生物材料構(gòu)建神經(jīng)導管修復周圍神經(jīng)損傷的研究進展*

門永芝 綜述 於子衛(wèi) 審校

神經(jīng)導管是由天然或人工合成材料制成的、用于橋接神經(jīng)斷端的組織工程支架材料,具有引導和促進神經(jīng)再生作用。目前，外科手術(shù)治療周圍神經(jīng)損傷效果不盡如人意，盡管自體神經(jīng)移植是周圍神經(jīng)損傷(>5 mm)修復的金標準，但該方法仍存在一系列問題，如：供體來源受限、供體損傷及形態(tài)不匹配、供區(qū)神經(jīng)瘤形成及運動、感覺障礙等。周圍神經(jīng)損傷的修復仍是臨床一大難題，隨著各種實驗技術(shù)的發(fā)展及創(chuàng)新，各種生物材料構(gòu)建神經(jīng)導管用于修復外周神經(jīng)損傷取得了可喜的成績，臨床應用生物材料構(gòu)建神經(jīng)導管作為自體神經(jīng)移植的替代方案前景廣闊。

制備神經(jīng)導管的材料主要包括非生物降解材料、生物降解材料和生物衍生材料。理想的神經(jīng)導管首先要滿足神經(jīng)細胞生長所需要的基本要求，即：①導管降解能夠和神經(jīng)恢復同步，且完全降解；②良好的組織相容性和無毒性；③具有光滑的內(nèi)表面，避免影響再生神經(jīng)的生長，并且易于細胞生長和黏附；④管壁具有選擇通透性，能夠從外周組織吸取營養(yǎng)物質(zhì)；⑤良好的物理機械性能和柔韌性；⑥易于加工成型[1]。

直接的無張力外周神經(jīng)修復不能實現(xiàn)時，神經(jīng)導管就成為橋接感覺神經(jīng)斷端缺損(≤3 cm)的理想方法，而自體神經(jīng)移植是修復長距離(>3 cm)混合性或運動神經(jīng)損傷的金標準[2]。目前有五種通過FDA認證的神經(jīng)導管，其中Neurotube(PGA)、Neurolac(PLCL)、NeuraGen(I型膠原)、NeuroMatrix Neuroflex(I型膠原)四種是生物可降解(降解率3個月至4年)的，而SaluBridge(PVA凝膠)[3]是不可降解吸收的。

1 生物聚合物

生物聚合物是生物相容的聚合物的來源，往往具備可調(diào)的機械性能和降解速度,這些特性與再生神經(jīng)的生長相輔相成。此外，生物聚合物還具有貯藏和釋放近端神經(jīng)纖維生長所需的生長因子和細胞外基質(zhì)蛋白的潛力，一些生物聚合物，如：角蛋白能循環(huán)的整合結(jié)合域(RGD基序)，在較短的小鼠神經(jīng)缺損模型中取得了較好的修復效果[4]。

1.1Ⅰ型膠原 Ⅰ型膠原是細胞外基質(zhì)的主要成分之一，有良好的生物相容性和理想的彈力強度，可以為細胞所識別，對細胞也有趨化性；不僅為細胞提供支持保護作用，而且與細胞的粘附、生長、表達均有密切關(guān)系，被廣泛應用于周圍神經(jīng)缺損的修復[5]；但是膠原具有降解速度快、力學性能較差的缺點。

1.2殼聚糖 殼聚糖是一種天然多糖，是一種良好的神經(jīng)修復材料，可以在體內(nèi)降解為單糖，對神經(jīng)細胞基本無毒害作用。Hsu等[6]提出相較在聚交酯上生長而言，雪旺細胞在殼聚糖上生長會上調(diào)NGF的基因表達水平；大量研究證實，殼聚糖對神經(jīng)細胞有較好的吸附性并可以促進體外神經(jīng)細胞的存活及軸突的再生，這表明以殼聚糖為材料的生物支架可以適用于外周神經(jīng)的軸突再生[7,8]。

