保和丸質(zhì)量控制方法研究

李先佳

（河南省漯河醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校生化教研室，漯河462002）

保和丸質(zhì)量控制方法研究

李先佳

（河南省漯河醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校生化教研室，漯河462002）

目的 建立保和丸質(zhì)量控制方法。方法 薄層色譜鑒別山楂，半夏，連翹，HPLC測(cè)定連翹苷含量。結(jié)果 薄層圖譜斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾。連翹苷在0.01～0.1mg／mL范圍線性關(guān)系良好，平均加樣回收率99%，RSD為1.01%。結(jié)論 方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可用于制劑的質(zhì)量控制。

保和丸；薄層色譜；連翹苷；HPLC

保和丸是純中藥制劑，含有山楂（焦），六神曲（炒），半夏（制），茯苓，陳皮，連翹，萊菔子（炒），麥芽（炒）等，具有消食、導(dǎo)滯、和胃作用，用于食積停滯，脘腹脹滿(mǎn)，噯腐吞酸，不欲飲食［1］。為了保證產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用薄層色譜對(duì)保和丸中的山楂，半夏，連翹進(jìn)行了定性，高效液相色譜法（HPLC法）對(duì)連翹中連翹苷的含量進(jìn)行定量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（島津LC-20AT），UV-1700光度計(jì)（島津）；KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

保和丸（甘肅天水岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z62020350）；半夏對(duì)照藥材，連翹對(duì)照藥材；山楂對(duì)照藥材；鹽酸麻黃堿對(duì)照品；連翹苷對(duì)照品；熊果酸均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇、乙睛為色譜純；其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜

2.1.1 山楂 保和丸適量搗碎，秤取約4g，加乙酸乙酯50ml超聲輔助提取2h，提取2次，合并提取液，蒸干，甲醇5mL溶解得供試液。秤取熊果酸1mg，加入氯仿5ml，超聲助溶，得對(duì)照品溶液。按處方比例取除山楂的藥材，按照供試液工藝制備陰性對(duì)照溶液。毛細(xì)管各吸取2μl，點(diǎn)于硅膠板，以石油醚－丙酮（3∶1）展開(kāi)，取出晾干，噴10%硫酸無(wú)水乙醇溶液，100℃加熱。結(jié)果供試液、對(duì)照品溶液相同的位置顯示紫色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無(wú)此現(xiàn)象。

2.1.2 半夏 保和丸適量搗碎，秤取約4g，加濃氨水1ml，乙醚50ml，超聲輔助提取2h，提取2次，濾過(guò)，合并濾液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，即得供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品1mg，加甲醇5ml，超聲助溶，得對(duì)照品溶液。按處方比例取除半夏的藥材，按照供試液工藝制備陰性對(duì)照溶液。毛細(xì)管各吸取2μl，點(diǎn)于硅膠板，以三氯甲烷-甲醇-濃氨水（40∶7∶1）展開(kāi)并取出晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱。結(jié)果紫外燈365 nm下，供試品溶液、對(duì)照品溶液在相同的位置顯示黃綠色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無(wú)此現(xiàn)象。

2.1.3 連翹 保和丸適量搗碎，秤取約4g，加甲醇50ml超聲輔助提取2h，提取兩次，合并提取液，濃縮至原體積的1／6，氯仿萃取，蒸干，10ml甲醇溶解，得供試品溶液。取連翹苷對(duì)照品1mg，加甲醇5ml，超聲助溶，得對(duì)照品溶液。按處方比例取除連翹的藥材，按照供試液工藝路線制備陰性對(duì)照溶液。毛細(xì)管各吸取2μl，點(diǎn)于硅膠板，以正己烷-氯仿-甲醇（4∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)并取出晾干。噴10%硫酸乙醇液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品溶液、對(duì)照品溶液在相同的位置顯示相同的顏色，而陰性對(duì)照無(wú)此現(xiàn)象。

