電針對慢性情緒應激焦慮大鼠中樞兒茶酚胺類神經(jīng)遞質的調節(jié)作用研究?

魏大能，周奇志，蔡定均，趙紀嵐，王 薇，徐海洋

(成都中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，成都 610075)

焦慮障礙又稱焦慮性神經(jīng)癥，是一種以焦慮情緒為主的神經(jīng)癥，主要表現(xiàn)為發(fā)作性或持續(xù)性的焦慮、緊張、驚恐不安等焦慮情緒，并伴有自主神經(jīng)紊亂、肌肉緊張與運動不安等癥狀[1]。有調查研究顯示，隨著社會生活節(jié)奏加快、工作學習壓力增大以及人際交流的減少，各種精神疾患的發(fā)病人數(shù)迅速增加，其中以抑郁癥、焦慮障礙的發(fā)生為多，且焦慮障礙發(fā)病率僅次于抑郁癥[2]，故抗焦慮研究已成為當前醫(yī)學界的重要研究課題。雖然臨床實踐早已表明電針在焦慮障礙的治療中具有療效確切、毒副作用小等優(yōu)勢[3，4]，但其中樞效應機制尚不完全明了。本研究通過觀察電針對CES焦慮模型大鼠下丘腦和杏仁核區(qū)兒茶酚胺類神經(jīng)遞質去甲腎上腺素(NE)和多巴胺(DA)水平的影響，進一步探討電針抗焦慮效應的中樞效應機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 普通級SD 7周齡健康雄性大鼠，體質量(200±20)g，動物及飼料均由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供(合格證號0005328)。飼養(yǎng)溫度(23±2)℃，濕度70%～80%，動物自由進食、飲水。正式實驗前適應性馴養(yǎng)7 d。

1.1.2 試劑 去甲腎上腺素(批號103k0979)、多巴胺(批號033k1192)，美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.1.3 儀器 PM-200十字迷宮視頻跟蹤系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，RF-5103C型熒光分光光度儀(日本島津公司)，G6805-II型電針儀(青島鑫升實業(yè)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 動物篩選及分組 動物篩選標準參照文獻[5]，將符合納入標準的35只大鼠用SPSS11.5統(tǒng)計軟件按完全隨機分組原則分為3組，即空白組(11只)、模型組(12只)和電針組(12只)。

1.2.2 造模方法 采用不可預知的慢性情緒應激法復制焦慮模型[6]。除空白組外，模型組和電針組動物自第8天起開始接受連續(xù)21 d不可預知性應激刺激，包括足底電擊、禁水1 h、禁食1 h、24 h光照、24 h黑暗、合籠、單籠、傾斜、混籠(從兩籠各抓1～2只)等9種應激刺激，應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件將上述9種刺激方法隨機分配到21 d中，每天進行1種應激刺激。

1.2.3 針刺方法 在造模的同時，電針組大鼠于每天下午15∶00進行固定和電針治療，穴位定位參照《實驗針灸學》[7]的動物穴位圖譜。選穴為“百會”、“三陰交”，針刺后連接至G6805-II型電針儀，疏密波，頻率為15～25 Hz，刺激強度以針刺側下肢輕微抖動為度。單日取左側，雙日取右側，每日1次，每次15 min，連續(xù)治療21 d?？瞻捉M和模型組進行與電針組相同的固定，但不給予電針治療。

1.2.4 行為學、兒茶酚胺類神經(jīng)遞質檢測 各組大鼠于實驗結束后的第2天進行高架十字迷宮探究實驗[8]，測試完畢立即斷頭處死并取腦，冰上迅速分離下丘腦和杏仁核組織液氮中保存，運用熒光分光光度法[9]分別檢測下丘腦及杏仁核中NE和DA含量。

2 結果

2.1 電針對CES焦慮模型大鼠行為學影響

表1 電針對CES焦慮模型大鼠高架十字迷宮探究行為的影響

注：與空白組比較：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：▲P<0.05，▲▲P<0.01

表1顯示，與空白組比較，模型組OT%值、OE%值均顯著下降(P<0.05)，模型動物表現(xiàn)出明顯的焦慮狀態(tài)，說明本實驗CES焦慮模型復制成功；電針組OT%值、OE%值與模型組比較均顯著升高(P<0.05)，而與空白組比較差異無統(tǒng)計學意義，提示電針具有抗焦慮作用。

2.2 電針對CES焦慮模型大鼠中樞兒茶酚胺類神經(jīng)遞質含量的影響

表2 電針對CES焦慮模型大鼠下丘腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質含量的影響

注：與空白組比較：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：▲P<0.05，▲▲P<0.01

表2顯示，與空白組比較，模型組大鼠下丘腦與杏仁核中NE和DA的含量均明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；而與模型組比較，電針組大鼠上述腦區(qū)中NE和DA的含量明顯降低，除下丘腦DA外，2組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示電針可調節(jié)CES焦慮模型大鼠下丘腦和杏仁核兒茶酚胺類神經(jīng)遞質NA和DA的含量，使其達到或接近正常水平。

