AMI大鼠Ghrelin的變化及人Ghrelin對其影響

韓 峰，田國忠，李梅秀

(佳木斯大學(xué),黑龍江 佳木斯 154007)

急性心力衰竭(acute heart failure，AHF)是一種嚴(yán)重、復(fù)雜而常見的臨床綜合征，然而其發(fā)病機(jī)制尚未闡明，更缺乏有效干預(yù)措施；AMI是近年來誘發(fā)AHF的主要心血管疾病以及死因[1]，特別是其發(fā)病率呈現(xiàn)年輕化的趨勢。不僅嚴(yán)重危害人類健康，而且?guī)順O大的社會負(fù)面影響，是醫(yī)學(xué)界亟待攻克的難題[1]。 生長激素釋放肽(growth hormone -releasing peptides，GHRPs)是70年代合成的一族可以強(qiáng)烈刺激生長激素(growth hormone，GH)釋放的寡肽，同時，又通過其廣泛分布的G-蛋白偶聯(lián)受體發(fā)揮獨(dú)立于生長素軸以外的多種生物活性，特別是其心血管保護(hù)效應(yīng)倍受心力衰竭(heart failure, HF)生物學(xué)治療時代的廣泛關(guān)注，與合成的非肽類及人與哺乳動物體內(nèi)具有的內(nèi)源性28個氨基酸的同類物質(zhì)被合稱為生長激素促分泌素(GHSs)，而天然Ghrelin正是GHSR的內(nèi)源性配基[2，3]。本實(shí)驗(yàn)通過研究導(dǎo)致AHF的AMI模型大鼠循環(huán)水平Ghrelin的變化及人Ghrelin對其影響，為揭示GHSR介導(dǎo)的心血管保護(hù)效應(yīng)增添新資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組

足3月齡清潔健康成年Wistar 雄性大鼠，60只，體重(300±50)g，購于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心 (許可證號：黑動字第80050-9)。實(shí)驗(yàn)共分成5組：首先隨機(jī)抽取6只作為正常對照組、7只用于假手術(shù)組、其余均用于AMI模型組制作，合格模型再分成AMI模型組、AMI模型+Ghrelin組及AMI模型+[D-Lys3]-GHRP-6(GHSR阻滯劑)組，每組保證6～8只大鼠。

1.2 主要試劑及藥品

人Ghrelin購于PROSPEC -TANY生物技術(shù)有限公司(以色列)，GHSR阻滯劑D-Lys3-GHRP-6購于TOCRIS公司(美國)，大鼠Ghrelin ELISA 試劑盒購于上海朗頓生物科技有限公司，其余藥品均為國產(chǎn)分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用結(jié)扎大鼠冠狀動脈前降支方法制作AMI模型[4]，術(shù)前、術(shù)后以多道生理儀系統(tǒng)直接觀測心電、超聲復(fù)核AMI模型制作結(jié)果及AHF病程進(jìn)展。AMI模型+人Ghrelin組及AMI模型+[D-Lys3]-GHRP-6組于術(shù)后15min內(nèi)分別經(jīng)大鼠尾靜脈一次注射人Ghrelin 25μg/kg或[D-Lys3]-GHRP-6 65μg/kg；其余各組都給予等體積生理鹽水尾靜脈注射。術(shù)后24h取大鼠內(nèi)眥靜脈血離心后，用ELISA方法檢測大鼠血漿Ghrelin水平。使用大鼠Ghrelin ELISA試劑盒，嚴(yán)格按照說明書操作，酶標(biāo)儀Gene5系統(tǒng)測得各組分吸光度OD值，計(jì)算所測各組大鼠血漿中Ghrelin含量水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

ELISA檢測大鼠血液組織Ghrelin水平結(jié)果，見表1。與正常組大鼠比較，其余4組大鼠血漿的Ghrelin水平均升高，但假手術(shù)組與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；以GHSR阻滯劑組最高(P<0.01)，人Ghrelin干預(yù)組比模型組低(P<0.05)。

表1 各組大鼠血漿所含Ghrelin ELISA檢測OD值及含量水平

*與正常對照組比較P<0.01；**與模型組比較P<0.05。

3 討論

隨著社會經(jīng)濟(jì)生活的節(jié)奏日益加快，AHF發(fā)病率呈現(xiàn)急轉(zhuǎn)之上的趨勢，而AMI這一重要病因使得AHF的有效治療措施明顯匱乏，AMI乃至AHF這兩個因果病理過程的發(fā)生發(fā)展機(jī)制亦有待于進(jìn)一步明確。因此，近年來醫(yī)學(xué)工作者正將AHF生物學(xué)治療納入攻關(guān)課題的中心，在這種形勢下，具有心血管保護(hù)效應(yīng)的GHRPs成為新的遴選藥物Ghrelin的發(fā)現(xiàn)[3，5]使GHRPs發(fā)揮HF治療作用更加具有可行性，外源性的GHRPs與內(nèi)源性天然Ghrelin在AMI、AHF病理進(jìn)程中的變化規(guī)律有待追蹤。本研究結(jié)果顯示，AMI術(shù)后24h大鼠Ghrelin明顯升高，不能用其心臟保護(hù)效應(yīng)解釋，是源于應(yīng)激性升高抑或是保護(hù)性代償，此內(nèi)在的機(jī)制有待于進(jìn)一步研究數(shù)據(jù)闡明；人Ghrelin抑制其升高，此時給予的干預(yù)是起到了治療作用還是有害效果尚不能定論；GHSR阻滯劑卻增加這種升高趨勢，這從相反方面給我們出了新的解釋GHSR介導(dǎo)的GHRPs心血管效應(yīng)提示[6，7]。

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