調(diào)節(jié)性樹突狀細胞的獲取途徑及其誘導(dǎo)免疫耐受的臨床應(yīng)用

李穎曦 陳 丹 李克秋 李 光△

樹突狀細胞（DCs）是體內(nèi)作用最強的抗原提呈細胞，屬于異質(zhì)性細胞群體，其具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能，既可提呈抗原、激活T細胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，又可使T細胞清除或促進調(diào)節(jié)性T細胞增殖，誘導(dǎo)免疫耐受。調(diào)節(jié)性樹突狀細胞（DCreg）具有負向免疫調(diào)節(jié)功能，可降低T細胞的免疫活性，誘導(dǎo)免疫耐受。該細胞群可抑制共刺激分子（CD40、CD80、CD86等）的表達以及白細胞介素（IL）-12的產(chǎn)生，增強IL-10的分泌。DCreg誘導(dǎo)免疫耐受的機制主要有以下幾點：（1）DCreg表面缺乏主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ類分子（MHCⅡ分子）和共刺激分子。（2）可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細胞增殖。（3）通過分泌具有負向免疫調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)介導(dǎo)免疫耐受。此外，DCreg誘導(dǎo)的免疫耐受作用可應(yīng)用于臨床治療，如器官移植、自身免疫性疾病等。本文就DCreg的獲取途徑及其誘導(dǎo)免疫耐受的臨床應(yīng)用綜述如下。

1 DCreg的獲取途徑

1.1 經(jīng)藥物產(chǎn)生 DCs具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能，可作為免疫應(yīng)答中藥物作用的理想靶點，廣泛應(yīng)用于臨床治療。可誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg的藥物包括免疫抑制劑[雷帕霉素（RAPA）、他克莫司等]、阿司匹林、維生素（Vit）D3等。RAPA作為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的抑制劑，可與細胞內(nèi)免疫親和蛋白FK506結(jié)合蛋白（FKBP12）結(jié)合，形成RAPA-FKBP12復(fù)合物，此復(fù)合物可阻斷mTOR通路，抑制DCs成熟并降低T細胞的免疫活性，從而誘導(dǎo)免疫耐受[1]。其具體表現(xiàn)為RAPA通過降低MHCⅡ分子、共刺激分子以及IL-12p40的表達，誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg。實驗表明，當fms樣酪氨酸激酶3配體（Flt3L）結(jié)合低劑量RAPA時，可使T細胞呈低反應(yīng)性，并促進調(diào)節(jié)性T細胞增殖，誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg和CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞，提示RAPA可降低T細胞的免疫活性[2]。

1.2 經(jīng)細胞因子產(chǎn)生 幾種具有免疫抑制作用的可溶性因子，如IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β（TGFβ)、前列腺素E2（PGE2)、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）等可誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg。實驗表明，經(jīng)IL-10處理的DCs可抑制MHCⅡ和CD86等免疫刺激分子的表達上調(diào)[3]。且Boks等[4]通過比較可產(chǎn)生DCreg的不同細胞因子，發(fā)現(xiàn)經(jīng)IL-10處理的DCs具有較強的耐受性表型，可應(yīng)用于臨床。TGFβ也可誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg，在穩(wěn)態(tài)下，CD8+DCs能依賴自分泌的TGFβ和吲哚胺2,3雙加氧酶（IDO）維持免疫耐受，而CD8-DCs不能自分泌TGFβ，但體外給予TGFβ可誘導(dǎo)IDO將免疫原性DCs轉(zhuǎn)變?yōu)镈Creg；且當阻斷TGFβ受體信號時，可引起嚴重的自身免疫性腦炎，提示TGFβ在維持免疫耐受中具有重要意義[5]。某些細胞因子既有免疫刺激作用，又有免疫耐受作用，如急性炎癥中，PGE2廣泛表達于上皮細胞、成纖維細胞以及炎性細胞[6]。而慢性炎癥中，PGE2可將DCs從刺激表型轉(zhuǎn)化為調(diào)節(jié)表型，誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg。此外，多種細胞因子聯(lián)合也可產(chǎn)生DCreg[7]，例如將成熟DCs培養(yǎng)在高濃度腫瘤壞死因子α（TNFα）和PGE2的腫瘤微環(huán)境中，可激活I(lǐng)DO的酶活性，誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg，維持免疫耐受作用。

