜脈血［1］(每次只取 8只)0.5mL，以 3 000 rpm離心 20分鐘，分離出血清，動態(tài)觀察各組動物CHOL、TG水平的變化，評價補腎活血方對CHOL的影響并間接觀察疾病的進展過程。

1.3.2.2 低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的檢測 給藥12周時，同“1.3.2.1”項方法靜脈取血待測。并根據(jù)檢測數(shù)據(jù)，計算動脈粥樣硬化指數(shù)AI值［2］及HDL-C/LDL-C比值。

AI=(CHOL-HDL-C)/(HDL-C)

1.3.2.3 AS病變程度觀察方法 給藥12周后，

將鵪鶉頸總動脈放血處死，解剖暴露胸腔，小心分離各臟器、周圍組織、脂肪等，剖取主動脈；0.9%生理鹽水沖洗，吸干水分，10%中性福爾馬林固定；乙醇脫水，石蠟包埋、切片，作HE染色。光鏡下觀察各組鵪鶉AS模型的泡沫細(xì)胞及粥樣性病理變化情況［3］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。實驗結(jié)果以(χ±s)表示，2組間比較用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 實驗進行過程中，實驗動物進食、飲水及大小便均正常，活動靈活、機警。實驗過程中2只動物因感冒致死，1只為模型組，1只為陽性組，逐一解剖后發(fā)現(xiàn)主要臟器均無器質(zhì)性改變，主動脈因造模時間短而無明顯病理性改變，其表面光滑、柔軟。

2.2 補腎活血方對血清CHOL水平的影響 與對

照組相比，給藥3周時各造模組CHOL水平顯著升高(P＜0.05)；陽性組在給藥3周、6周、11周時較模型組顯著下降(P＜0.05)；補腎活血方大劑量組中CHOL含量達到峰值后在給藥9周、11周時下降，與模型組相比有顯著性差異(P＜0.05)；補腎活血方中、小劑量組中CHOL水平也有下降，但與模型組比較無顯著性差異。陽性組降CHOL效果優(yōu)于補腎活血方；補腎活血方降CHOL水平呈劑量依賴性，其大劑量組降CHOL效果顯著，見表2。

2.3 補腎活血方對血清TG水平的影響 模型組和給藥組中TG水平均在給藥6周時達高峰，各給藥組TG水平與對照組相比均有顯著性差異(P＜0.05)；TG升高之后模型組基本維持原水平，各給藥組則因藥物作用而逐漸下降。補腎活血方藥效較陽性藥明顯，其大劑量組、小劑量組在給藥9周時TG水平與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。給藥11周時，各給藥組TG水平與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。由此得知，補腎活血方降TG效果稍優(yōu)于陽性藥，且有劑量依賴性，見表3。

表2 補腎活血方對血清CHOL水平的影響 mmol/L

表3 補腎活血方對血清TG水平的影響 mmol/L

2.4 補腎活血方對血清HDL-C、LDL-C水平及HDL-C/LDL-C比值、AI值的影響 給藥11周時，各造模組HDL-C水平與對照組比較均有升高(P＜0.01)；但各給藥組與模型組間差異不大(P＞0.05)。給藥11周時，各造模組LDL-C水平與對照組相比有顯著性差異(P＜0.01)；此時，陽性藥LDL-C值下降幅度大，較模型組差異顯著(P＜0.01)；補腎活血方各劑量組存在劑量依賴性，大劑量組降LDL-C水平最為明顯，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)；中、小劑量組降LDL-C效果不明顯。模型組中HDL-C/LDL-C值顯著低于對照組(P＜0.01)；陽性組與補腎活血方大劑量組中該比值較模型組高(P＜0.05)。各造模組的AI值均比對照組高(P＜0.01)；陽性組與補腎活血方大劑量組AI值比模型組低且有顯著性差異(P＜0.05)，見表4。

表4 給藥11周時補腎活血方對HDL-C、LDL-C水平及HDL-C/LDL-C比值、AI值的影響 mmol/L

2.5 主動脈HE染色結(jié)果 對照組主動脈形態(tài)正常，內(nèi)膜光滑、完整，無脂紋、泡沫細(xì)胞與斑塊，內(nèi)皮下無脂質(zhì)沉積，中膜平滑肌細(xì)胞(Smooth muscle cel l，SMC)排列整齊規(guī)則，內(nèi)彈力板完整；模型組內(nèi)皮細(xì)胞損傷脫落，大斑塊形成，泡沫細(xì)胞多達十幾層，SMC排列紊亂，增生，內(nèi)彈力板分離，斷裂，甚至消失。補腎活血方大、中、小劑量組仍有較多泡沫細(xì)胞，但斑塊形成率及斑塊形成范圍明顯縮小，中膜SMC紊亂，內(nèi)彈力板斷裂或消失。與模型組相比，陽性組與補腎活血方大劑量組AS病情較輕，中、小劑量組與模型組相似，見圖1。

圖1 各組鵪鶉主動脈HE染色結(jié)果比較(×200)

3 討論

補腎活血方對血清TG降低作用最強，CHOL、LDL-C次之，HDL-C升高不明顯。調(diào)血脂作用呈劑量依賴性，補腎活血方大劑量組降血脂效果明顯，中、小劑量組降血脂效果不明顯。提示：補腎活血方有降血脂作用并存在劑量依賴性，可明顯減小斑塊形成率及斑塊面積，具有一定的抗AS作用。補腎活血方具有活血化瘀、補腎健腦、通絡(luò)開竅之功效，長期服用此藥能使腎精充盈，血活絡(luò)通，腦髓得精血充養(yǎng)而功能健旺，達到治療動脈粥樣硬化及穩(wěn)定斑塊的目的。

［1］ Liu P，Sun M，Sader S.Matrix metal loproteinases in cardiovascular disease［J］.Can J Cardiol，2006，22(Suppl B)：25B-30B.

［2］ Gil lian Murphy，Hideaki Nagasa.Progress in mat rix metal loproteinase research［J］.Mol Aspects Med，2008，29(5)：290-308.

［3］ Chung L，Dinakarpandian D，Yoshida N，et al.Col lagenase unwinds triple-hel ical col lagen prior to peptide bond hydrolysis［J］.EMBO J，2004，23(15)：3020-3030.