2 生物合成材料

生物合成材料是合成聚合物，與生物聚合物相比往往其生物相容性較差，但其降解速度可調(diào)、機械強度及孔隙率和微觀結(jié)構(gòu)可控等屬性為其臨床應用提供了可行性。

2.1聚乙醇酸 (PGA) PGA具有良好的生物相容性和生物降解性能, 但是作為聚酯類，就其物理及化學性質(zhì)來看，其臨床應用受到其降解率過快、低溶解度和快速釋放酸性降解產(chǎn)物的限制[9]。

2.2聚己內(nèi)酯(PCL) PCL具有優(yōu)良的生物相容性和較慢的降解速率，不適合修復斷端缺損>3 cm的神經(jīng)損傷。相對PGA而言，PCL具有更大的柔韌性及疏水性[9]，且PCL成本低，可再生，易于消毒滅菌，其良好的柔韌性易于加工成型。有文獻報道，使用PCL導管修復大鼠長達1 cm缺損的坐骨神經(jīng)斷端，其再生神經(jīng)軸突生長良好，與自體神經(jīng)移植相比無明顯差異，有望臨床推廣[10]；Jin等[11]運用左旋聚己內(nèi)酯(PLCL)修復大鼠1 cm缺損坐骨神經(jīng)斷端，實驗結(jié)果證實，PLCL組大鼠的修復神經(jīng)功能性運動恢復良好，腓腸肌肌僵直力量及肌肉重量分別達到了自體神經(jīng)移植組的85%和82%，而神經(jīng)傳導和復合肌動作電位兩組無明顯統(tǒng)計學差異。

2.3乳酸-羥基乙酸共聚物[ poly ( lactideOcoOglycolide),PLGA ] PLGA一種應用非常廣泛的生物可降解高分子材料,它具有較好的生物相容性,并且比較容易加工成型。近年來,隨著組織工程學的興起和迅速發(fā)展, PLGA成為組織工程支架的首選材料之一，PLGA是目前廣泛應用于骨、軟骨、血管、神經(jīng)、皮膚等組織的生物可降解材料,顯示出良好的臨床應用前景。

PLGA具有良好的生物相容性、可降解性和可塑性等優(yōu)點,并能靈活地控制材料的分子量、降解時間、孔隙率和孔徑等,但細胞在支架材料上的生長、移植和內(nèi)生長率則直接依賴于支架的多孔結(jié)構(gòu)、孔隙率、孔的直徑和孔的形狀。何晨光等[12]使用PLGA為材料,采用靜電紡絲方法制備纖維支架,體外細胞培養(yǎng)實驗證明, PLGA納米纖維支架能很好的支持細胞正常的黏附和增殖活動；李志躍等[13]運用聚乳酸聚羥基乙酸共聚物(PLGA，85∶15)三維神經(jīng)導管，即外壁有微孔，內(nèi)含微絲，微孔孔徑為70～80 μm，孔隙率約為75%，應用這種三維導管修復SD大鼠周圍神經(jīng)的缺損，并在支架材料外涂以黏附蛋白，在管內(nèi)注入神經(jīng)營養(yǎng)因子，證實了這種三維立體神經(jīng)導管具有適度的管壁通透性和孔隙率、降解速度適當及生物活性物質(zhì)緩釋性等特點，初步證明該導管能有效引導SD大鼠坐骨神經(jīng)再生。

3 新型靜電紡絲材料的體外試驗研究

靜電紡絲是一種簡便易行的新型組織工程多孔支架制備方法,具有其他方法不具備的獨特優(yōu)勢。由于靜電紡絲納米纖維支架材料與細胞外基質(zhì)中的膠原纖維相似，高比表面積、高的孔隙率和可調(diào)節(jié)的力學性能及降解性能在組織工程中備受關(guān)注[14～16]。

