高效液相色譜檢測新型“香料”毒品中Hu-210的分析方法研究*

翟晚?xiàng)?，張春水，高利?/p>

（公安部物證鑒定中心，北京100038）

高效液相色譜檢測新型“香料”毒品中Hu-210的分析方法研究*

翟晚?xiàng)?，張春水，高利?/p>

（公安部物證鑒定中心，北京100038）

建立了新型“香料”毒品中Hu-210的液相色譜分析方法。以甲醇作為提取溶劑。采用島津ODS-SP型（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，紫外檢測器以215nm作為檢測波長。以（甲醇-乙腈）-高純水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1mL·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL。在優(yōu)化條件下，Hu-210在1～100μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.9999，檢出限（S/N≥3.3）為0.2ng·μL-1。方法快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠，適用于新型“香料”毒品樣本中Hu-210成分的定量測定。

液相色譜；合成大麻素；Hu-210

近年來，一種新型“香料”毒品悄然興起。不法分子將合成大麻素添加至草本基質(zhì)中，其吸食體驗(yàn)與天然大麻相似且常常具有更強(qiáng)的效力。Hu-210就是合成大麻素的一種，化學(xué)名為（6aR,10aR）-3-（1,1-二甲基庚基）-6a,7,10,10a-四氫-1-羥基-6, 6-二甲基-6H-二苯并[b,d]吡喃-9-甲醇，化學(xué)式為C25H38O3，結(jié)構(gòu)式見圖1，分子量386.3。它是大麻受體CB1和CB2的激動(dòng)劑，與天然大麻的主要活性成分Δ9-四氫大麻酚（Δ9-Tetrahydrocannabinol，THC）相比，具有更強(qiáng)的效力，已被美國列為I類受控物質(zhì)。

目前，對于Hu-210的檢測分析方法主要有液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[1，2]，也有使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的報(bào)道。我國國內(nèi)目前僅有1篇對此物質(zhì)進(jìn)行分析檢測的報(bào)道[3]。本文采用液相色譜法，建立了快速、簡便、可靠的Hu-210定量方法，以期為合成大麻素領(lǐng)域的研究提供參考和借鑒。

圖1 Hu-210的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of Hu-210

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與裝置

液相色譜儀（日本島津公司Prominence UFLC，包括LC-20AD XR型泵、SIL-20AC XR型進(jìn)樣器、SPD-20A型檢測器、CTO-20AC型柱溫箱、數(shù)據(jù)處理軟件LC solution）；十萬分之一電子分析天平（瑞典METTLER公司）；EYELA型渦旋混合器（日本EYELA公司）；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國SIGMA公司）；Synergy UV型純水制備系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 試劑與材料

Hu-210（1.0mg·mL-1）、四氫大麻酚（100μg· mL-1）標(biāo)準(zhǔn)品溶液（美國Cerilliant公司）；大麻酚（1.0 mg·mL-1）和大麻二酚（1.0mg·mL-1）對照品購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純（J＆K公司）；水為色譜用超純水。

1.3 色譜條件

色譜柱為島津ODS-SP型（250mm×4.6mm，5μm），檢測波長為215nm，以甲醇-乙腈（50∶50，V/V）（A）和高純水（B）作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，有機(jī)相初始濃度為80%，梯度陡度為1%·min-1，流速1mL·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

Hu-210極性較弱，適合采用反相色譜進(jìn)行分離?？紤]到本實(shí)驗(yàn)使用的儀器是島津公司的高效液相色譜儀，兼顧儀器設(shè)備和樣品情況，最終采用島津ODS-SP型（250mm×4.6mm,5μm）色譜柱。

2.2 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器對Hu-210進(jìn)行了檢測，獲取的光譜圖見圖2。

圖2 Hu-210的光譜圖Fig.2 Spectrogram of Hu-210

由圖2可見，目標(biāo)物在209nm吸收強(qiáng)度達(dá)到最大值。同時(shí)，為盡量避免流動(dòng)相中本底的干擾，對Hu-210在不同檢測波長下的信噪比進(jìn)行了考察，結(jié)果見圖3，在215nm附近目標(biāo)物可獲得最高的信噪比，故選擇215nm作為檢測波長。

圖3 不同檢測波長下Hu-210的信噪比Fig.3 Signal-noise ratio of Hu-210 at different detection wavelength

2.3 梯度洗脫方法的建立

采用單因素實(shí)驗(yàn)的方法，考察了有機(jī)相濃度、梯度陡度對Hu-210色譜行為的影響，結(jié)果見圖4、5。

圖4 有機(jī)相濃度對Hu-210峰高的影響Fig.4 Effectof organic phase’s contenton peak heightof Hu-210

