牦牛雌激素受體ERα和 ERβ 基因分子特征及組織表達(dá)研究

李鍵, 符梅, 蘭道亮, 熊顯榮

(1.西南民族大學(xué)青藏高原研究院, 四川 成都 610041; 2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 四川 成都 610041)

【特約專稿】

牦牛雌激素受體ERα和 ERβ 基因分子特征及組織表達(dá)研究

李鍵1, 符梅2, 蘭道亮1, 熊顯榮2

(1.西南民族大學(xué)青藏高原研究院, 四川 成都 610041; 2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 四川 成都 610041)

為研究牦牛雌激素受體(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同組織中的表達(dá)差異.根據(jù)NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列, 設(shè)計(jì)特異性引物, 利用RT-PCR技術(shù)克隆麥洼牦牛ERα和ERβ基因序列, 同時(shí)利用熒光定量PCR技術(shù)檢測ERα和ERβ基因在牦牛不同組織的表達(dá)分布.結(jié)果表明, 分別獲得2 100 bp ERα(GenBanK登錄號: KJ011123)和1 791 bp ERβ(GenBanK登錄號: KJ011124)基因序列, 其中ERα的ORF為1 658 bp, 編碼596個(gè)氨基酸, ERβ的ORF為1 584 bp, 編碼527個(gè)氨基酸.多重序列分析表明, 牦牛ERα和ERβ與普通牛、原雞、人、小鼠、大鼠、揚(yáng)子鱷、蟾蜍及斑馬魚的氨基酸序列同源性分別為45.3%-99.5% 和 53.9%-99.1%.熒光定量PCR結(jié)果顯示, ERα和ERβ基因在牦牛的各種組織中均有表達(dá), 且除睪丸外, ERα在輸卵管、子宮及乳腺中的表達(dá)高于ERβ.此外, 就ERα而言, ERα在牦牛乳腺中表達(dá)最高, 子宮、輸卵管及卵巢次之, 心、肝、脾、肺、腎及睪丸相對表達(dá)較低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表達(dá)最高, 子宮和輸卵管次之, 心、肝、脾、肺、腎、睪丸及乳腺表達(dá)較低.為進(jìn)一步了解牦牛ERα 和 ERβ基因的生物學(xué)功能及其分子繁殖機(jī)制提供了基礎(chǔ).

牦牛; ERα基因; ERβ基因; 基因特征

牦牛生活在青藏高原海拔3 000米以上的地區(qū), 其對低溫、低氧、低壓的高原環(huán)境有較強(qiáng)的適應(yīng)能力, 能充分利用其他家畜難以利用的高山草原, 是高原地區(qū)牧民的主要經(jīng)濟(jì)來源[1].然而牦牛三年兩胎或兩年一胎的繁殖能力普遍低于其它普通牛屬動物.

雌激素是一種甾體激素, 是人類及其他動物體內(nèi)最重要的激素之一, 具有廣泛的生理功能.其廣泛的生理作用是通過特定的細(xì)胞表面受體雌激素受體(Estrogen receptor, ER)實(shí)現(xiàn)的.雌激素受體是核受體超家族的一種配體依懶性轉(zhuǎn)錄因子, 與雌激素專一性的結(jié)合, 通過與雌激素的相互作用來調(diào)節(jié)與生殖機(jī)能相關(guān)基因的表達(dá)[2].至今發(fā)現(xiàn)的雌激素受體有兩種類型, 即ERα和ERβ.國內(nèi)外大量的研究顯示ERs基因與哺乳動物的卵泡發(fā)育和高繁殖力有密切的關(guān)系[3-4], 對雌激素受體的研究將有助于了解動物卵泡發(fā)育機(jī)制及繁殖能力高低機(jī)制, 因此雌激素受體的研究受到了廣泛的關(guān)注.自1962年Jenson等發(fā)現(xiàn)子宮、陰道等靶組織存在ERs以后, 學(xué)者們便開始了對ERs基因的深入研究.尹玉濤[5]等的研究表明, ERα對腺管伸長和上皮分化起到促進(jìn)作用.白淑[6]等對濟(jì)寧青山羊出生后發(fā)育過程中雌激素受體在子宮中的作用研究表明雌激素參與調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜與肌層的增殖和分化.PAUL等對兩種雌激素受體在人和鼠生殖器官中分布的研究表明, 在卵巢、睪丸及前列腺中, ERβ表達(dá)占據(jù)主導(dǎo)作用[7], 而在子宮和附睪中ERα較ERβ優(yōu)勢表達(dá)[8].此外, 內(nèi)分泌學(xué)和生理學(xué)研究發(fā)現(xiàn), 雌激素受體廣泛分布于消化系統(tǒng), 能影響胃、小腸和結(jié)腸等消化器官的機(jī)能[9].目前為止, 已經(jīng)有多種哺乳類動物[10], 鳥類[11-12], 爬行類[13], 兩棲類[14-15]及魚類[16-17]的ERs基因被克隆.但目前關(guān)于牦牛的雌激素受體還未見報(bào)道, 因此本研究以麥洼牦牛為例, 利用RT-PCR及熒光定量PCR技術(shù)克隆了牦牛ERs基因, 并檢測了ERs mRNA在不同組織中表達(dá)情況, 為進(jìn)一步探究牦牛的繁殖機(jī)理提供了基礎(chǔ).