2.2 連翹苷含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密秤取連翹苷1mg，置于10ml的量瓶，加甲醇5ml溶解，甲醇定容，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液 保和丸適量搗碎，秤取約4g，加入70%甲醇50ml，超聲輔助提取3h，提取3次，合并提取液，濃縮并轉(zhuǎn)移至25ml的量瓶中，70%甲醇定容，即得供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 色譜柱：VP-ODS cI8柱（4.6mm×150mm）；流動(dòng)相：乙腈-甲醇（16∶55）；流速：1mL／mim；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；進(jìn)樣量：20μL；靈敏度0.5 AUFS。連翹苷理論塔板數(shù)＞10000。

圖1 色譜圖

2.2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 按處方比例取除連翹的藥材，制備陰性對(duì)照溶液。按上述色譜條件對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1。供試品與對(duì)照品溶液的色譜圖均有連翹苷吸收峰，而陰性對(duì)照無(wú)對(duì)應(yīng)的吸收峰，顯示保和丸中連翹苷的專(zhuān)屬性較好。

2.2.5 線性關(guān)系 吸取連翹苷對(duì)照品0.5，1，2，3，4，5ml于5ml量瓶中，甲醇定容，得濃度不同的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)線性回歸，得回歸方程Y＝21361x＋1762，相關(guān)系數(shù)r＝0.9998，表明連翹苷在0.01～0.1mg／mL范圍呈現(xiàn)線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液1ml于5ml的量瓶中，甲醇定容。進(jìn)樣連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)定連翹苷峰面積，結(jié)果連翹苷峰面積RSD值為0.11%，顯示儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、5、20、12、24h進(jìn)樣測(cè)定面積，結(jié)果連翹苷峰面積RSD值為0.21%，說(shuō)明連翹苷在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 秤取同一樣品5份制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定連翹苷峰面積，計(jì)算得RSD值為0.13%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率 精密秤取已知含量（0.58mg／g）的保和丸6份，每份2g，分別加入連翹苷對(duì)照品0.58、0.93、1.39mg，制備供試品溶液，按照色譜條件測(cè)定，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果連翹苷平均回收率為99.7%，RSD為1.01%。

2.2.10 樣品含量測(cè)定 取樣品3批，按照供試品溶液制備方法制備，按照色譜條件測(cè)定，計(jì)算3批樣品中連翹苷的含量平均含量為0.58mg／g。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)薄層色譜顯示，保和丸中的山楂的熊果酸，半夏中的鹽酸麻黃堿，連翹中的連翹苷，各個(gè)樣品在對(duì)照品相應(yīng)位置上均有相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品沒(méi)有干擾，展開(kāi)和分離效果較好［2］。

本文建立了高液相色譜法測(cè)定保和丸中連翹苷含量的方法，采用乙睛、甲醇等極性有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相，洗脫效果良好，成分均可得到較好的基線分離，方法特異性強(qiáng)、前處理簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，可以為保和丸質(zhì)量控制提供參考。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)，中國(guó)藥典．一部［S］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：537-538．

［2］胡旭濤．保和丸的質(zhì)量控制［J］．中醫(yī)臨床研究，2011，3（10）：44-45．

Methods to Bao he Pill Quality Control

LiXianjia
（Luohemedical college，Henanprovince，Luohe，462002，China）

Objective To establish the quality control method of Baohe Pills．Methods Thin layer of chromatography（TLC）distinguished hawthorn，pinellia，forsythia，the content of phillyrin was determined by HPLC．Results the TLC spots developed were fairly clear，negative with no disturbance，Phillyrin in 0.01～0.1mg／mL range of linear relationship was good，the average recovery was 99%，RSD 1.01%Conclusion The method is simple，reproducible，which can be used for the quality control of the preparation．

Baohe Pills；Thin layer chromatography；Forsythin；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.05.101

1672-2779（2014）-05-0160-02

楊 杰 本文校對(duì)：任麗平

2013-11-29）