微波法萃取田基黃中總黃酮

郝志云，楊新周，林惠昆，羅 雯

（1.德宏師范高等?？茖W(xué)校，理工系；云南 德宏 678400；

2.云南民族大學(xué)化學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院；云南 昆明 650031）

微波法萃取田基黃中總黃酮

郝志云1，楊新周1，林惠昆1，羅 雯2

（1.德宏師范高等專科學(xué)校，理工系；云南 德宏 678400；

2.云南民族大學(xué)化學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院；云南 昆明 650031）

以田基黃為原料，對微波法提取田基黃中總黃酮的工藝進(jìn)行了研究，確定了最優(yōu)工藝參數(shù)：微波提取時(shí)間5 min，提取次數(shù)1，提取溫度50℃，提取溶劑為60%乙醇，料液比為1∶35／（g／mL）。最佳條件下，田基黃中的總黃酮提取率為14.24%。

微波萃取法；黃酮；田基黃

目前國內(nèi)外提取中草藥黃酮類物質(zhì)的方法已有許多報(bào)道，主要有索氏提取法［1］、超聲波提取法［2］、回流法［3］、微波法［4］等。其中微波法節(jié)省溶劑、加熱時(shí)間短、快速、高效。中草藥中黃酮類化合物有著很多的藥理學(xué)作用［5］，本文以微波提取法提取田基黃中總黃酮，并測定其含量，為田基黃藥材質(zhì)量控制和進(jìn)一步研究提供參考。

1 材料與儀器

田基黃（采購于騰沖）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉，均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

WFZ UV－2000型紫外分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；EXCEL微波快速消解儀（上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；WL－200高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市威力制藥機(jī)械廠）；EPED－20TH實(shí)驗(yàn)超純水器（南京易普易達(dá)科技有限公司）。

1.2 樣品預(yù)處理

樣品用自來水洗凈，蒸餾水洗2～3次，再用超純水洗凈，置于烘箱中60～65℃烘干，取出后粉碎，過100目（0.150 mm）篩，將篩好的粉末置于密封袋中備用。

2 試驗(yàn)方法

2.1 總黃酮的測定方法

采用NaNO2－Al（NO3）3－NaOH法測定總黃酮。取適量的樣品液于25 mL的容量瓶中，加30%的乙醇10.00 mL及5%的NaNO2溶液1.00 mL搖勻，靜置6 min，加10%的Al（NO3）3溶液1.00 mL搖勻，靜置6 min，加1 mol／L的NaOH溶液10.00 mL搖勻，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，以試劑為空白，于最大吸收波長處進(jìn)行測定［6］。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)液的制備

準(zhǔn)確稱取120℃干燥恒重的蘆丁0.05 g（精確至0.0001 g）用60%微熱乙醇定容至50 mL搖勻，得質(zhì)量濃度為1.00 mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

2.2.2 最大吸收波長的確定

準(zhǔn)確取1.00 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，用“2.1”的方法測定其在400～600 nm波長范圍內(nèi)的吸光度，得蘆丁儲(chǔ)備液在500 nm處有最大吸收，即確定最大吸收波長為500 nm。以下試驗(yàn)均在500 nm波長處進(jìn)行。

2.2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別準(zhǔn)確取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于9個(gè)25 mL的容量瓶中（質(zhì)量濃度分別為0、8、16、24、32、48、56、64 μg／mL），用“2.1”的方法于500 nm波長處測定吸光度。以蘆丁質(zhì)量濃度（μg／mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線方程為A＝0.012 5C＋0.003 2（式中：A為吸光度；C為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量濃度（μg／mL）），相關(guān)系數(shù)r＝0.999 9。

2.3 總黃酮含量的測定

準(zhǔn)確稱取0.200 0 g田基黃樣品于萃取罐中，加入適量的乙醇后置于微波消解儀中按預(yù)定的條件萃取，萃取結(jié)束用0.45 μm濾膜過濾，定容至50 mL，得樣品液。準(zhǔn)確移取2.00 mL樣品液于25 mL的容量瓶中，用“2.1”的方法測定其吸光度。根據(jù)線性回歸方程計(jì)算可得提取液總黃酮質(zhì)量濃度（μg／mL），然后按下式計(jì)算得總黃酮提取率（%）。

總黃酮提取率／%＝（C×稀釋倍數(shù)×V／W）×100%

C為根據(jù)測得的吸光度值帶入線性回歸方程所得的提取液總黃酮質(zhì)量濃度，μg／mL；V為抽濾樣品后的定容體積，mL；W為稱取樣品的質(zhì)量，g。

3 結(jié)果與討論

3.1 微波提取次數(shù)對總黃酮提取率的影響

稱取0.2 g田基黃樣品于萃取罐中，設(shè)定微波提取溫度為50℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)30%，微波萃取7 min，料液比1∶30，分別提取1、2、3次，測定黃酮的提取率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1。

表1 微波提取次數(shù)對總黃酮提取率的影響Table 1 Influence of microwave extraction times on extraction rate of flavonoids

從表1看出，單獨(dú)提取1次的提取率為11.07%，連續(xù)提取2次的提取率為13.27%，連續(xù)提取3次的提取率為13.87%。連續(xù)提取對總黃酮提取率的提高影響不大。因此以下試驗(yàn)均提取1次。