3.12D隨機排列靜電紡絲納米纖維神經(jīng)導管 Lee等[17]應用靜電紡絲技術(shù)制備PCL/Ⅰ型膠原聚合神經(jīng)導管，運用端側(cè)神經(jīng)吻合術(shù)促進周圍運動神經(jīng)再生，研究相鄰未受損傷的神經(jīng)，基于神經(jīng)導管生物材料同時保留未受損傷的神經(jīng)功能，是否可作為支配失神經(jīng)支配肌肉的神經(jīng)來源，在急性大鼠脛腓骨神經(jīng)損傷模型中得到了驗證；但這種二維隨機排列靜電紡絲納米纖維導管材料對于神經(jīng)軸突的定向生長作用并沒有進一步研究。

3.23D單向縱行排列靜電紡絲PLGA材料 材料加工技術(shù)不斷進步的同時，也促進了再生神經(jīng)修復的試驗研究，原有的二維材料為更貼近體內(nèi)神經(jīng)生長微環(huán)境的三維立體管狀材料所取代。很多學者在此基礎上，研究單向縱行排列的納米纖維導管與隨機排列的納米纖維導管在引導雪旺細胞有序生長方面的作用，大量研究證實雪旺細胞軸突生長在單向排列的納米纖維表面比隨機排列的納米纖維表面要快。這種納米纖維材料是由聚交酯、聚己內(nèi)酯、聚乙醇酸、瓊脂糖及絲素蛋白構(gòu)成[18～20]，單向縱行排列的納米纖維材料成為近幾年外周神經(jīng)修復的首選材料，在該基礎上三維立體排列的單向縱行納米纖維材料用于體外雪旺細胞的培養(yǎng)有了實驗基礎，且有研究表明，在三維立體縱行單向排列的納米纖維導管上體外培養(yǎng)的雪旺細胞軸突生長比在二維隨機排列的納米纖維導管上生長快[21,22]。Jin等[23]通過構(gòu)建大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型，運用縱行排列的納米纖維神經(jīng)導管修復10 mm缺損神經(jīng)斷端，證實導管組與自體神經(jīng)移植組差異無顯著統(tǒng)計學意義，該發(fā)現(xiàn)為體內(nèi)人工神經(jīng)及導管材料復合物修復神經(jīng)損傷奠定了基礎。

歐陽等[24]使用單向?qū)R無縫3D靜電紡絲膠原/PLGA神經(jīng)導管修復大鼠13 mm缺損的坐骨神經(jīng)斷端，證實了這種導管對種子細胞及再生神經(jīng)的引導作用僅次于自體神經(jīng)移植。

4 利于神經(jīng)再生微環(huán)境改善的神經(jīng)導管

目前市面上的神經(jīng)導管大多為生物相容性的、可降解的中空的管道，損傷神經(jīng)的兩個斷端分別被縫合在導管兩端，這些導管作為再生神經(jīng)的一個中空、孤立的生長空間，在不做任何治療的情況下，改善了神經(jīng)的再生。但是對于長度超過1 cm的神經(jīng)缺損，通常因為神經(jīng)導管不能在一段時間提供軸突橫貫神經(jīng)缺損所需的結(jié)構(gòu)性支持作用而導致再生失敗。在一定時間內(nèi)軸突不能連接到它們的靶組織，就會喪失神經(jīng)的再生能力以及功能恢復的可能性[25]，對于人體而言，軸突以及雪旺細胞—外周神經(jīng)系統(tǒng)的支持細胞再生能力的下降通常始于損傷之后的8周，在半年到一年內(nèi)，再生更是不太可能的[26]?；谶@些觀點，研究認為，相比自體、異體神經(jīng)移植而言，神經(jīng)導管必須提供軸突再生的結(jié)構(gòu)性支持[27]。為了促進神經(jīng)再生的速度，神經(jīng)導管除了應該提供對再生神經(jīng)的物理支持和引導外，理想的神經(jīng)導管還必須提供相關(guān)的生化反應信號來引導軸突的再生，以在周圍神經(jīng)再生過程中發(fā)揮積極作用[28]。近年來，很多學者對材料表面加以修飾并改進制造方法，使得神經(jīng)導管為雪旺細胞等種子細胞創(chuàng)造出更有利于神經(jīng)生長的微環(huán)境，更適應神經(jīng)的再生。