1.3 經(jīng)局部微環(huán)境產(chǎn)生 DCs具有不同亞型，在其分化為DCreg的過程中，局部微環(huán)境起到重要的作用[8]?；蜣D(zhuǎn)錄分析表明，基質(zhì)細胞群自身具有異質(zhì)性[9]，因而不同來源的基質(zhì)細胞誘導(dǎo)DCreg分化的過程也具有異質(zhì)性。如脾基質(zhì)細胞通過纖連蛋白與成熟DCs接觸，促使DCs向DCreg的表型分化；而腎基質(zhì)細胞無需細胞間的接觸即可產(chǎn)生DCreg。Zhang等[10]報道，間充質(zhì)干細胞可誘導(dǎo)產(chǎn)生CD11c+MHCⅡhiCD80loCD86loDCreg，該細胞群可通過分泌TGFβ誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細胞分化。此外，腫瘤微環(huán)境也可分泌抑制性的可溶性因子，并持續(xù)表達與免疫抑制相關(guān)的基因，誘導(dǎo)產(chǎn)生DCreg。

2 DCreg的臨床應(yīng)用

2.1 器官移植 目前，器官移植已成為器官功能衰竭患者的主要治療手段，能否有效抑制移植排斥反應(yīng)是決定器官移植成敗的關(guān)鍵。盡管臨床普遍應(yīng)用免疫抑制劑，但其僅能改善短期移植物存活率。且免疫抑制劑可增加感染的概率，具有不良反應(yīng)，價格昂貴，需終生用藥。因此，器官移植的最終目標是在受者少服用或不服用免疫抑制劑的前提下，通過實現(xiàn)免疫耐受使受者長期接受移植物。

誘導(dǎo)免疫耐受在器官移植中具有重要作用，其策略包括體內(nèi)DCs的靶向治療、體外產(chǎn)生DCreg以及后續(xù)的細胞治療。研究表明，DCreg的細胞治療可抑制移植排斥反應(yīng)，并降低機體對免疫抑制劑的依賴性[11]。

2.1.1 DCreg的獲取來源 獲取來源不同的DCreg可產(chǎn)生不同的治療效果。應(yīng)用供體DCreg療法時，許多因素易使供體致敏。另有實驗表明，給予鼠輸注供體DCreg后，可降低鼠的存活率，因為輸注的供體DCreg無法直接調(diào)節(jié)受者體內(nèi)的免疫應(yīng)答[12]，它只能通過受鼠的內(nèi)源性經(jīng)典型DCs介導(dǎo)其對T細胞的抑制作用[13]，而輸注自體DCreg可降低這種風(fēng)險。Giannoukakis等[14]報道，將GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)產(chǎn)生的自體DCreg輸注到患者體內(nèi)時，既無毒性反應(yīng)又無不良反應(yīng)，提示自體DCreg具有安全性。

自體DCreg還具有有效性，其表現(xiàn)為經(jīng)靜脈途徑輸注的自體DCreg可積聚于脾臟，捕獲并處理供體抗原[15]，誘導(dǎo)抗原特異性器官移植免疫耐受。而供體DCreg需經(jīng)脂多糖（LPS）和其他細胞因子充分刺激后才可遷移到淋巴器官，誘導(dǎo)免疫耐受[7]，且為了避免DCs成熟，還需用地塞米松、IL-10等修飾供體DCreg。自體DCreg無需細胞因子激活即可有效抑制DCs成熟，證實自體DCreg優(yōu)于供體DCreg。

2.1.2 DCreg的輸注途徑 輸注途徑可影響DCreg誘導(dǎo)免疫耐受的效果。靜脈輸注經(jīng)地塞米松處理的骨髓來源的DCs，可延長心臟移植物的存活時間，而經(jīng)皮下輸注的同等DCs卻不能提高移植物的存活率[16]。Hirano等[17]發(fā)現(xiàn)，在海綿體同種異體移植模型中，經(jīng)靜脈輸注的DCreg可誘導(dǎo)供體T細胞呈特異低反應(yīng)性，而經(jīng)直接輸注途徑則不能產(chǎn)生此效果。

2.1.3 DCreg與免疫抑制劑聯(lián)用 在異體心臟移植模型中，僅注射供體DCreg不能有效地延遲移植物的排斥時間，而注射他克莫司聯(lián)合供體DCreg可顯著延長移植物的存活時間。此外，免疫抑制劑可增強DCs的負向免疫調(diào)節(jié)功能，特別是經(jīng)他克莫司處理的鼠骨髓來源的DCs，可降低其提呈或處理抗原的能力，從而更有效地誘導(dǎo)免疫耐受。