3 討論

焦慮障礙已成為現(xiàn)代社會常見的精神類疾患之一，不僅影響患者的工作學習效率，而且會引發(fā)酗酒和抑郁癥，甚至會引發(fā)高血壓、腫瘤等身心疾病[10，11]。有研究發(fā)現(xiàn)，社會應激與焦慮障礙的發(fā)生密切相關，當應激持續(xù)時間或強度超過機體自身調節(jié)范圍時，就會引起神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫等多個系統(tǒng)的功能紊亂，從而引發(fā)焦慮[12]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，焦慮障礙的發(fā)生與神經(jīng)遞質(如單胺神經(jīng)遞質、GABA等)、神經(jīng)肽(CRF、NPY等)以及相關受體及其基因表達的異常等有關[13～15]。其中，中樞GABA、5-HT、NE和DA等神經(jīng)遞質紊亂是焦慮障礙的重要發(fā)病機制之一[16，17]，而在重要的情緒反應中樞杏仁核和下丘腦中，NE、DA在針刺抗焦慮效應中的作用尚不完全明確。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，去甲腎上腺能和多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)與焦慮的發(fā)生密切相關。其中，腦組織中50%以上的去甲腎上腺素能神經(jīng)元分布在藍斑，其纖維廣泛投射到大腦皮質、海馬、杏仁核、背側丘腦及下丘腦等。在正常情況下，該系統(tǒng)能讓人保持一定的警覺水平，如果該系統(tǒng)過度興奮則可出現(xiàn)明顯的恐懼和焦慮反應。動物研究發(fā)現(xiàn)，應激因子能促使藍斑的沖動發(fā)放增加，使去甲腎上腺素能神經(jīng)系統(tǒng)支配的腦區(qū)NE釋放增加、代謝加快，動物表現(xiàn)出恐懼行為[18，19]。此外，中樞多巴胺系統(tǒng)在精神情緒活動中也占有重要地位，尤其在精神、心理應激方面。多巴胺能神經(jīng)元主要起源于中腦腹側被蓋區(qū)，其纖維投射到前額葉皮質、顳葉及邊緣系統(tǒng)等腦區(qū)，其釋放的DA使腦組織保持一定的興奮性和警覺性。當

DA 系統(tǒng)占優(yōu)勢時，可出現(xiàn)活動增加、注意力不集中，甚至產(chǎn)生幻想、狂躁及精神分裂等神經(jīng)精神癥狀[20]。

邊緣系統(tǒng)是重要的情緒活動中樞之一，下丘腦和杏仁核作為邊緣系統(tǒng)的重要部分，通過聯(lián)絡纖維與邊緣系統(tǒng)的其他結構密切聯(lián)系，在精神情緒活動中發(fā)揮著重要作用，同時下丘腦還是神經(jīng)內(nèi)分泌的中心，在調節(jié)機體的內(nèi)分泌活動中發(fā)揮著重要作用。有研究表明，邊緣系統(tǒng)單胺類神遞質的異常升高可引起焦慮情緒的產(chǎn)生[19，20]。本實驗研究結果顯示，與空白組比較，模型組大鼠下丘腦和杏仁核NE和DA的含量明顯升高，這與文獻結果一致[19，20]。而研究還觀察到，電針可以降低這2種神經(jīng)遞質在下丘腦和杏仁核的含量。由此可見，下丘腦和杏仁核兒茶酚胺類神經(jīng)遞質的異常在焦慮障礙的發(fā)生中有重要作用，而電針可以調節(jié)下丘腦和杏仁核區(qū)兒茶酚胺類神經(jīng)遞質的含量，使其恢復到正常水平，從而產(chǎn)生抗焦慮的作用。這可能是電針抗焦慮的中樞作用機制之一。

此外，該項研究運用自主研制并已取得專利的大鼠固定器[21]固定動物，該固定器與大鼠的體積相匹配，大鼠受力均衡適度、安全。然而，任何一種固定方式在第1、2次固定動物時，動物都會因新異刺激而出現(xiàn)一些應激反應(如進固定筒和固定時有抵抗反應等)，但隨著實驗時間的延長(本實驗時間總共21 d)，動物會適應順從，后期的應激反應已減至最低；另外每天固定大鼠的時間僅15 min，固定時間短暫；且本實驗還采用對照組和模型組同時固定的方式，以進一步抵消由于應激所致的影響，故此種方法可突出針刺的治療效應。

綜上，本研究探討了電針抗焦慮效應的中樞兒茶酚胺類神經(jīng)遞質的作用機制，為針刺抗焦慮效應的機制研究奠定了良好的基礎，亦為針刺抗焦慮的臨床運用提供了有力的佐證。

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