沈華等[29]運用靜電紡絲的PLGA/Chitosan導管內(nèi)層涂布睫狀神經(jīng)因子(CNTF)，修復斷端缺損為25 mm的犬脛骨神經(jīng)，三個月后通過肌電圖測試、S100免疫熒光染色、圖像分析等得出，PLGA/Chitosan-CNTF導管組與自體神經(jīng)移植組對于神經(jīng)再生效果無明顯差異。Rui等[30]已構(gòu)建出可以緩釋血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)長達4周的PLGA神經(jīng)導管，為軸突的再生提供營養(yǎng)充足的生長環(huán)境，有望用于體內(nèi)外周神經(jīng)修復。

Neal等[28]通過構(gòu)建Laminin/PCL混合納米纖維神經(jīng)導管證實這種Laminin納米纖維，無論是在幾何形狀還是組成成分以及對神經(jīng)元樣細胞及神經(jīng)前體細胞的吸附性、分化及神經(jīng)突的伸展方面，可以很好地發(fā)揮模擬基底膜的功能；Neal運用這種導管材料修復大鼠長1 cm缺損的脛骨神經(jīng)，通過熱縮足反射潛伏期測試感覺功能的恢復、步法分析運動功能的恢復情況，發(fā)現(xiàn)Laminin/PCL組都比PCL組要好的多；Hsu等[31]運用Laminin修飾的多壁式神經(jīng)導管與骨髓間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)修復SD大鼠斷端達1 cm缺損的坐骨神經(jīng)，亦獲得滿意的效果。

Xiong等[32]通過雪旺細胞與神經(jīng)干細胞共同培養(yǎng)于NT-3緩釋的PLGA導管材料上，探尋中樞神經(jīng)修復的實驗基礎，結(jié)果證實雪旺細胞可以促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化，并可創(chuàng)造更利于神經(jīng)生長的微環(huán)境；亦有很多學者致力于雪旺細胞與干細胞的共培養(yǎng)或是干細胞與導管材料的共培養(yǎng)，以尋找更利于神經(jīng)再生的條件，以達到外周神經(jīng)修復運動與感覺恢復的理想效果[33,34]。

5 生物材料在耳鼻咽喉頭頸外科領域修復神經(jīng)損傷的應用前景

喉返神經(jīng)是比較特殊的外周神經(jīng)，在耳鼻咽喉與頭頸外科，喉返神經(jīng)損傷比較常見，而對于較嚴重的喉返神經(jīng)損傷，比如神經(jīng)在手術(shù)或者外傷中被切斷或擠壓，再生軸突的生長可能不會達到預期神經(jīng)對喉部肌肉的再支配效果；到達肌肉的再生神經(jīng)可能可防止肌肉的失神經(jīng)萎縮，但卻不能引起隨意支配；有些神經(jīng)軸突不能到達靶器官，而有的卻往錯誤的方向發(fā)展，導致拮抗肌同步收縮和運動。因此，外科醫(yī)生們發(fā)現(xiàn)很難運用神經(jīng)移植術(shù)恢復癱瘓喉肌的有效運動[35]。