圖5 梯度陡度對Hu-210峰高的影響Fig.5 Effect of gradient steepness on peak height of Hu-210

由圖4、5可見，目標(biāo)物的色譜響應(yīng)隨有機(jī)相濃度和梯度陡度的增加而升高。而塔板數(shù)隨有機(jī)相濃度的降低和梯度陡度的增加而增加。由于四氫大麻酚與THC出峰時(shí)間相近，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)和權(quán)衡，選擇80%作為有機(jī)相初始濃度，1%·min-1作為梯度陡度，柱溫設(shè)為35℃，流速設(shè)為1mL·min-1；在0～15min內(nèi)有機(jī)相濃度由80%線性變化至95%。在此條件下，Hu-210塔板數(shù)可達(dá)30000以上，四氫大麻酚與Hu-210分離度可達(dá)到2.0以上，色譜行為良好。

2.4 線性范圍與工作曲線

精密吸取一定量的100μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇溶液逐級稀釋，配制成質(zhì)量濃度為50、25、10、5、1μg·m L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣，每份樣品平行進(jìn)樣3次，在優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)行分析，用峰面積積分值（Y）對質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，Hu-210在1～100μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好，線性方程：Y=25342.93X+6361.389，r2>0.9999。按S/N≥3.3進(jìn)行計(jì)算，本方法對Hu-210的檢出限為0.2μg·mL-1。

2.5 精密度

取低（1μg·mL-1）、中（10μg·mL-1）、高（100μg· mL-1）3個(gè)濃度的Hu-210標(biāo)準(zhǔn)溶液，每一濃度分別于1日內(nèi)進(jìn)樣6次，低、中、高濃度的峰面積日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.98%、0.52%、0.33%；每一濃度分別于連續(xù)6日內(nèi)進(jìn)樣，低、中、高濃度的峰面積RSD分別為2.2%、1.5%、0.96%，精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性

取一份中等濃度（10μg·mL-1）標(biāo)準(zhǔn)溶液，室溫下靜置并于0、3、6、9、18、36、72h時(shí)進(jìn)樣分析，Hu-210在72h內(nèi)峰面積RSD為0.15%，表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。另取一份同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液放置于-20℃冰箱中，于0、5、10、15d分別進(jìn)樣分析，峰面積RSD為1.87%，表明樣品在15d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 實(shí)際樣本分析

將某香料毒品樣本研磨成粉末狀，精密稱取30.0mg，加入30mL甲醇，超聲20min，5000r·min-1離心5min，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。采用1.3節(jié)的色譜條件進(jìn)行分析，Hu-210出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，樣品中Hu-210含量為0.53%。各目標(biāo)物分離效果好、抗干擾性強(qiáng)，方法準(zhǔn)確、可靠。

圖6 某“香料”毒品樣品色譜圖Fig.6 Chromatogram of a“spice”drug sample

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了合成大麻素Hu-210的高效液相色譜分析方法，該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠，適合測定新型“香料”毒品中的合成大麻素Hu-210。

［1］Kim U，Jin M J，Lee J,et al.Tentative identification of phase I metabolites of HU-210,a classical synthetic cannabinoid,by LC-MS/MS［J］.J.Pharm.Biomed.Anal.，2012,64-65:26-34.

［2］Scheidweiler K B,Huestis M A.Simultaneousquantification of 20 synthetic cannabinoidsand 21metabolites,and semi-quantification of 12 alkyl hydroxy metabolites in human urine by liquid chromatography tandem mass spectrometry［J］.J.Chromatogr A,2014, 1327:105.

［3］吳忠平，鄭水慶，嚴(yán)松茂，等.氣相色譜-質(zhì)譜結(jié)合準(zhǔn)確質(zhì)量測定快速鑒定合成大麻素［J］.分析測試技術(shù)與儀器，2012，18（4）：197-203.

Study on determ ination of Hu-210 in novel“spice”drugs by HPLC*

ZHAIWan-feng*，ZHANG Chun-shui，GAO Li-sheng
（Institute of Forensic ScienceMinistry of Public Security，Beijing 100038，China）

A high performance liquid chromatographicmethod was established for determination of Hu-210 in novel“spice”drugs.Methanol was used as the solvent to extract.The separation was performed on a Shimadzu ODS-SP column（250mm×4.6mm,5μm）,using（methanol-acetonitrile）water asmobile phase.The percentage of organic phase changed between 80%and 95%in 15m in with a linear gradient elution.Flow rate was set at 1mL·min-1,column temperature was 35℃and injection volume was 10μL.The detection wavelength of UV detectorwas set as 215nm.Good linearity was achieved over the range of 1～100μg·m L-1,with correlation coefficients> 0.9999.Limit of detection（S/N≥3.3）was 0.2ng·μL-1.Results showed that themethod was rapid,sensitive and accurate,and was applicable to quantitative determination of Hu-210 in Novel“Spice”Drugs.

liquid chromatography；synthetic cannabinoids；Hu-210

O657.72；TS102.224

A

1002-1124（2014）07-0026-03

2014-05-10

公安部重點(diǎn)研究計(jì)劃項(xiàng)目（201201ZDYJ005）

翟晚?xiàng)鳎?987-），女，碩士，主要研究方向：毒品檢驗(yàn)鑒定。