1 與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用牦牛(品種: 麥洼)來自四川省阿壩州紅原縣屠宰場, 屠宰后分別采集3頭公牦牛與3頭母牦牛心、肝、脾、肺、腎、胃、子宮、輸卵管、睪丸、乳腺和卵巢10種組織, 用錫箔紙將各組織包好后立即投入液氮中速凍,之后-80 ℃保存?zhèn)溆?

1.2 設(shè)備和試劑

Trizol試劑購自Invitrogen公司; PrimeScriptTMRT reagent Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR?Premix Ex TaqTMII試劑盒和pMD-19T載體均購自TaKaRa公司.DNA膠回收試劑盒、感受態(tài)、DEPC和Marker等均購自北京天根公司.熒光定量PCR儀(Bio-Rad)、PCR儀(Eppendorf)、Doc 2000凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad).

1.3 方法

1.3.1 的設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)NCBI上公布的普通牛ERα基因mRNA序列(GenBank登錄號: NM_001001443.1)和ERβ基因mRNA序列(GenBank登錄: NM_174051.3), 采用Prime5軟件分別設(shè)計(jì)四對引物(ERα1、ERα2、ERβ1及ERβ2)分別擴(kuò)增牦牛ERα基因和ERβ基因的編碼區(qū)序列.參照擴(kuò)增出的牦牛ERα和ERβ基因系列設(shè)計(jì)ERs基因定量引物, 選用GADPH基因(GenBank登錄號: AC_000162.1)作為看家基因.引物送由上海Invitrogen公司合成.引物擴(kuò)增長度、登錄號及引物序列見(表1).1.3.2 總RNA的提取和cDNA第一鏈的合成

表1 隆和定量的引物序列Table 1 Primes used for molecular cloning and Q-PCR in this study

液氮中取出牦牛各組織, 按照Trizol試劑盒說明書提取組織總RNA, 1%甲醛變性凝膠電泳檢測RNA的質(zhì)量,并用紫外分光光度計(jì)測定總RNA的濃度及純度.按照PrimeScriptTMreagent Kit(TakaRa,Dalian,China)說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄.體系為10 μL: 包括 5×PrimeScript Buffer 2 μL, PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5 μL, Oligo dT Primer 0.5 μL, Random 6 mers 0.5 μL, total RNA 6.5 μL.反應(yīng)條件為: 37 ℃ 15min, 85 ℃ 5s.反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物臵于-20 ℃保存?zhèn)溆?

