非羅氏配套肌酐試劑在羅氏Modular DP生化分析儀上的性能評(píng)價(jià)

施建豐，姚孝明，顏巍，周競(jìng)，張靜，張家明

(江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇南京210028)

非羅氏配套肌酐試劑在羅氏Modular DP生化分析儀上的性能評(píng)價(jià)

施建豐，姚孝明，顏巍，周競(jìng)，張靜，張家明

(江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇南京210028)

目的評(píng)價(jià)非配套血清肌酐檢測(cè)試劑在羅氏Modular DP全自動(dòng)生化分析儀上的分析性能。方法按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的指南文件EP-5A2，EP-6A2，EP9-A2，EP-7A2的要求，對(duì)非羅氏配套肌酐試劑在羅氏Modular DP全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行精密度、線(xiàn)性范圍、與羅氏配套肌酐試劑比對(duì)、干擾性能進(jìn)行驗(yàn)證，利用衛(wèi)生部室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果批內(nèi)精密度小于1/4允許總誤差(TEa)、總精密度小于1/3TEa；40份患者標(biāo)本比對(duì)相關(guān)系數(shù)r= 0.9992，在醫(yī)學(xué)決定水平偏倚小于1/2TEa；2013年3個(gè)批次衛(wèi)生部室間質(zhì)量評(píng)價(jià)成績(jī)均為100分，總平均偏倚小于1/2TEa；線(xiàn)性范圍、干擾性能均與廠商聲明的性能指標(biāo)相符。結(jié)論非配套血清肌酐檢測(cè)試劑在羅氏Modular DP全自動(dòng)生化分析儀上的主要分析性能能夠符合質(zhì)量目標(biāo)要求。

非配套試劑；精密度；準(zhǔn)確度；線(xiàn)性范圍；干擾；比對(duì)

為確保臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠，向臨床診斷和治療提供可靠依據(jù)，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在更換檢測(cè)系統(tǒng)或儀器(相同或不同的型號(hào))、增加新項(xiàng)目、改變檢測(cè)試劑盒的供應(yīng)商、在對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行任何變動(dòng)時(shí)，均應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室出具臨床檢驗(yàn)結(jié)果前，對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，只有符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量目標(biāo)要求和/或符合產(chǎn)品制造商聲明的性能指標(biāo)，該檢測(cè)系統(tǒng)才能應(yīng)用于臨床。ISO15189: 2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的專(zhuān)用要求》中也明確要求申請(qǐng)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)設(shè)備、檢測(cè)系統(tǒng)或方法的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)其能夠達(dá)到臨床檢測(cè)所要求的標(biāo)準(zhǔn)。本文依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)指南等文件的要求對(duì)世諾公司血清肌酐檢測(cè)試劑在羅氏Modular DP全自動(dòng)生化分析儀上的精密度、準(zhǔn)確度、線(xiàn)性范圍、與羅氏配套肌酐試劑比對(duì)、干擾性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器羅氏Modular DP全自動(dòng)生化分析儀

1.1.2 試劑肌酐試劑(酶法)：CRE-R1(羅氏公司試劑，批號(hào)：64481701)；CRE-R2(羅氏公司試劑，批號(hào)：64657301)；CRE-S(世諾公司試劑，批號(hào)：K132)。

1.1.3 校準(zhǔn)品羅氏C.fas(批號(hào)：15869001)，肌酐標(biāo)準(zhǔn)液(世諾公司，批號(hào)：A110)。

1.1.4 質(zhì)控品朗道709UN和498UE。

1.1.5 線(xiàn)性物質(zhì)高值肌酐水溶液(世諾公司提供)。

1.1.6 干擾物質(zhì)抗壞血酸、游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、血紅蛋白、乳糜微粒、肌酸(世諾公司提供)。

1.1.7 標(biāo)本收集日常工作中40份病人混合血清，用于干擾試驗(yàn)；另收集40份病人血清，要求濃度范圍覆蓋線(xiàn)性范圍備用。

1.2 方法

1.2.1 精密度驗(yàn)證參考CLSIEP5-A2[1]文件，選擇朗道709UN和498UE兩個(gè)水平的質(zhì)控品，連續(xù)檢測(cè)20天，每天的室內(nèi)質(zhì)控均在控狀態(tài)下進(jìn)行批內(nèi)精密度、總精密度的評(píng)價(jià)。

1.2.1.1 批內(nèi)精密度選用709UN和498UE兩個(gè)濃度質(zhì)控品，兩個(gè)濃度質(zhì)控品各重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算SD(標(biāo)準(zhǔn)差)、CV(變異系數(shù))值。

