樟樹葉化學(xué)成分的研究

王智慧，凌鐵軍，張 梁，鮑官虎，孫啟祥，張 倩，汪小剛，方從兵*

1安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉生物化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230036;2 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所國(guó)家林業(yè)局林木培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100091

樟樹(Cinnamomum camphora)是樟科(Lauraceae)樟屬植物，別名:香樟、樟木、芳樟、烏樟、油樟、香蕊、小葉樟，系常綠喬木［1］。樟樹分布廣泛，主產(chǎn)于我國(guó)南方各省區(qū)，以福建、臺(tái)灣為最多，為熱帶和亞熱帶常綠闊葉林的代表樹種，被譽(yù)為江南寶樹。樟樹的化學(xué)成分主要有揮發(fā)油、黃酮類、生物堿、有機(jī)酸、木脂素及核糖體失活蛋白等，樟樹的莖、葉、根、果實(shí)、種子等各部分都具有一定的生物活性，主要涉及抑菌［2，3］、食品防腐保鮮［4，5］、驅(qū)蟲［6，7］、抗氧化［8］、消炎及細(xì)胞毒活性［9］等方面，在臨床醫(yī)學(xué)應(yīng)用上也越來越常見［10，11］。

目前，對(duì)樟樹的研究大多集中在揮發(fā)油的化學(xué)成分檢測(cè)分析和粗提物生物活性方面，而對(duì)于樟樹葉片中非揮發(fā)性成分的化學(xué)組成相關(guān)報(bào)道較少。本文以干燥處理的樟樹葉為材料，經(jīng)過醇提、萃取、柱層析對(duì)樟樹葉中有效的非揮發(fā)性成分進(jìn)行分離及結(jié)構(gòu)鑒定，共分離和鑒定出9個(gè)化合物，最后與已知文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)照，確證化合物結(jié)構(gòu)。分別為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(1)，槲皮素-3-O-β-D-鼠李糖苷(2)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)，異鼠李素-3-Oβ-D-葡萄糖苷(4)，黑色五味子單體苷(5)，山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷(6)，異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷(7)，新芝麻脂素(8)和maculatin(9)。其中，化合物1 為首次從樟屬中分離得到，化合物4、5 和8 為首次從樟科植物中分離得到。

1 材料與儀器設(shè)備

樟樹葉采自安徽合肥市苗圃，經(jīng)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園林學(xué)院黃成林教授鑒定為Cinamomum camphora 的樹葉。

核磁共振波譜儀(美國(guó)BROKER 公司，400 MHz1H NMR，100 MHz13C NMR)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司R-201 型)，核磁測(cè)試用氘代試劑DMSO、氯仿、甲醇(美國(guó)CIL 公司)，電子天平(上海天平儀器廠T6328B 型)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)，實(shí)驗(yàn)試劑為分析純(天津博迪有限公司)，硅膠(柱層析用，100～200、200～300、300～400 目，青島海洋化工廠分廠)，葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20，美國(guó)Pharmacia 公司)，聚酰胺粉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，聚酰胺薄膜(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

2 提取與分離

將8.4 kg 烘干樟樹葉全部粉碎，用甲醇浸提3次，得750 g 樟樹葉甲醇粗提浸膏，依次采用石油醚、氯仿、正丁醇3 種不同極性的有機(jī)試劑分級(jí)萃取，得到石油醚部分(100 g)、氯仿部分(45 g)、正丁醇部分(160 g)及水相4個(gè)部分的分級(jí)萃取物浸膏。

正丁醇浸膏(160 g)經(jīng)HPD-500 型大孔樹脂層析柱，得到Ⅰ～Ⅴ五個(gè)部分。部分II(51.7 g)濕法過硅膠柱，乙酸乙酯-甲醇-水(10∶0.5∶0.5→6∶0.5∶0.5→2∶0.5∶0.5)梯度洗脫得到組分1～13。組分2(2.7 g)，依次通過過硅膠柱(乙酸乙酯-甲醇-水)、聚酰胺柱(二氯甲烷-甲醇)梯度洗脫，得到化合物1(15 mg)和化合物2(39 mg)。組分3(1.5 g)，上聚酰胺柱，用二氯甲烷-甲醇(4∶1)洗脫劑洗脫，得化合物3(10 mg)和化合物4(16 mg)。組分4(約200 mg)有白色化合物析出，抽濾得白色沉淀部分，過凝膠柱得到化合物5(10 mg)。組分7(3.2 g)，濕法過硅膠柱，氯仿-甲醇-水(15∶1∶0.1→10∶1∶0.1→7∶1∶0.1→7∶3∶0.5)梯度洗脫，得化合物6(40 mg)。組分8(1.6g)，濕法過硅膠柱，二氯甲烷-甲醇-水(15∶1∶0.1→10∶1∶0.1→7∶1;0.1→8;2∶0.3)梯度洗脫，得化合物7(35 mg)。