1.3.3 RT-PCR擴(kuò)增、克隆及測序

以反轉(zhuǎn)錄的cDNA做模板進(jìn)行PCR反應(yīng).PCR擴(kuò)增體系25 μL: 2×taq Master Mix 12.5 μL, 上、下游引物(10μmol·L-1)各1 μL, 模板1μL, 加ddH2O補(bǔ)足25 μL.PCR反應(yīng)條件: 94 ℃ 5 min; 94 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s, 72 ℃ 1 min, 35個(gè)循環(huán); 72 ℃ 再延伸5 min, 4 ℃ 保存.1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物.用DNA膠回收試劑盒回收瓊脂糖凝膠電泳檢測到的目的條帶, 然后將膠回收產(chǎn)物連于pMD-19T載體, 轉(zhuǎn)化大腸桿菌(DH5α), 37 ℃ LB平板上培養(yǎng)過夜.經(jīng)藍(lán)白斑篩選, 挑取單個(gè)白色菌落于液體LB培養(yǎng)基中37 ℃ 200 r/min 振蕩6 h.PCR鑒定后將陽性克隆送由上海Invitrogen公司測序.

1.3.4 序列分析與結(jié)構(gòu)預(yù)測

測序結(jié)果用DNAMAN7.0 軟件進(jìn)行序列對比和拼接.用NCBI的blastn程序在GenBank數(shù)據(jù)庫中對比鑒定,用Protparam軟件(http // web.expasy.org/protparam)分析其蛋白質(zhì)的基本理化性質(zhì); 用DNAstar將其編碼區(qū)翻譯成氨基酸序列; 采用在線軟件(http://www.ebi.ac.uk/interpro/scan.html)預(yù)測功能結(jié)構(gòu)域; 分子進(jìn)化樹構(gòu)建采用MEGA5.0軟件.

1.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)

參照SYBR?Premix EX TaqTM II試劑盒進(jìn)行熒光定量PCR.反應(yīng)體系為SYBR?Premix EX TaqTM II 10 μL,上、下游引物(10μmol·L-1)各0.5 μL, cDNA 1 μL, 加ddH2O補(bǔ)足20 μL.PCR反應(yīng)條件為95 ℃ 預(yù)變性30 s; 95 ℃變性5 s, 60 ℃退火30 s, 72 ℃延伸30 s, 40個(gè)循環(huán).溶解曲線分析: 95 ℃ 10 s, 60 ℃ 1 min, 然后以0.5 ℃·10s-1的速率從60 ℃緩慢升溫到95 ℃.每個(gè)樣品重復(fù)3次.熒光定量結(jié)果采用2-△△Ct法進(jìn)行分析[18].

1.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析, 結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)”表示, 采用ANOVA和T檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性差異分析.結(jié)果判定: 當(dāng)P<0.05時(shí), 認(rèn)為差異顯著.

2 結(jié)果與分析

2.1 牦牛ERα和ERβ基因克隆測序結(jié)果分析

與預(yù)期結(jié)果一樣, 我們獲得了820 bp和1 280 bp的ERα擴(kuò)增產(chǎn)物(圖1), 其中ORF為1 791 bp, 編碼596個(gè)氨基酸殘基, 蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為66.5 kDa.測序結(jié)果提交GenBank已獲得基因登錄號(KJ011123).通過與普通牛(NM001001443.1)、人(NM000125.3)、小鼠(NM007956.4)、大鼠(NM012689.1)、原雞(NM205183.2)、揚(yáng)子鱷(XM006024833.1)、蟾蜍(AF383157.1)及斑馬魚(NM152959.1)的氨基酸同源性對比發(fā)現(xiàn), 麥洼牦牛ERa基因氨基酸序列與普通牛及人的同源性最高, 分別為99.5%和91.1%.然后僅與斑馬魚有45.3%的相似性(表2).ERβ的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別為783 bp 和875 bp(圖1), 其中包括1 584 bp 的ORF, 編碼527個(gè)氨基酸殘基, 預(yù)測的蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量為59.0 kDa.測序結(jié)果提交GenBank已獲得基因登錄號(KJ011124).與普通牛(NM174051.3)、原雞(NM204794.2)、人(NM001437.2)、小鼠(NM207707.1)、大鼠(NM012754.1)、揚(yáng)子鱷(XM_006018673.1)、蟾蜍(NM001130954.1)及斑馬魚(NP851297.1)的同源性分別為9.0%, 70.5%, 78.8%, 80.9%, 96.5%, 87.8%, 79.6% and 91.9%.與很多核受體一樣, ERα和ERβ都包含了六個(gè)基本的功能結(jié)構(gòu)域(圖2).而牦牛ERα基因和ERβ基因的C和E結(jié)構(gòu)域從魚類到兩棲類都有很高的相似性(C domain: 94%-99% 氨基酸相似性; E domain: 58%-94%氨基酸相似性)(圖3, 圖4).ERα和ERβ都包含了8個(gè)半胱氨酸殘基(圖5).