1.2.1.2 總精密度選用709UN和498UE兩個(gè)濃度質(zhì)控品，每天分別檢測(cè)2批，批間間隔時(shí)間不小于2h，每批做雙份測(cè)定，連續(xù)測(cè)試20d，計(jì)算SD(標(biāo)準(zhǔn)差)、CV(變異系數(shù))值。

1.2.1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)批內(nèi)精密度小于1/4TEa、總精密度小于1/3 TEa，肌酐允許總誤差12%[2]。

1.2.2 線(xiàn)性范圍驗(yàn)證參考CLSI EP6-A2[3，4]文件，選取高值肌酐溶液(H)和低值血清(L)各一份，按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L方式配制成6個(gè)濃度肌酐樣品，每個(gè)濃度樣品重復(fù)檢測(cè)2次，取均值，按CLSI EP6A2方案進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析。本實(shí)驗(yàn)室規(guī)定精密度和非線(xiàn)性允許誤差限分別為4%和4%。

1.2.3 干擾試驗(yàn)

1.2.3.1 干擾試驗(yàn)方法參考CLSI EP7-A2文件，采用添加干擾物法[5]，通過(guò)比較添加干擾物的實(shí)驗(yàn)樣本和無(wú)添加干擾物的實(shí)驗(yàn)樣本，評(píng)價(jià)干擾物對(duì)檢測(cè)的影響程度。

收集混合血清3ml，該血清肌酐濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平，將混合血清各取1.35ml加入2ml樣品杯中，記號(hào)筆標(biāo)記兩樣品杯分別為A，B；A樣品杯中加入0.15ml生理鹽水配制成無(wú)添加干擾物原液A，B樣品杯中加入0.15ml高濃度干擾物配制成添加干擾物原液B；干擾物濃度梯度按照表1配制；各干擾樣本雙份檢測(cè)，結(jié)果取均值。以樣本1(無(wú)添加干擾物)濃度為100%，其他樣本濃度與樣本1進(jìn)行比較，分析隨添加干擾物濃度逐漸增加檢測(cè)受影響情況。見(jiàn)表1。

表1 干擾物梯度濃度配制表(μl)

1.2.3.2 結(jié)果判斷抗壞血酸濃度2g/L、游離膽紅素濃度200mg/L、結(jié)合膽紅素濃度200mg/L、血紅蛋白濃度5g/L、乳糜濁度3000、肌酸濃度300mg/L時(shí)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響小于5%。

1.2.4 比對(duì)試驗(yàn)

1.2.4.1 比對(duì)試驗(yàn)方法按EP9 A2[6，7]文件中肌酐項(xiàng)目濃度分布范圍要求，選取40份各濃度范圍分布的病人血清。實(shí)驗(yàn)分5d進(jìn)行，每天測(cè)試8份血清，每份血清雙份檢測(cè)，按照樣品順序號(hào)1→8，8→1順序檢測(cè)。結(jié)果輸入Excel計(jì)算表格，X軸為參比系統(tǒng)(羅氏原裝系統(tǒng))結(jié)果，Y軸為待評(píng)系統(tǒng)(世諾試劑羅氏儀器檢測(cè)系統(tǒng))結(jié)果，對(duì)結(jié)果進(jìn)行線(xiàn)性回歸統(tǒng)計(jì)，得到相關(guān)系數(shù)r，要求r大于0.975，認(rèn)為樣本濃度范圍合適，得到線(xiàn)性回歸方程Y=bX+a，其中b、a分別表示兩種方法間的比例誤差和恒定誤差。根據(jù)臨床使用要求，可在各個(gè)臨床決定水平濃度Xc處，了解Y方法引入后相對(duì)于X方法的系統(tǒng)誤差SE，SE=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a|。

1.2.4.2 判斷標(biāo)準(zhǔn)由方法學(xué)比對(duì)評(píng)估的系統(tǒng)誤差SE或相對(duì)偏差≤1/2TEa，認(rèn)為兩個(gè)系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差屬臨床可接受水平。

1.2.5 準(zhǔn)確度

1.2.5.1 方法采用簡(jiǎn)易評(píng)價(jià)方案[8]，利用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的結(jié)果評(píng)價(jià)檢測(cè)準(zhǔn)確度。平均偏倚為每份樣品偏倚絕對(duì)值取均值。

1.2.5.2 判斷標(biāo)準(zhǔn)必須為成功的EQA，且平均偏倚≤1/2TEa。

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗(yàn)批內(nèi)精密度小于1/4 TEa、總精密度均小于1/3TEa，符合質(zhì)量要求。見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.2 線(xiàn)性范圍試驗(yàn)

2.2.1 離群值檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果SD為2.85μmol/L，CVD為0.28%，小于4%允許限，數(shù)據(jù)可用于線(xiàn)性評(píng)價(jià)。

