血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-2及微血管密度在大腸癌組織中的表達(dá)及意義

李 欣 羅愛華

(湖北省宜昌市第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，宜昌市 443000)

大腸癌是常見于臨床的惡性腫瘤[1]，其生長和轉(zhuǎn)移均需要生成新的血管，以供腫瘤循環(huán)。新血管生成依賴促血管生成因子和抑血管生成因子的調(diào)節(jié)。VEGFR-2是促血管生成因子的重要功能受體，具有介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子、增加血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管通透性的作用[12]。MVD能夠反映腫瘤組織中血管的生成狀況，是重要參數(shù)之一[3]。VEGFR-2和MVD與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4，5]。我院于2010年1月至2013年1月對36例大腸癌患者取癌變組織和癌旁正常組織檢測VEGFR-2和MVD的表達(dá)，分析二者與大腸癌生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇我院收治的大腸癌患者36例，所有患者均符合大腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)病理診斷證實(shí)。其中男24例，女12例，年齡37～86歲，平均(51.7±5.8)歲，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。腫瘤部位：直腸18例，乙狀結(jié)腸10例，降結(jié)腸4例，升結(jié)腸3例，橫結(jié)腸1例。組織學(xué)分化：低分化12例(33.3%)，中分化10例(27.8%)，高分化14例(38.9%)。腫瘤直徑：大于5 cm者14例(38.9%)，小于5 cm者22例(61.1%)。TNM分期：Ⅰ期5例(13.9%)，Ⅱ期13例(36.1%)，Ⅲ期10例(27.8%)，Ⅳ期8例(22.2%)。

1.2 方法 取患者大腸癌組織作為觀察組，同一患者癌旁正常組織作為對照組。所有組織標(biāo)本均采用10%福爾馬林固定，并用石蠟包埋，制作若干切片，采用免疫組化S-P法(試劑盒源自美國Santa公司)染色。每例標(biāo)本選取4張切片，采用免疫組化IHC(來源同上)染色。加一抗：抗VEGFR-2抗體(源自北京博奧森生物技術(shù)公司)和抗CD34抗體(來源同上)，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.3 觀察內(nèi)容 根據(jù)Saito綜合計(jì)分法計(jì)算VEGFR-2 表達(dá)[7]：陰性：0～1分；陽性：≥2分。計(jì)算陽性率。MVD計(jì)數(shù)方法[8]：先在低倍鏡下(×100)觀察確定數(shù)目最高區(qū)，再在高倍鏡下(×200)計(jì)數(shù)5個(gè)視野內(nèi)微血管數(shù)目，其平均值為該切片MVD值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGFR-2表達(dá)和MVD計(jì)數(shù) VEGFR-2在癌變組織中的陽性表達(dá)率58.3%(21/36)，顯著高于正常組織 22.2%(8/36)，MVD在癌變組織中的計(jì)數(shù)(28.6±9.4)個(gè)/HP，顯著高于正常組織(10.5±3.9)個(gè)/HP，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 VEGFR-2表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 VEGFR-2表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系 VEGFR-2在癌變組織中的陽性表達(dá)與浸潤深度增加、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 VEGFR-2表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系 [n(%)]

組織學(xué)分化低(n=12)高(n=24)淋巴轉(zhuǎn)移有(n=17)無(n=19)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有(n=8)無(n=28)VEGFR-2陽性5(13.9)16(86.1)13(76.5#)8(23.5)8(100.0△)8(23.5)χ2值2.064.367.35P值>0.05<0.05<0.05

注：與浸潤深度少者(T1+T2+T3)比較，*P<0.05；與無淋巴轉(zhuǎn)移者比較，#P<0.05；與無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者比較，△P<0.05。

2.3 MVD計(jì)數(shù)和臨床病理特征的關(guān)系 MVD計(jì)數(shù)在癌變組織中的個(gè)數(shù)與組織學(xué)分化低、浸潤深度增加、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

表3 MVD計(jì)數(shù)和臨床病理特征的關(guān)系 [個(gè)/HP]

組織學(xué)分化低(n=12)高(n=24)淋巴轉(zhuǎn)移有(n=17)無(n=19)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有(n=8)無(n=28)MVD數(shù)目35.4±7.4*26.6±9.037.4±8.1△24.6±5.048.7±6.9▲27.3±7.7t值4.925.777.08P值<0.05<0.05<0.05