氯仿浸膏(45 g)，濕法過硅膠柱，丙酮-石油醚(6∶1→4∶1→2∶1→1∶1)梯度洗脫，得化合物8(50 mg)和化合物9(100 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色粉末(甲醇);EIS-MS m/s:447［M-H］-。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.61(1H，s，5-OH)，8.05(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.89(2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.44(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.46(1H，d，J=7.6 Hz，H-1'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物1 為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖糖苷。

化合物2 黃色粉末(甲醇);EIS-MS m/s:447［M-H］-。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.53(1H，br s，H-2')，6.85(1H，d，J=8.8 Hz，H-5')，7.45(1H，dd，J=2.4，8.8 Hz，H-6')，5.27(1H，br s，H-1'')，4.39(1H，d，J=1.2 Hz，H-2'')，3.71(1H，d，J=10.4 Hz，H-3'')，3.06-3.39(2H，m，H-4''，5'')，0.99(3H，d，J=6.4 Hz，H-6'')。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］對(duì)照，確定化合物2 為槲皮素-3-O-β-D-鼠李糖苷。

化合物3 黃色固體(甲醇);EIS-MS m/s:463［M-H］-。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.59(1H，dd，J=2.0，8.8 Hz，H-6')，7.59(1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.87(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.39(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.25(1H，d，J=7.6 Hz，H-l'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷一致，故鑒定化合物3 為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4 黃色粉末(甲醇);EIS-MS m/s:477［M-H］-。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.62(1H，s，5-OH)，7.95(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.51(1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-6')，6.92(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.22(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.57(1H，d，J=7.2 Hz，H-1'')，3.85(3H，s，3'-OCH3);13C NMR(DMSO-d6，100 Hz)δ:177.4(C-4)，164.2(C-7)，161.2(C-5)，156.4(C-9)，156.2(C-2)，149.4(C-4')，146.9(C-3')，133.0(C-3)，122.0(C-1')，121.1(C-6')，115.2(C-5')，113.5(C-2')，104.0(C-10)，100.8(C-1'')，98.7(C-6)，93.7(C-8)，77.4(C-5'')，76.4(C-3'')，74.3(C-2'')，69.8(C-4'')，60.6(C-6'')，55.7(3'-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12，15］報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4 為異鼠李素-3-Oβ-D-葡萄糖苷。

化合物5 白色無定型粉末(甲醇);EIS-MS m/s:515［M +Na］+。1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:6.77(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.65(1H，s，H-2')，6.62(1H，dd，J=2.0 Hz，8.0 Hz，H-5)，6.16(1H，d，J=0.4 Hz，H-5')，4.05(1H，d，J=10.4 Hz，H-9a)*，4.04(1H，d，J=7.2 Hz，H-1'')，3.97(1H，dd，J=2.4，9.6 Hz，H-9'a)，3.80(3H，s，3-OCH3)，3.79(3H，s，3'-OCH3)，3.79(1H，m，H-5''a)*，3.75(1H，dd，J=4.0，11.2 Hz，H-9b)，3.69(1H，dd，J=6.0，10.8 Hz，H-9'b)，3.45(1H，m，H-4')，3.17-3.27(3H，m，H-7)，3.11(1H，t，J=11.2 Hz，H-2')，2.82(2H，m，H-7')，2.06(1H，m，H-8)，1.85(1H，tt，J=2.8，10.8 Hz，H-8');13C NMR(CD3OD，100 MHz):134.4(C-1)，114.3(C-2)，147.2(C-3)，145.2(C-4)，116.1(C-5)，123.2(C-6)，48.0(C-7)，45.9(C-8)，69.6(C-9)，129.1(C-1')，112.5(C-2')，149.0(C-3'')，145.9(C-4')，117.4(C-5')，138.6(C-6'')，33.8(C-7')，39.7(C-8')，66.9(C-9')，105.8(C-1'')，78.0(C-2'')，75.0(C-3'')，71.3(C-4'')，65.2(C-5'')，56.5(3-OCH3)，56.4(3'-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［16］的黑色五味子單體苷數(shù)據(jù)對(duì)照，基本一致，確定化合物5 為黑色五味子單體苷。