2.2.2 多項(xiàng)式回歸分析結(jié)果二次的非線(xiàn)性系數(shù)b2為0.27，小于非線(xiàn)性系數(shù)判斷限2.262；三次方程的非線(xiàn)性系數(shù)b2為1.140、b3為-0.080，小于非線(xiàn)性系數(shù)判斷限2.306，都不是顯著的，曲線(xiàn)是線(xiàn)性的。

2.3 干擾試驗(yàn)抗壞血酸濃度2g/L、游離膽紅素濃度200mg/L、結(jié)合膽紅素濃度200mg/L、血紅蛋白濃度5g/L、乳糜濁度3000、肌酸濃度300mg/L時(shí)對(duì)肌酐檢測(cè)的結(jié)果有干擾，干擾造成的|偏倚|均≤5%，可接受。見(jiàn)表3。

2.4 比對(duì)試驗(yàn)經(jīng)回歸分析，兩組結(jié)果相關(guān)系數(shù)r= 0.9992，大于0.975，回歸方程y=0.9979x+0.2984，符合要求；在2個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平檢測(cè)結(jié)果的誤差也在可接受范圍。見(jiàn)表4。

2.5 準(zhǔn)確度驗(yàn)證2013年本實(shí)驗(yàn)室肌酐項(xiàng)目3個(gè)批次衛(wèi)生部室間質(zhì)量評(píng)價(jià)成績(jī)均為100分，為成功的EQA。全年的平均偏倚為2.60%，≤1/2 TEa，符合質(zhì)量目標(biāo)要求。見(jiàn)表5。

3 討論

精密度是指重復(fù)檢驗(yàn)結(jié)果間的一致性，通過(guò)批內(nèi)、批間和總精密度反映檢測(cè)系統(tǒng)的重復(fù)性性能。精密度是檢測(cè)系統(tǒng)的首要性能指標(biāo)，是進(jìn)行其他方法學(xué)驗(yàn)證的前提。EP5-A2是臨床化學(xué)設(shè)備和檢測(cè)系統(tǒng)精密度評(píng)價(jià)方案，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明非配套試劑在MODULAR DP模塊上的精密度能達(dá)到質(zhì)量目標(biāo)的要求。在確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)的精密度符合要求的基礎(chǔ)上，我們還依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的指南文件對(duì)非配套肌酐試劑的線(xiàn)性范圍，與羅氏配套試劑比對(duì)，干擾試驗(yàn)等基礎(chǔ)性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)，采用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果評(píng)估了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度，建立了適合本實(shí)驗(yàn)室評(píng)估開(kāi)放試劑應(yīng)用于MODULAR DP模塊的系統(tǒng)的性能評(píng)價(jià)方法。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高質(zhì)量的非配套試劑在精密度是能夠到達(dá)質(zhì)量目標(biāo)的，線(xiàn)性范圍、抗干擾性能也能符合制造商的聲明，通過(guò)比對(duì)實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)量值的溯源性傳遞，是能夠?qū)崿F(xiàn)結(jié)果準(zhǔn)確這個(gè)最終目標(biāo)的。本方法的建立既為我們選擇適合本檢測(cè)系統(tǒng)、能夠滿(mǎn)足質(zhì)量要求的開(kāi)放試劑提供了實(shí)驗(yàn)根據(jù)，也符合我國(guó)目前的現(xiàn)狀，有利于節(jié)約實(shí)驗(yàn)室資源。

表3 干擾試驗(yàn)結(jié)果

表4 醫(yī)學(xué)決定水平誤差分析結(jié)果

表5 2013年肌酐項(xiàng)目衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)結(jié)果

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of Precision Performance of Quantitative MeasurementMethods;Approved Guideline-Second Edition[S].EP5-A2,CLSI,2004.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/ T403-2012-臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量目標(biāo)[S].北京:衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)業(yè)委員會(huì),2012.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures;Approved Guideline-Second Edition[S].EP6-A2,CLSI,2003.

[4]呂賽平,鄒學(xué)森.定量檢測(cè)系統(tǒng)線(xiàn)性評(píng)價(jià)方法—EP6-A法[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,27(3):303-304.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition[S].EP7-A2, CLSI,2005.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;approved guidelinesecond edition[S].EP9-A2,CLSI,2002.

[7]陳先榮,李智,劉一平.NCCLSEP9-A文件在全自動(dòng)生化分析儀評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(4):407-408.

[8]許斌.醫(yī)院檢驗(yàn)科建設(shè)管理規(guī)范[M].第2版.南京:東南大學(xué)出版社,2013:232-233.

R446.11+2

A

1674-1129(2014)05-0549-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.022

2014-07-10；

2014-08-05)