自體神經(jīng)移植術(shù)引發(fā)的種種問題如供體受限、創(chuàng)傷神經(jīng)瘤的形成等，促進了組織工程學的發(fā)展，生物材料和種子細胞為喉返神經(jīng)修復提供了科研思路。Birchall等[36]運用聚羥基丁酸酯(PHB)材料橋接膈神經(jīng)和喉返神經(jīng)斷端，修復豬一側(cè)喉返神經(jīng)損傷模型，并將在喉入口處支配喉內(nèi)收肌群的喉返神經(jīng)分支切斷，目的是選擇性的實現(xiàn)環(huán)杓后肌的神經(jīng)再支配，4個月后，喉部肌肉總重減輕，而環(huán)杓后肌重量增加，說明已經(jīng)逐步達到神經(jīng)肌肉的再支配。Paviot等[37]嘗試分別將嗅粘膜來源和嗅球來源的嗅鞘細胞與基質(zhì)膠(matrigel)混合，注射于大鼠迷走神經(jīng)損傷附近區(qū)域，手術(shù)后三個月，通過視頻喉鏡、肌電圖記錄評估喉肌活動、“連帶運動”現(xiàn)象和延遲，結(jié)果顯示，嗅粘膜來源的嗅鞘細胞組通過改善肌電活動和神經(jīng)傳導極大地促進了組織愈合，但是卻能誘發(fā)異常運動和不良功能恢復。相比而言，嗅球來源的嗅鞘細胞可以增加有髓神經(jīng)纖維和神經(jīng)傳導的數(shù)量，并可通過誘導軸突定向再生改善神經(jīng)功能的恢復。

面神經(jīng)缺損在臨床實踐中亦非常普遍，損傷來源包括腮腺惡性病變的切除手術(shù)、外傷及顳骨巖部膽脂瘤手術(shù)等，其損傷可導致面部肌肉運動障礙,給患者帶來很大的心理壓力。面神經(jīng)缺損修復一直是醫(yī)學領域的一個熱點及難題，面神經(jīng)橫斷后,神經(jīng)功能恢復的希望非常渺小，而神經(jīng)修復手術(shù)給患者帶來的經(jīng)濟負擔也顯著降低了患者的生活質(zhì)量。隨著顯微外科技術(shù)的發(fā)展與進步，面神經(jīng)修復水平有了顯著的提高，但是同樣存在供體受限、供區(qū)神經(jīng)瘤形成等問題。神經(jīng)組織工程技術(shù)通過三個關(guān)鍵因素(人工神經(jīng)導管、神經(jīng)營養(yǎng)因子、細胞培養(yǎng))以期促進面神經(jīng)再生而解決以上問題。近年來有關(guān)面神經(jīng)損傷修復的方法，體外試驗包括干細胞和/或生物導管材料，前者包括骨髓干細胞、脂肪干細胞、牙髓細胞以及神經(jīng)干細胞，后者包括膠原、動靜脈血管以及聚乙醇酸。眾多實驗結(jié)果表明，生物材料聯(lián)合神經(jīng)營養(yǎng)因子及種子細胞修復損傷神經(jīng)效果顯著，在電生理、神經(jīng)電位傳導等多項檢測指標方面與自體神經(jīng)移植組無明顯差異[38,39]。

生物材料在外周神經(jīng)尤其是坐骨神經(jīng)損傷修復方面日臻完善，在耳鼻咽喉與頭頸外科的神經(jīng)損傷修復中也前景廣闊。理想的神經(jīng)橋接材料不僅要有引導種子細胞遷移和軸突定向朝著遠端目標生長的功能，保證降解速率與神經(jīng)恢復同步，并能夠作為神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)生長因子的載體，起到緩釋這些因子的作用，模擬神經(jīng)在體內(nèi)生長的微環(huán)境，提高神經(jīng)纖維的再生能力。隨著相關(guān)實驗研究的不斷深入，各種生物材料、神經(jīng)生長內(nèi)環(huán)境、種子細胞與干細胞在外周神經(jīng)修復中的作用已日漸明了，周圍神經(jīng)損傷修復呈現(xiàn)出蓬勃的生機并將逐步應用于耳鼻咽喉頭頸外科臨床。

6 參考文獻

1 刁云鋒，商崇智.神經(jīng)導管生物材料在神經(jīng)修復中的應用[J].中國組織工程研究與臨床康復,2011,15: 6424.