圖1 麥洼牦牛ERα和ERβ基因的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.1 RT-PCR amplification of ERαand ERβgene of yak

表2 麥洼牦牛ERα和ERβ氨基酸序列與其他物種相似性比較Table 2 Similarities of amino acid of the ERα and ERβ of MaiWa yak to other species

圖2 牦牛ERα和ERβ結(jié)構(gòu)域的比較Fig.2 The comparison of ERα and ERβ of yak

圖3 牦牛ERα結(jié)構(gòu)域與 鱷魚、蟾蜍、原雞及斑馬魚的比較(方框里的數(shù)字代表ERα相對應(yīng)結(jié)構(gòu)域的相似性)Fig.3 Domain structure of the yak ERα, and identity with alligator, xenopus laevis, gallus gallus, zebrafish ERα.The numbers within each box indicated the percentage identity of the domain relative to the yak ERα.

圖4 牦牛ERβ結(jié)構(gòu)域與 鱷魚, 蟾蜍, 原雞, 斑馬魚的比較(方框里的數(shù)字代表ERβ相對應(yīng)結(jié)構(gòu)域的相似性)Fig.4 Domain structure of the yak ERβ, and identity with alligator, xenopus laevis, gallus gallus, zebrafish ERβ.The numbers within each box indicated the percentage identity of the domain relative to the yak ERβ.

圖5 牦牛ERα和ERβ中八個(gè)半胱氨酸的位置Fig.5 The position of eight cysteine of yak ERα and ERβ

2.2 進(jìn)化樹分析

根據(jù)不同物種的ERα和ERβ的氨基酸序列, 用MEGA5.0軟件, 用NJ法構(gòu)制系統(tǒng)進(jìn)化樹如(圖6)所示.由圖可見, ERα和ERβ各聚成一支.

圖6 牦牛ERα和ERβ蛋白質(zhì)進(jìn)化樹分析(NJ法)Fig.6 Phylogenetic tree of the deduced amino acid of ERα and ERβ

2.3 麥洼牦牛ERα基因和ERβ基因的組織表達(dá)譜

以GADPH為內(nèi)參基因, 采用定光定量PCR技術(shù)對牦牛ERα和ERβ基因在牦牛心、肝、脾、肺、腎、胃、乳腺、睪丸、輸卵管和子宮組織中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究.結(jié)果表明, ERα和ERβ兩種可變剪切體在牦牛各組織中廣泛表達(dá), 但表達(dá)在各組織中存在較大差異(圖7).ERα在牦牛乳腺中表達(dá)最高, 子宮、輸卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、腎及睪丸相對表達(dá)較低.牦牛ERβ基因在卵巢中表達(dá)最高, 子宮和輸卵管次之, 而心、肝、脾、肺、腎、睪丸及乳腺表達(dá)較低.就牦牛同一組織中ERα和ERβ而言, 牦牛ERα的mRNA的表達(dá)水平普遍高于ERβ, 除了睪丸.

圖7 Rα和ERβ基因在麥洼牦牛不同組織中的熒光定量表達(dá)Fig.7 The realtime quantification of ERα and ERβ gene expression in various tissues in MaiWa yak