注：與組織分化高者比較，*P<0.05；與浸潤深者(T4)比較，#P<0.05；與無淋巴轉(zhuǎn)移者比較，△P<0.05；與無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者比較，▲P<0.05。

3 討 論

大腸癌是臨床常見的消化道腫瘤，隨著醫(yī)學(xué)研究的深入，對大腸癌的病理機(jī)制、癌變進(jìn)展、浸潤過程和預(yù)后已經(jīng)有了進(jìn)一步了解。腫瘤血管生成指的是腫瘤內(nèi)新生長形成的血管，包括微血管前期到毛細(xì)血管形成新血管結(jié)構(gòu)[9]。癌細(xì)胞生長到1～2 mm的球狀結(jié)構(gòu)時(shí)，需要更多營養(yǎng)物質(zhì)并排出廢物，若缺乏血供，則無法繼續(xù)生長。因此，腫瘤的新生血管可以供腫瘤營養(yǎng)和氣體交換等[10]。近年來，諸多臨床研究認(rèn)為[11]，腫瘤的新生血管是癌變進(jìn)展、浸潤漸深和腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。腫瘤通過釋放血管生成刺激因子誘導(dǎo)新生血管，如VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)和血小板內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(PDECGF)等。

無論是病理組織還是正常組織中，VEGF均是新血管生成的主要調(diào)節(jié)因子，并通過與VEGFR的結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。VEGFR的主要表達(dá)場所是血管內(nèi)皮細(xì)胞[12]。目前，VEGFR-2在大腸癌中表達(dá)的研究較少且無一致結(jié)論。但對其他系統(tǒng)腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，VEGFR-2在腫瘤組織中的陽性表達(dá)率升高，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[13]。說明轉(zhuǎn)染了VEGF的腫瘤組織生長迅速，且容易形成比正常組織更多的血管異種移植體。本研究納入36例大腸癌患者，取癌變組織和正常組織進(jìn)行VEGFR-2表達(dá)和與病理特征關(guān)系分析，結(jié)果表明，VEGFR-2在癌變組織中的陽性表達(dá)率顯著高于正常組織，說明VEGFR-2在腫瘤新血管生成中具有重要調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而在大腸癌的進(jìn)展和預(yù)后中發(fā)揮作用。浸潤深度深和淋巴轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者中，VEGFR-2的表達(dá)顯著高于浸潤深度淺和尚無轉(zhuǎn)移者，說明VEGFR-2的表達(dá)和大腸癌浸潤和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，可能是大腸癌的惡性表型。此外，有研究表明低分化大腸癌中VEGFR-2表達(dá)顯著更高[14]。但本研究發(fā)現(xiàn)，VEGFR-2的表達(dá)與組織分化程度無關(guān)，這可能是由于本研究樣本小，且納入患者高分化者居多，這需更大樣本研究進(jìn)一步證實(shí)。血管生成素-2(Ang-2)也是近年來發(fā)現(xiàn)的生成促進(jìn)因子，大腸癌組織中Ang-2高表達(dá)與VEGFR-2高表達(dá)具有相關(guān)性[15]，二者升高均與大腸癌的進(jìn)展相關(guān)。

CD34是血管內(nèi)皮細(xì)胞的最佳標(biāo)記抗原之一，通過計(jì)算MVD，分析各種血管形成刺激因子的表達(dá)，可量化血管生成。有研究認(rèn)為，CD34抗體染色的血管可能是真正的腫瘤新生血管。本研究結(jié)果表明，MVD在癌變組織中的計(jì)數(shù)顯著高于正常組織，說明腫瘤組織中的確存在更多的新血管。此外，分化程度低、浸潤深度深、淋巴轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者中，MVD計(jì)數(shù)顯著高于分化程度高、浸潤深度淺和無轉(zhuǎn)移的組織。說明MVD可以反映大腸癌的病變程度、浸潤深度和是否轉(zhuǎn)移，可作為衡量指標(biāo)之一。有研究顯示，VEGFR-2表達(dá)陽性的大腸癌組織中MVD值顯著高于VEGFR-2表達(dá)陰性者[16]。當(dāng)VEGFR-2表達(dá)增強(qiáng)時(shí)，MVD值隨之升高，說明VEGFR-2表達(dá)強(qiáng)度和MVD值正相關(guān)。本研究并未做此研究，但也可證明VEGFR-2是大腸癌微血管生成的重要因子，而MVD值的增加為大腸癌組織的生長提供了養(yǎng)分，并為大腸癌的浸潤及轉(zhuǎn)移提供了渠道。

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