2 Deal DN,Griffin JW,Hogan MV.Nerve conduits for nerve repair or reconstruction[J].J Am Acad Orthop Surg, 2012,20:63.

3 Liao IC, Wan H, Qi S,et al. Preclinical evaluations of acellular biological conduits for peripheral nerve regeneration[J]. J Tissue Eng,2013,4:e3604911.

4 Sierpinski P, Garrett J, Ma J, et al.The use of keratin biomaterials derived from human hair for the promotion of rapid regeneration of peripheral nerves[J]. Biomaterials,2008,29:118.

5 Cuevas P,Carceller F,Dujovny M,et al.Peripheral nerve regeneration by bone marrow stromal cells[J].Neurol Res,2002,24:634.

6 Hsu SH, Lu PS, Ni HC.Fabrication and evaluation of microgrooved polymers as peripheral nerve conduits[J]. Biomed Microdevices,2007,9:665.

7 Fine EG,Decosterd I,Papaloizos M,et al.GDNF and NGF released by synthetic guidance channels support sciatic nerve regeneration across a long gap[J].Eur J Neurosci,2002,15:589.

8 Freier T,Montenegro R,ShanKoh H,et al.Chitin-based tubes for tissue engineering in the nervous system[J]. Biomaterials,2005,26:4 624.

9 Mobasseri SA,Terenghi G,Downes S.Micro-structural geometry of thin films intended for the inner lumen of nerve conduits affects nerve repair[J].J Mater Sci, 2013,24:1639.

10 Reid AJ,de Luca AC,Faroni A,et al.Long term peripheral nerve regeneration using a novel PCL nerve conduit[J]. Neurosci Lett，2013,544:125.

11 Jin J, Park M, Rengarajan A,et al.Functional motor recovery after peripheral nerve repair with an aligned nanofiber tubular conduit in a rat model[J]. Regen Med, 2012,7:799.

12 何晨光，高永娟，趙莉，等.靜電紡絲的主要參數(shù)對PLGA纖維支架形貌和纖維直徑的影響[J].中國生物工程雜志，2007, 27:46.

13 李志躍，李際才，趙群.聚乳酸聚羥基乙酸共聚物三維神經(jīng)導管修復周圍神經(jīng)缺損[J].中國組織工程研究與臨床康復，2010,14:6313.

14 Schnell E, Klinkhammer K, Balzer S,et al.Guidance of glial cell migration and axonal growth on electrospun nanofibers of poly-ε-caprolactone and a collagen/poly-ε-caprolactone blend[J].Biomaterials, 2007,28:3012.

15 Li WJ, Laurencin CT,Caterson EJ,et al.Electrospun nanofibrous structure: a novel scaffold for tissue engineering[J].J Biomed Mater Res,2002,60:613.

16 James R,Toti US,Laurencin CT,et al.Electrospun nanofibers scaffolds: engineering soft tissues[J].Methods Mol Biol, 2011,726:243.

17 Lee BK,Ju YM,Cho JG,et al.End-to-side neurorrhaphy using an electrospun PCL/collagen nerve conduit for complex peripheral motor nerve regeneration[J].Biomaterials, 2012,33:9027.

18 Griffin J,Delgado-Rivera R,Meiners S,et al.Salicylic acid-derived poly(anhydride-ester) electrospun fibers designed for regenerating the peripheral nervous system[J].J Biomed Mater Res A,2011,97:230.

19 Zander NE,Orlicki JA,Rawlett AM,et al.Surface-modified nanofibrous biomaterial bridge for the enhancement and control of neurite outgrowth[J]. Biointerphases, 2010,5:149.

20 Johnson PJ,Skornia SL,Stabenfeldt SE,et al.Maintaining bioactivity of NGF for controlled release from PLGA using PEG[J].J Biomed Mater Res A,2008,86:420.