3 討論

雌激素是人類及其他動物體內(nèi)最重要的激素之一, 具有廣泛的生理功能.而雌激素受體是介導(dǎo)其實(shí)現(xiàn)功能的受體[19].本研究首次克隆得到牦牛ERα基因cDNA共2100bp, 其中ORF序列1791bp, 理論編碼596個(gè)氨基酸.另外, 獲得牦牛ERβ基因cDNA共1 658 bp, 其中ORF序列1 584 bp, 編碼個(gè)527氨基酸.系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明, 牦牛ERα是雌激素受體α集群的成員, 而牦牛ERβ屬于ERβ集群.與此同時(shí), 牦牛ERα和牦牛ERβ氨基酸同源性與其他物種具有很高的相似性, 說明了ERα和ERβ基因在進(jìn)化上具有很高的保守性.目前通過缺失突變與點(diǎn)突變技術(shù)已證明ERα和ERβ基因從編碼區(qū)的5' 端到3' 端可分為6個(gè)功能區(qū): N末端的A/B區(qū), 具有轉(zhuǎn)錄激活作用; C區(qū)含有兩個(gè)II型鋅指結(jié)構(gòu), 與DNA結(jié)合有關(guān); D區(qū)為絞鏈區(qū), 蛋白質(zhì)在此改變構(gòu)象; E區(qū)是激素結(jié)合區(qū); F區(qū)的特異性功能域還未有人研究[20].ERα與ERβ結(jié)構(gòu)域的比對結(jié)果表明, ERα和ERβ的A/B結(jié)構(gòu)域長度存在很大的差異(ERα為182個(gè)氨基酸, ERβ為120個(gè)氨基酸), 這與Filby等對其他物種的報(bào)道相似[21].在A/B區(qū)有一個(gè)非配基依賴性轉(zhuǎn)錄激活功能區(qū)AF1, 基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子或其他轉(zhuǎn)錄因子與其相互作用活化目的基因[19].而有的研究表明ERβ可能缺少AF1.A/B區(qū)域的長度不規(guī)則的高度可變, 調(diào)節(jié)ERs與DNA的相互作用.在ERα和ERβ中, 8個(gè)半胱氨酸殘基的分布是相同的, 都由兩個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)(C I和C II)組成, 這些結(jié)構(gòu)是與目標(biāo)基因相結(jié)合所必須的.C I的功能是確定結(jié)合的特異性, 控制ERs對靶基因的專一性選擇, C I的作用是由鋅指根部C端側(cè)Cys鄰近的3個(gè)保守性殘基, 稱為P-盒(P-box)實(shí)現(xiàn)的.C II的功能是提供非專一性選擇, C II的功能是有其基部的被稱為D-P盒(D-box)的5個(gè)氨基酸殘基實(shí)現(xiàn)的.此外, 牦牛的ERs基因的C(C domain: 94-99%)和E(E domain: 58-94%)結(jié)構(gòu)域從魚類到哺乳類都具有很高的相似性, 這與前人的研究結(jié)果一致[22].C結(jié)構(gòu)域和E結(jié)構(gòu)域是雌激素的核心結(jié)構(gòu)域, 且是雌激素功能發(fā)揮必不可少的部分.從魚類到哺乳類, 雌激素的主要功能都未發(fā)生變化, 因此雌激素基因在進(jìn)化上保持了相對高的保守性.與其他結(jié)構(gòu)域相比較, D結(jié)構(gòu)域的相似性要低一些, D區(qū)可與熱休克蛋白(hotskock protdn, Hsp)結(jié)合, 使ERs基因可適當(dāng)折疊, 從而保護(hù)疏水的配基結(jié)合區(qū)(ligandblnding domain, LBD).