化合物6 黃色固體(甲醇);EIS-MS m/s:593［M-H］-。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.56(1H，s，5-OH)，10.32(1H，s，7-OH)，10.10(1H，s，4'-OH)，7.98(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.88(2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.3l(1H，d，J=7.2 Hz，H-l'')，4.37(1H，d，J=1.2 Hz，H-1''')，3.01-3.70(4H，m，sugar protons)，0.98(3H，d，J=6.4 Hz，H-6''');13C NMR (DMSO-d6，100 MHz):157.3 (C-2)，133.7 (C-3)，178.0 (C-4)，161.6(C-5)，99.1(C-6)，164.6(C-7)，94.2(C-8)，157.0(C-9)，104.3(C-10)，121.4(C-1')，131.4(C-2'，6')，115.6(C-3'，5')，160.3(C-4')，101.3(C-1'')，74.6(C-2'')，76.8(C-3'')，70.8(C-4'')，76.2(C-5'')，67.3 (C-6'')，101.2 (C-1''')，71.1 (C-2''')，70.4(C-3''')，72.2(C-4''')，68.7(C-5''')，18.2(C-6''')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12，17］報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致。故鑒定化合物6 為山柰酚-3-O-β-D-蕓香糖苷。

化合物7 黃色固體(甲醇);EIS-MS m/s:623［M-H］-。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.57(1H，s，5-OH)，7.85(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.50(1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-6')，6.91(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.43(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.43(1H，d，J=7.2 Hz，H-1'')，4.49(1H，br s，H-1''')，3.84(3H，s，3'-OCH3)，3.01-3.72(3H，m，sugar protons)，0.98(3H，d，J=6.0 Hz，H-6''');13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:17.6(C-6''')，55.6(3'-OCH3)，66.8(C-6'')，68.2 (C-5''')，70.1 (C-3''')，70.3 (C-2''')，70.6(C-4''')，71.8(C-4''')，74.2(C-2'')，75.9(C-3'')，76.4(C-5'')，93.8(C-8)，98.7(C-6)，100.8(C-1''')，101.1(C-1'')，104.0(C-10)，113.3(C-2')，115.2(C-5')，121.0(C-1')，122.3(C-6')，133.0(C-3)，146.9(C-4')，149.4(C-3')，156.4(C-2，9)，161.2(C-5)，164.1(C-7)，177.3(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18，19］報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物7為異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷。

化合物8 無色針狀晶體(甲醇);EIS-MS m/s:375［M+Na］+。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.76～6.88(6H，m，H-Ar)，5.95(4H，s，2(-OCH2O-))，5.94(1H，s，H-4β)，4.95(1H，d，J=6.8 Hz，H-2)，4.83(1H，d，J=7.2 Hz，H-6)，4.23(1H，dd，J=6.0，9.2 Hz，H-8β)，4.01(1H，dd，J=2.4，9.2 Hz，H-8α)，3.23(1H，m，H-1)，2.97(1H，m，H-5);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:54.80(C-1，5)，72.79(C-8)，84.12 (C-6)，87.99 (C-2)，101.90 (C-2 (-OCH2O))，102.53(C-4)，107.03(C-2')，107.77(C-2'')，108.43(C-5')，108.78(C-5')，120.26(C-6')，120.42 (C-6'')，137.66 (C-1')，138.56 (C-1'')，147.77 (C-3')，147.94 (C-3'')，148.74 (C-4')，148.91(C-4'')。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］一致，故鑒定化合物8 為新芝麻脂素。

化合物9 白色晶體(甲醇);EIS-MS m/s:409［M+Na］+。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.77(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.75(1H，d，J=7.6 Hz，H-5')，6.69(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.66(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6)，6.55(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，6.49(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，4.12(1H，dd，J=7.2，9.2 Hz，H-9'β)，3.87(1H，dd，J=1.6，3.6 Hz，H-9'α)*，3.86(3H，s，3-OCH3)，3.85(3H，s，3'-OCH3)，3.84(3H，s，4-OCH3)，3.82(3H，s，4'-OCH3)，2.64(1H，m，H-7'β)，2.58(1H，m，H-8)，2.53(1H，m，H-7'α)，2.48(1H，m，H-8')，2.93(1H，dd，J=6.4，14.0 Hz，H-7α)，2.97(1H，dd，J=6.0，14.0 Hz，H-7β);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz):178.68(C-9)，149.17(C-3)，149.04(C-3')，147.95(C-4)，147.82(C-4')，131.68(C-1)，131.03(C-1')，121.72(C-6)，120.88(C-6')，113.65(C-2)，112.89(C-2')，112.34(C-5)，112.20(C-5')，71.17 (C-9')，55.94 (4-OCH3)，55.92 (4' -OCH3)，55.88(3-OCH3)，55.82(3' -OCH3)，46.09(C-8)，41.26(C-8')，37.38(C-7')，34.14(C-7)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21，22］一致，確定化合物9 為maculatin。

* :有信號(hào)覆蓋。

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