21 Subramanian A.Axially aligned electrically conducting biodegradable nanofibers for neural regeneration[J].Journal of Materials Science Materials in medicine, 2012,23:1797.

22 Anuradha S,Krishnan UM,Sethuraman S.Fabrication of uniaxially aligned 3D electrospun scaffolds for neural regeneration[J].J Mater Sci Mater Med,2012 ,23:1797.

23 Jin J,Park M,Rengarajan A,et al.Functional motor recovery after peripheral nerve repair with an aligned nanofiber tubular conduit in a rat model[J].Regen Med,2012,7:799.

24 Ouyang Y,Huang C,Zhu Y,et al.Fabrication of seamless electrospun collagen/PLGA conduits whose walls comprise highly longitudinal aligned nanofibers for nerve regeneration[J]. J Biomed Nanotechnol,2013,9:931.

25 Bellamkonda RV.Peripheral nerve regeneration: an opinion on channels, scaffolds and anisotropy[J].Biomaterials,2006,27:3515.

26 Hoke A.Mechanisms of disease: what factors limit the success of peripheral nerve regeneration in humans[J]? Nat Clin Pract Neurol,2006,2:448.

27 Jiang X,Lim SH,Mao HQ,et al.Current applications and future perspectives of artificial nerve conduits[J].Exp Neurol,2010,223:86.

28 Neal RA,Tholpady SS,Foley PL,et al.Alignment and composition of laminin-polycaprolactone nan fiber blends enhance peripheral nerve regeneration[J]. J Biomed Mater Res A，2011,21:e3550006

29 Shen H,Shen ZL,Zhang PH,et al.Ciliary neurotrophic factor-coated polylactic-polyglycolic acid chitosan nerve conduit promotes peripheral nerve regeneration in canine tibial nerve defect repair[J].J Biomed Mater Res B Appl Biomater，2010,95:161.

30 Rui J,Dadsetan M,Runge MB,et al.Controlled release of vascular endothelial growth factor using poly-lactic-co-glycolic acid microspheres: in vitro characterization and application in polycaprolactone fumarate nerve conduits[J]. Acta Biomater,2012,8:511.

31 Hsu SH,Kuo WC, Chen YT,et al.New nerve regeneration strategy combining laminin-coated chitosan conduits and stem cell therapy[J].Acta Biomater,2013,9:6606.

32 Xiong Y, Zhu JX, Fang ZY,et al.Coseeded Schwann cells myelinate neuritis from differentiated neural stem cells in neurotrophin-3-loaded PLGA carriers[J].Int J Nanomedicine,2012,7:1977.

33 Xue C,Hu N,Gu Y,et al.Joint use of a chitosan/PLGA scaffold and MSCs to bridge an extra large gap in dog sciatic nerve[J].Neurorehabil Neural Repair,2012,26:96.

34 Dai LG,Huang GS,Hsu SH.Sciatic nerve regeneration by cocultured Schwann cells and stem cells on microporous nerve conduits[J].Cell Transplant,2013,22:2029.

35 Kingham PJ,Terenghi G.Bioengineered nerve regeneration and muscle reinnervation[J]. J Anat,2006,209:511.

36 Birchall M,Idowu B,Jones A,et al.Laryngeal abductor muscle reinnervation in a pig mode[J].Acta Otolaryngol,2004,124:839.

37 Paviot A,Guerout N,Bon-Mardion N,et al.Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells[J].Neurobiol Dis,2011,41:688.

38 Sasaki R,Aoki S,Yamoto M, et al.PLGA artificial nerve conduits with dental pulp cells promote facial nerve regeneration[J].J Tissue Eng Regen Med,2011,5:823.

39 Costa HJ, Ferreira Bento R, Salomone R,et,al. Mesenchymal bone marrow stem cells within polyglycolic acid tube observed in vivo after six weeks enhance facial nerve regeneration[J].Brain Res,2013,1510:10.