酶法乳糜定性試驗的快速檢測與臨床應(yīng)用

朱學(xué)濤

(連云港市第一人民醫(yī)院檢驗科，江蘇連云港222002)

酶法乳糜定性試驗的快速檢測與臨床應(yīng)用

朱學(xué)濤

(連云港市第一人民醫(yī)院檢驗科，江蘇連云港222002)

目的用酶法實現(xiàn)乳糜定性試驗的快速檢測和臨床應(yīng)用。方法以尿液、胸腔積液及腹腔積液作為標(biāo)本，用臨床生化酶法測三酰甘油，和樣品在濾紙片上化學(xué)反應(yīng)，并與陰性空白進行對照比較判別結(jié)果。同時用傳統(tǒng)的乙醚抽提后經(jīng)蘇丹Ⅲ染色法進行乳糜定性試驗。結(jié)果乳糜試驗陽性標(biāo)本在白色濾紙片上呈現(xiàn)出紅色，與陰性空白比較判斷對比結(jié)果。32例胸腔積液及22例腹腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗陰陽性結(jié)果完全一致；624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果選用Kappa一致度系數(shù)κ評價，κ=0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果間具有很高的一致性。結(jié)論酶法乳糜定性試驗與傳統(tǒng)的乙醚抽提后經(jīng)蘇丹Ⅲ染色法進行乳糜定性試驗結(jié)果間具有很高的一致性，并且具有快速簡便、特異性強等優(yōu)點，適用于臨床上的尿液、胸腔積液及腹腔積液等樣本的檢測，便于在社區(qū)基層醫(yī)院和診所開展應(yīng)用。

酶法；乳糜定性試驗；乙醚；三酰甘油

乳糜液是經(jīng)腸道吸收的脂肪皂化后形成，是乳糜微粒與蛋白質(zhì)混合而成的乳化狀態(tài)的渾濁液體，臨床上由于各種原因致淋巴引流不暢而未能進入血液循環(huán)，以至逆流至泌尿系淋巴管中時，可致淋巴管內(nèi)壓力升高，曲張破裂，乳糜液流入尿中使尿液形成不同程度的乳白色。另外我國的肝硬化發(fā)病率較高，臨床上由于肝硬化合并的腹水多為單純漏出液，乳糜腹水僅占0.5%～1.3%[1]，如何快速準(zhǔn)確地從大量的樣本中檢測出乳糜陽性的樣本，這就成為一個很現(xiàn)實的問題。淋巴管核素顯像用于乳糜性胸腹水、乳糜性尿液定性診斷的價值雖然很大，但成本高，副作用大是其弊端。傳統(tǒng)的乙醚抽提后經(jīng)蘇丹Ⅲ染色法進行乳糜定性試驗過程乙醚易污染環(huán)境，整個試驗操作繁瑣，樣本從送檢到回報結(jié)果往往需要較長時間。為了滿足臨床的需要，使乳糜定性試驗操作更簡便，結(jié)果更準(zhǔn)確，作者根據(jù)現(xiàn)在臨床生化酶法測三酰甘油(TG)特異性強，樣本用量少，試劑易得等優(yōu)點，建立了酶法乳糜尿定性試驗的快速檢測的方法，在臨床上取得了滿意效果。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集3年來本院住院及門診的新鮮標(biāo)本678例，包括尿液624例，胸腔積液32例，腹腔積液22例。

1.2 實驗材料TG檢測試劑盒(酶法)為寧波美康生物科技有限公司提供。濾紙片可用裁剪普通濾紙在玻片上使用。

1.3 方法TG測定參考中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會建議的常規(guī)方法[2]及TG測定的標(biāo)準(zhǔn)化程序進行檢測[3]，檢測過程中所用濾紙和玻片應(yīng)防止甘油或氧化還原物質(zhì)的污染，不能有油污。恒溫水浴箱溫度控制在37℃，10min后從水浴箱內(nèi)取出觀察結(jié)果,1h后不可進行結(jié)果的判讀。TG檢測試劑盒在有效期內(nèi)使用，注意及時更換。具體操作：首先將兩片濾紙片分開放在清潔干燥的玻片上，滴加3～5滴(150～250μl)三酰甘油試劑R1于濾紙片上，之后滴加兩滴(100μl)尿液，30s后滴加三酰甘油R2兩滴(100μl)，同時使用蒸餾水做陰性空白對照，37℃水浴箱內(nèi)取出10min后觀察結(jié)果，觀察濾紙片是否變?yōu)榧t色，紅色為陽性。傳統(tǒng)的乙醚抽提乳糜尿定性試驗按照全國臨床檢驗操作規(guī)程操作[4]，取待測樣本5～10ml，加乙醚2～3ml，充分混合振搖后，使脂肪溶于乙醚，靜置數(shù)分鐘后，2000r/min離心5min，吸取乙醚與尿液交界層涂片，加蘇丹Ⅲ溶液染色，鏡檢觀察是否有橘紅色脂肪球。結(jié)果報告“陰性”或“陽性”。