此外, 本研究結(jié)果表明, 兩種雌激素受體ERα和ERβ在牦牛的各種組織中均有表達(dá).說明雌激素可能參與了動物生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、骨骼及內(nèi)分泌系統(tǒng)等多種系統(tǒng)的基本生理活動.雌激素受體在輸卵管、子宮、乳腺及卵巢等生殖器官中高表達(dá), 在心、肝、脾、肺、腎及睪丸中也可檢測到表達(dá).這說明雌激素的主要作用還是調(diào)控生殖系統(tǒng)的生長與發(fā)育.mRNA可變剪接在很大程度上增加了真核生物基因表達(dá)的復(fù)雜程度并相應(yīng)的增加了蛋白質(zhì)功能的多樣性[23].實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示, 在子宮、乳腺、卵巢及輸卵管中ERα的表達(dá)高于ERβ.這與前人的研究結(jié)果有很多相似之處.WEIHUA[24]等報(bào)道, 子宮中雌激素是通過ERα和ERβ共同作用的.在未成熟子宮中, ERβ對ERα起著調(diào)節(jié)的作用.Hiroi[25]等研究表明, 在大鼠子宮中, 均可檢測到ERα和ERβ的mRNA的表達(dá), 但ERα的表達(dá)占優(yōu)勢.Couse[26]等指出, ERα基因敲除小鼠表現(xiàn)為不孕, 而ERβ基因敲除小鼠可孕, 但受孕的胎數(shù)顯著減少.因此Couse等猜想ERα和ERβ共同參與調(diào)節(jié)子宮的發(fā)育, 而ERβ的表達(dá)量可能與動物的繁殖率有關(guān).根據(jù)本研究得出的結(jié)果, 筆者推測, 兩種雌激素受體在動物體內(nèi)的同一器官可能發(fā)揮著不同的作用.ERα對生殖、乳腺的發(fā)育和泌乳起重要作用, 因此在這些組織中, ERα的表達(dá)占優(yōu)勢, ERβ基因可能與排卵有重要的關(guān)系而與泌乳和生殖沒有很大關(guān)系.牦牛與其他牛相比, 表現(xiàn)為低繁, 但是否與子宮中ERβ的低表達(dá)有關(guān)系是下一步擬研究的問題.綜上所述, 本研究首次克隆了牦牛ERα和ERβ基因, 并發(fā)現(xiàn)ERα和ERβ基因在牦牛多種組織中均有不同程度的表達(dá), 且在生殖器官中優(yōu)勢表達(dá); 同時(shí)牦牛ERα和ERβ基因mRNA在多種組織中都存在兩種類型的可變性剪切.該研究結(jié)果為進(jìn)一步探究牦牛的特殊繁殖機(jī)理提供了基礎(chǔ).

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Astract:The objective of this study is to explore the molecular characteristics and expression pattern of ERα and ERβ gene in yak(Bos grunniens).A pair of special primes were designed according to released sequence of bovine ERα and ERβ in GenBank.Then reverse transcription-polymerse chain reation (RT-PCR) was used to clone ERα and ERβ genes of MaiWa yak, and Real-time PCR was used to identify the mRNA expression of ERα and ERβ.The result showed that MaiWa yak ERα gene cDNA was 2 100 bp, with an ORF of 1 658 bp encoding 596 amino acids. ERβ gene cDNA was 1 791 bp, with an ORF of 1 584 bp encoding 527 amino acids. The sequence multialign results showed that yak ERα and ERβ gene shared 45.3%-99.5% and 53.9%-99.1% of similar amino sequence, with that of Bos Taurus, gallus gallus, Homo sapiens, Mus musculus, Rayyus norvegicus, alligator, xenopus laevis, and zebrafish. Real-time PCR analysis revealed that the ERα and ERβ were expressed in a variety of tissues, but the expression of ERα was higher than ERβ in productive organs. Additionally, as far as ERα, the mRNA expression was the highest in mammary gland, followed by uterus, oviduct and ovary, and lowest in liver, kidney, lung, testis, spleen and heart. The ERβ mRNA level was highest in ovary, intermediary in uterus and oviduct, and lowest in heart, liver, spleen, lung, kidney, mammary gland and testis. Identification and tissue distribution of yak ERα and ERβ genes provided foundation for the further study on their biological roles in yak.

Molecular characterization and tissue distribution of ERαand ERβ genes in domestic Yak

LI Jian1, FU Mei2, LAN Dao-liang1, XIONG Xian-rong2
(1.Institute of Qinghai-Tibetan Plateau Research, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, P.R.C.; 2.School of Life Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, P.R.C.)

yak ; ERα gene; ERβ gene; molecular characterization; gene expression

S814.1, S823

A

1003-4271(2014)06-0801-08

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.06.01

2014-10-10

李鍵(1967-), 男, 藏族, 四川理縣人, 教授, 博士, 研究方向: 動物生殖生理與胚胎工程; E-mail: lijian@swun.cn.

國家科技支撐計(jì)劃課題(2012BAD13B06).