油炸小食品中乙二胺四乙酸二鈉的高效液相色譜法測定

陳肇臻，劉小剛

（龍巖市產品質量檢驗所，福建 龍巖364000）

油炸小食品中乙二胺四乙酸二鈉的高效液相色譜法測定

陳肇臻，劉小剛

（龍巖市產品質量檢驗所，福建 龍巖364000）

目的 文中建立一種測定油炸食品中乙二胺四乙酸二鈉的液相色譜檢測方法。方法 油炸小食品經無水乙醚除油并揮去乙醚，水萃取，加入氯化銅溶液及抗壞血酸溶液形成Cu-EDTA絡合物。色譜分離時使用C18分析柱，甲醇、四正丁基溴化銨緩沖液為流動相，梯度洗脫，245nm波長檢測。結果 該方法線性范圍20.00μg?ml-1～ 400.00μg?ml-1，相關系數(shù)r：0.9999,檢出限6.5mg?kg-1，定量限21mg?kg-1?；厥章剩?3.7～100.7%；精密度: RSD60.2%。結論 該方法的準確性和精密度滿足檢測要求需要。

油炸小食品；乙二胺四乙酸二鈉；梯度洗脫；反相高效液相色譜法

1 引言

乙二胺四乙酸二鈉，GB2760-2011食品添加劑使用標準[1]定義其功能類別為鰲合劑、防腐劑、抗氧化劑、加工助劑，易溶于水，不溶于乙醚。EDTA是含有羧基（硬堿）和氨基（中間堿）的螯合劑，其分子中兩個羧基上的H+轉移到N原子上，形成雙極離子。由于它的分子中含有兩個氨氮與四個羧氧基，具有氨氮與羧氧的絡合能力，若溶液的酸度很高，它的兩個羧基可再接受H+，形成H6Y2-，這樣EDTA就相當于六元酸，有六級離解平衡，幾乎能與所有的金屬離子絡合，具有廣泛的配位性能，與金屬離子形成穩(wěn)定的螯合物，具防腐護色作用。油炸小食品中微量的鐵、銅等會促進油脂氧化、變色，添加乙二胺四乙酸二鈉可提高油炸小食品抗氧化及防止油炸食品氧化變色。目前，國內檢測乙二胺四乙酸二鈉的方法主要有國家標準[2]、高效及超高效液相色譜法[3-8]和離子色譜法[9-10]等，而GB2760-2011食品安全國家標準 食品添加劑使用標準[1]未許可油炸小食品添加乙二胺四乙酸二鈉，特建立本測定方法利用保留時間定性,外標峰面積法定量檢測油炸小食品中乙二胺四乙酸二鈉含量。

2 材料與方法

2.1試劑

乙二胺四乙酸二鈉標準物質（純度99.96%）；無水乙醚；乙酸；0.5%氯化銅；5%抗壞血酸；磷酸；四正丁基溴化銨；無水乙酸鈉；甲醇（色譜純）；除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為超純水。

2.2儀器

Waters e2695高效液相色譜儀（2998二極管陣列檢測器）梅特勒-托利多XS205DU分析天平、萊馳GM200搗磨機；漩渦混合器；湘儀TGL-20M高速冷凍離心機；超聲波清洗器SK5200H；101-1E烘箱；pHS-3C酸度計；SHB-B95A循環(huán)水式真空泵。

2.3色譜條件

檢測器：二極管陣列檢測器，波長245nm，保留時間及光譜圖定性，外標峰面積法定量。

色譜柱：Waters Funfire C18 250×4.6mm 5μm不銹鋼柱，柱溫32℃。

流動相：A:甲醇，B：緩沖鹽［（6.45g四正丁基溴化銨+2.46g無水乙酸鈉）/L］。

流速：變流速梯度洗脫；進樣量：10μl。

時間程序如表1所示

表1 梯度洗脫的時間程序

2.4 標準溶液的配制

乙二胺四乙酸二鈉標準儲備溶液：精確稱取1.0004g預先于85℃烘箱中烘至恒重的乙二胺四乙酸二鈉于100.0ml容量瓶中超純水定容搖勻，濃度為10.00mg?ml-1。

乙二胺四乙酸二鈉工作標準使用液：移取5.00ml乙二胺四乙酸二鈉標準儲備溶液于50.0ml容量瓶中超純水定容搖勻，濃度為1.0mg/ml, 再 稀 釋 成 20.00、40.00、100.00、200.00、400.00μg?ml-1。

2.5 樣品的前處理方法

樣品用GM200搗磨機粉磨，裝瓶待用。試樣提?。壕_稱取2g樣品于50ml離心管中，105℃烘干，加15ml無水乙醚漩渦混合2min，超聲10min，8000rpm離心5min，去有機相，再用無水乙醚除油兩次，試樣常溫揮干后經65℃烘箱除乙醚，除油后的樣品加30ml超純水搖勻后超聲20min，加2.5ml0.5%CuCl2及0.5ml5%抗壞血酸，超純水定容50.0ml搖勻，8℃10000rpm離心8min，上清液用0.45μm一次性尼龍過濾器過濾于樣品瓶中備用。

加 標 回 收： 移 0.2ml，0.5ml、1.0ml、1.5ml200.00μg?ml-1乙二胺四乙酸二鈉工作標準使用液于事先稱有樣品離心管中，后同試樣提取。