2 結(jié)果

32例胸腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗6例均為陽性，26例均為陰性；22例腹腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗2例均為陽性，20例均為陰性；尿液624例，酶法乳糜定性試驗122例陽性，乙醚抽提染色乳糜定性試驗120例陽性，結(jié)果詳見表1。624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果選用Kappa一致度系數(shù)κ評價，κ=0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果間具有很高的一致性。

表1 624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果

3 討論

傳統(tǒng)的乳糜定性試驗操作繁瑣，脂肪抽提不易控制，特別是在測定脂肪含量較低的樣本時，若抽提不徹底，蘇丹Ⅲ染色后鏡檢很容易導(dǎo)致假陰性；而檢測過程中所用容器受到其他油類污染時，可導(dǎo)致假陽性。32例胸腔積液及22例腹腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗陰陽性結(jié)果完全一致；624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果選用Kappa一致度系數(shù)κ評價，κ= 0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結(jié)果間具有很高的一致性。624例尿液樣本酶法乳糜定性試驗122例陽性，乙醚抽提染色乳糜定性試驗120例陽性，其中的2例主要由于輸液等原因造成尿液稀釋使尿液中脂肪含量降低，導(dǎo)致未能檢測出。酶法檢測TG特異性強，靈敏度高，對TG以外的其他油類雜質(zhì)不發(fā)生反應(yīng)，試劑易得，所用濾紙應(yīng)防止甘油或氧化還原物質(zhì)的污染，水浴箱內(nèi)取出后應(yīng)立即觀察結(jié)果，生成的紅色醌亞胺類化合物在數(shù)小時后才可被還原。酶法乳糜定性試驗的快速檢測方法解決了在生化反應(yīng)試管中觀察不明顯，并且使用試劑量大等問題，陽性樣本在白色濾紙片上呈現(xiàn)生成的紅色醌亞胺類化合物，色差明顯，結(jié)果易于判別。

由于醫(yī)學(xué)模式和人們對健康理念的改變，自我保護意識的增強，人們對醫(yī)療、保健意識的了解及關(guān)心程度不斷提高，需要經(jīng)常了解身體及疾病進展情況，這些需求促使臨床檢驗儀器、試劑向攜帶便捷，操作方便，結(jié)果即時的方向發(fā)展，實驗技術(shù)向小型化、簡單化、“床邊”化發(fā)展[5]。POCT在臨床上的大量應(yīng)用，是當(dāng)今醫(yī)院在病人護理和成本管理方面的一種富有成效的方法，在各臨床科室和中心實驗室得到廣泛的應(yīng)用[6]。該方法為乳糜定性快速檢測提供一種手段，還為床旁檢驗(POCT)的發(fā)展提供參考，被測成分直接與載體上的試劑進行呈色反應(yīng)，實現(xiàn)即時即地檢驗，甚至自我檢驗。

文獻報道制備不同乳糜指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)管快速進行血漿乳糜程度的判定[7]。定量檢測腹水只有TG＞1.25mmol/L時才能診斷為乳糜性腹水[8]。那么酶法乳糜定性試驗的快速檢測，可以根據(jù)濾紙片顏色的深淺判斷TG的含量，TG含量又能反映乳糜微粒的多少，從而粗略判定疾病損傷程度。根據(jù)酶法檢測不同的濃度TG呈現(xiàn)顏色深淺不同，制作成顏色深淺不一的色卡對照標(biāo)準(zhǔn)條，并在顏色深淺不一的色卡標(biāo)注TG的濃度，這樣就可以實現(xiàn)乳糜試驗的定量，尚有待進一步研究。

酶法乳糜定性試驗檢測方法快速簡便，高效率低成本，特異性強，試劑易得，樣本用量少等優(yōu)點，適用于臨床上的尿液、胸腔積液及腹腔積液等樣本的檢測，便于在社區(qū)基層醫(yī)院和診所開展應(yīng)用。

[1]王海濱,葉玲英,陳岳祥,等.肝硬化乳糜性腹水治療[J].中華消化雜志,2008,28(2):431-432.

[2]鄢盛愷.關(guān)于臨床血脂測定的建議[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2003,26 (3):182-184.

[3]鄢盛愷.應(yīng)更加關(guān)注三酰甘油的臨床檢測與應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,26(3):1-4.

[4]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006：286.

[5]叢玉隆,朱士俊.檢驗醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)與學(xué)科建設(shè)和管理[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2002,25(2):116-118.

[6]萬本愿,姜青龍.POCT的臨床應(yīng)用及存在問題[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(4):387-390.

[7]詹泰然,周淑琴.血液成分制備時血漿乳糜程度判定[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2008,26(1):67.

[8]徐凱峰,胡曉文,田欣倫,等.乳糜性胸腔積液123例臨床分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2011,91(7):466-468.

R446.12+2,R446.19

A

1674-1129(2014)05-0538-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.017

2014-06-17；

2014-07-14)

朱學(xué)濤，男，1976年生，本科學(xué)歷，主管檢驗師，學(xué)士學(xué)位，主要從事臨床檢驗，研究方向為血液體液學(xué)實驗診斷。