3.2 料液比對田基黃總黃酮提取率的影響

稱取0.2 g田基黃樣品于萃取罐中，加入一定體積的30%乙醇溶液，分別使料液比為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 g／mL，設(shè)定微波提取溫度為50℃，微波萃取7 min，提取1次，測定黃酮的提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1。

從圖1中看出，當(dāng)料液比為1∶35時(shí)黃酮的提取率最高，所以選擇最佳料液比為1∶35。

圖1 料液比對黃酮提取率的影響Figure 1 Impact of solid－liquid ratio on the extraction rate of flavonoids

3.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對田基黃總黃酮提取率的影響

稱取0.2 g田基黃樣品于萃取罐中，按照料液比為1∶35，分別加入體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，微波提取溫度為50℃，萃取7 min，測定黃酮的提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。

圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對黃酮提取率的影響Figure 2 The effect of ethanol volume fraction on the extraction rate of flavonoids

從圖2中看出，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，黃酮的提取率最大，所以選擇提取溶劑為60%的乙醇。

3.4 微波提取時(shí)間對田基黃總黃酮提取率的影響

設(shè)定提取溫度50℃，料液比1∶35，乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，分別提取2、5、7、10、12 min，然后測定黃酮含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3。

圖3 微波時(shí)間對黃酮提取率的影響Figure 3 The effect of microwave time on the extraction rate of flavonoids

從圖3中看出，微波提取時(shí)間在2～5 min之間提取率升高，當(dāng)微波時(shí)間提取大于5 min時(shí)，提取率下降，所以選擇微波提取時(shí)間為5 min。

3.5 溫度對田基黃總黃酮提取率的影響

選擇料液比1∶35，乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，按照提取溫度40、50、60、65、70、75、80℃進(jìn)行提取，測定黃酮含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4。

從圖4中可以看出，當(dāng)提取溫度在40～60℃時(shí)提取率逐漸升高，當(dāng)溫度在60～80℃時(shí)，提取率逐漸減小，且當(dāng)提取溫度為60℃，黃酮提取率達(dá)到最大，所以選擇提取溫度為60℃。

3.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確平行稱取0.200 0 g田基黃樣品3份，按照試驗(yàn)最優(yōu)條件，測定田基黃的總黃酮含量并計(jì)算提取率，3次測定結(jié)果提取率分別為14.24%、14.29%、14.31%，田基黃黃酮平均提取率為14.28%。

圖4 溫度對黃酮提取率的影響Figure 4 The effect of temeperature on the extraction rate of flavonoids

4 結(jié)論

微波提取田基黃中總黃酮含量并計(jì)算其提取率。最佳提取工藝為料液比1∶35 g／mL，溶劑乙醇的體積分?jǐn)?shù)為60%，萃取時(shí)間5 min，萃取溫度60℃，提取1次。田基黃黃酮平均提取率為14.28%。

［1］劉金娜，溫春秀，楊太新，等.瓜蔞子黃酮提取方法和參數(shù)優(yōu)化的研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2013，24（9）：2088－2090.

［2］林娜，尹禮國，董媛媛.硬頭黃竹葉黃酮提取工藝優(yōu)化［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：240－241.

［3］李光，余霜，鄧銀，等.金蕎麥中黃酮提取技術(shù)研究［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（7）：264－266.

［4］張艷軍，彭重威，徐淑慶，等.銀葉樹樹葉中總黃酮提取工藝優(yōu)化［J］.中藥材，2012，35（4）：638－640.

［5］萬明，宋永鋼，楊菠.黃酮類化合物的藥理作用及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用［J］.江西食品工業(yè)，2007（3）：47－49.

［6］鐘佳，馬金晶，羅雯，等.大葉羊蹄甲總黃酮的提取及其對羥自由基的清除作用研究［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（16）：215－218.

Extracting of Total Flavonoids from Grangea maderaspatana Using the Technique of Microwave

HAO Zhi－yun1，YANG Xin－zhou1，LIN Hui－kun1，LUO Wen2

（1.Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China；2.School of Chemistry and Biotechnology，Yunnan Nationalities University，Kunming 650031，China）

The method of microwave extraction technology of Total Flavonoids in Grangea maderaspatana was researched.The optimum technology parameters are as follows：extraction time was 9 min，ethanol concentration was 60%，extraction temperature was 50℃，extracted 1 times，and the liquid and solids ratio was 1∶35（g／mL）.Under the optimum extraction conditions determination of total flavonoids from Grangea maderaspatana.The results showed that total flavonoids of Grangea maderaspatana were 142.38 mg／g.Microwave extraction technology is an efficient，rapid and environmental method for extracting total flavonoids from the Chinese Medicinal Herbs.

microwave extraction；total flavonoids content；Grange maderaspatans

O657.3

A

1004-275X（2014）05-0008-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.05.003

收稿：2014-04-18

德宏師范高等?？茖W(xué)校校級(jí)科學(xué)研究課題（編號(hào)：DSK201303）。

郝志云（1962-），男，副教授，主要研究方向：分析化學(xué)及化學(xué)教育。