目前雖鮮有DCreg應(yīng)用于器官移植的臨床試驗報道，但很多與臨床相關(guān)的靈長類動物實驗證實了該應(yīng)用的安全性和有效性[18-19]。Ezzelarab等[18]在腎移植術(shù)前7 d給予獼猴靜脈輸注DCreg和細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4（CTLA4Ig），CTLA4Ig需持續(xù)給藥至術(shù)后第8周，RAPA需持續(xù)給藥6個月，發(fā)現(xiàn)該DCreg可降低MHCⅡ分子和共刺激分子的表達并抑制DCs成熟。其次，輸注的DCreg能顯著延長移植物的存活時間，且無不良反應(yīng)。此外，同種異體抗原未引起宿主的致敏反應(yīng)，表明DCreg在器官移植排斥反應(yīng)中具有治療作用。

2.2 自身免疫性疾病

2.2.1 1型糖尿病 Giannoukakis等[14]在1型糖尿病患者中進行了DCreg的首例臨床試驗。試驗組患者給予皮下輸注經(jīng)反義寡核苷酸（以CD40、CD80、CD86為靶基因）處理的DCreg，每2周1次；對照組用同樣方法給予未處理的DCs。持續(xù)監(jiān)測患者體征12個月，患者體內(nèi)未產(chǎn)生自身抗體且無不良反應(yīng)，提示自體DCreg具有良好的耐受性，且患者外周血中增加的B220+CD11c-B細胞群可緩解1型糖尿病癥狀。此外，產(chǎn)生的DCreg可促使非肥胖糖尿病小鼠T細胞凋亡，逆轉(zhuǎn)自身免疫性糖尿病[20]。以上研究證實了DCreg的耐受性和安全性，但其療效仍需進一步探索。

2.2.2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 DCs是維持類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）炎癥以及導(dǎo)致骨和關(guān)節(jié)損害的主要參與者。其主要表現(xiàn)為炎性刺激物可激活DCs并侵襲滑膜液，導(dǎo)致骨和關(guān)節(jié)受損。此外，RA患者體內(nèi)的DCs可活化B細胞產(chǎn)生抗體，誘發(fā)炎癥。因此將高度活化的DCs誘導(dǎo)為可抑制自身反應(yīng)性T細胞的DCreg，重建T細胞耐受，是治療RA的新型策略。且經(jīng)此治療后，外周血中可見大量表達IDO的漿細胞樣DCs（pDCs），該DCreg能把初始T細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉置贗L-10的調(diào)節(jié)性T細胞。另一種治療方法是用小RNA干擾技術(shù)破壞DCs和T細胞之間共刺激的相互作用，該方法產(chǎn)生的DCs可使IL-2、γ干擾素（IFNγ）、TNFα和IL-17的表達下調(diào)，從而誘導(dǎo)產(chǎn)生Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞，減少RA導(dǎo)致的骨和關(guān)節(jié)損害[21]。

Thomas等[22]在RA的臨床試驗中給予患者皮下輸注經(jīng)BAY 11-7082（NF-κB信號通路的抑制劑）誘導(dǎo)產(chǎn)生的自體DCreg，該DCreg低表達CD40，高表達CD86，表明負載自身抗原的DCreg具有良好的耐受性且不易產(chǎn)生不良反應(yīng)。與前者臨床試驗不同，Hilkens等[23]選擇經(jīng)關(guān)節(jié)腔輸注自體DCreg，并定期監(jiān)測患者外周血和關(guān)節(jié)液中對衡量DCreg療效具有重要意義的分子標志物，發(fā)現(xiàn)經(jīng)關(guān)節(jié)腔輸注的自體DCreg具有良好的耐受性和安全性。

近年來，DCreg誘導(dǎo)的免疫耐受作用備受關(guān)注，且在器官移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病中具有潛在的治療前景。但DCreg的細胞治療涉及到輸注劑量、輸注時機、輸注時間以及輸注后的長短期效應(yīng)等多方面問題，需進一步探索。且各種自身免疫性疾病的發(fā)病機制不盡相同，這給DCreg治療自身免疫性疾病帶來了困難。因此合理利用并選擇合適的獲取途徑是將DCreg成功應(yīng)用于臨床治療的關(guān)鍵。

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