3 結果與討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1流動相

甲醇比例影響保留時間，比例高時保留時間短。目標物出峰后提高總流速及甲醇比例，使樣品中強保留物盡快流出從而避免干擾下一樣品。流動相緩沖鹽未調pH目標物保留時間較磷酸調緩沖鹽pH4.0提前出峰約1min，拖尾因子0.99，色譜峰未見異常，本方法流動相緩沖鹽未調pH。

3.1.2檢測波長

EDTA-2Na的紫外響應非常弱，波長掃描無特征吸收峰。通過轉化為Cu-EDTA，最大特征吸收峰為242nm。本方法采用245nm波長檢測，光譜圖匹配輔助定性。

3.1.3樣品pH值

當pH3.8-4.0時EDTA與Cu生成比較穩(wěn)定的絡合物，EDTACu可穩(wěn)定3h，EDTA與Fe在pH在小于1.5形成穩(wěn)定絡合物；EDTA與AL形成穩(wěn)定絡合物pH在2-3，EDTA與Ca在堿性條件下形成穩(wěn)定的絡合物，在酸性條件下Ca難于被EDTA絡合，本方法樣品中的鈣、鐵、鋁不干擾EDTA-2Na的檢測。

3.1.4當樣品中EDTA2Na濃度超過1g/ml時所加的氯化銅不足以完全轉化EDTA2Na，檢測結果偏低。

3.2 標準曲線

乙二胺四乙酸二鈉保留時間23.7min左右,基線分離。以濃度為X軸，峰面積為Y軸建立校正曲線，標準曲線回歸方程ρ(μg?ml-1)=-0.02450+2.0046×10-6S,相關系數(shù)r=0.99989線性范圍：20.0～400.0μg/ml，相關系數(shù)0.9998。樣品加標回收率93.7～100.7%。以3倍噪聲作為方法的檢出限（噪聲0.0153mV），檢出限為6.5mg/kg(2g樣品，定容50.0ml計)；定量限21mg/kg（10倍噪聲計）。

圖1 油炸地瓜干樣品色譜圖

圖2 EDTA2Na標樣色譜圖（200.0μ g?ml-1）

圖3 EDTA2Na標樣吸收光譜圖

圖4 EDTA2Na工作曲線圖

3.3 加標回收率及重復性試驗

表2 回收試驗

樣品提取液按1.2色譜條件連續(xù)6次進樣，保留時間RSD6為0.15%，峰面積RSD6為0.10%。

稱取樣品6個按2.5提取，2.3色譜條件依次進樣，保留時間RSD6為0.20%，樣品中EDTA2Na含量RSD6為0.11%。

4 結論

該方法的靈敏度、準確性、精密度、重復性完全可滿足檢測要求。

[1] GB2760-2011食品安全國家標準 食品添加劑使用標準[S].

[2] SN/T1018-2011出口食品罐頭中乙二胺四乙酸含量檢測方法[S].

[3] 呂曉華，文紅，許紅琴. 高效液相色譜法測定板栗罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的含量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009年，3：517-518.

[4] 施旭霞，陳笑梅, 反相高效液相色譜法測定罐頭食品中乙二胺四乙酸的殘留量[J]. 色譜, 2000，18（5）：445-448.

[5] 劉鵬春，李鴻鳴，王冰高效液相色譜法測定醬菜中EDTA-2Na的含量[J]. 中國公共衛(wèi)生，2001, 17(11)：1027-1027.

[6] 羅袆，趙永彪，李淑娟. 反相高效液相色譜法測定食品中EDTA的含量[J]. 中國食品添加劑，2006, (4)：156-159.

[7] 王清燕. 高效液相色譜法測定食品中乙二胺四乙酸二鈉[J]. 黎明職業(yè)大學學報，2011，1，41-43.

[8] 何樹坤. 超高效液相色譜法測定地瓜干中EDTAB的研究[J]. 福建輕紡，2009，6，31-33.

[9] 黃建，李文仙，霍軍生. 反相離子對高效液相色譜法測定果味飲料中的乙二胺四乙酸二鈉[J]. 中國食品工業(yè)，2009，6，5-56.

[10] 李琛，李迎麗，唐開紅. 離子色譜法測定罐頭、醬菜等食品中的EDTA-2Na含量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005，10，1233-1234.

Determination of Disodium EDTA in Fried Small Foods by Using HPLC Method

CHEN Zhao-zhen, LIU Xiao-gang
(Longyan Provincial Central Inspection Institute, Longyan 364000, Fujian, China)

Objective:A method of determination of disodium EDTA of fried small foods by HPLC is established in this paper. Method: Through removing oil by anhydrous ether, evaporating ether subsequently, EDTA in fried small foods is then extracted by water. Addition of CuCl2solution and ascorbic acid solution, then the Cu-EDTA complex combond can be formed. In the chromatographic separation, C18 analysis column is served as isolated column, methanol mixed with tetra-n-butylammonium bromide buffer solution(pH=4.0)is used as mobile phase, gradient elution program is made and the detection wavelength is 245 nm. Result: Linear range of the standard curve is 20.00μg ? ml-1～ 400.00μg ? ml-1with the correlation coefficient r=0.9999. The recovery rate of the method is 93.7 ～ 100.7%.The detection limit is 6.5mg?kg-1and the quantitative limit of the method is 21mg?kg-1. Conclusion Precision and accuracy of this method meets the requirements of the detection.

Fried small foods; Disodium EDTA; Gradient elution; RP-HPLC

2013-05-06

陳肇臻，男，龍巖市產品質量檢驗所，光譜色譜檢驗室主任

劉小剛，男，龍巖市產品質量檢驗所，副所長，工程師