補(bǔ)腎活髓顆粒對(duì)慢性再生障礙性貧血患者骨髓血清中FGF-1的影響*

蘇迎潔 王曉寶 王樹(shù)慶△

（1．濰坊醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261042；2．濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 濰坊 261031）

慢性再生障礙性貧血（CAA）是一組由多種病因引起的骨髓造血功能衰竭，并以造血干細(xì)胞損傷、外周血全血細(xì)胞減少為特征的病證，可由某些急性中毒及各種電離輻射引起。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病屬“虛勞”、“髓勞”范疇，而腎虛血瘀是CAA發(fā)病中的主要病機(jī)。筆者采取以補(bǔ)腎填精、通絡(luò)活髓為法組方而成的補(bǔ)腎活髓顆粒治療CAA患者，觀察其臨床療效及對(duì)骨髓血清中酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF-1）的影響。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 病例選擇 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第3版《血液病診斷及治療標(biāo)準(zhǔn)》［1］制定。中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《當(dāng)代中西醫(yī)結(jié)合血液病學(xué)》［2］和《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行版）》［3］。 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合以上中、西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡為18～65周歲，堅(jiān)持治療者并簽署知情同意書(shū)。 排除標(biāo)準(zhǔn)：由陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、骨髓增生異常綜合征中的難治性貧血、急性造血停滯、骨髓纖維化、急性白血病、惡性組織細(xì)胞病等引起的全血細(xì)胞減少性疾病，對(duì)實(shí)驗(yàn)藥品過(guò)敏者，合并嚴(yán)重心腦血管、肝、腎、造血系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)疾病、精神病患者，妊娠或哺乳期婦女，不愿合作者。

1．2 病例資料 確診的66例CAA均為來(lái)源于濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010年9月至2012年6月的住院及門診患者。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各33例，另設(shè)正常對(duì)照組20名，均為志愿者或患者健康的家屬。其中實(shí)驗(yàn)組男性15例，女性18例；年齡18～65 歲，平均（39．33±8．74）歲；病程 0．8～156 個(gè)月，平均（40．06±24．32）個(gè)月。 對(duì)照組男性 16 例，女性 17例；年齡 18～65 歲，平均（37．72±10．67）歲；病程 0．5～221 個(gè)月，平均（36．57±24．60）個(gè)月。 正常對(duì)照組男性12 名，女性 8 名；年齡 18～45 歲，平均（30．24±9．28）歲。兩組資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0．05）。

1．3 治療方法 實(shí)驗(yàn)組采用補(bǔ)腎活髓顆粒（中藥配方顆粒，四川綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司）加減：生地黃30 g，熟地黃30 g，菟絲子20 g，枸杞子 20 g，雞血藤 30g，女貞子 15g，墨旱蓮 15g，當(dāng)歸 10g，穿山甲 10g，地龍10 g。對(duì)照組采用西藥常規(guī)治療，予口服康力龍，每次 2～4mg，每日 3 次；環(huán)孢素 A 每次 50～100mg，每日3次。兩組患者在用藥期間合并感染者予經(jīng)驗(yàn)性抗感染治療；HGB低于60 g/L者輸注濾白懸浮紅細(xì)胞；出血傾向明顯 PLT＜30×109/L，或 PLT＜20×109/L 者輸注單采少白血小板。兩組均以6個(gè)月為1個(gè)療程，治療前及療程結(jié)束后均常規(guī)行骨髓穿刺及外周血檢查。正常對(duì)照組不作任何處理。

1．4 觀察指標(biāo) （1）對(duì)患者進(jìn)行一般項(xiàng)目檢查，血、尿常規(guī)檢查，心（心電圖）、肝、腎功能檢查，觀察患者癥狀體征、外周血象變化及不良反應(yīng)；并分別于療前、療后取骨髓液3mL，分離血清后，采用ELISA法檢測(cè)骨髓血清中FGF-1含量，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。（2）對(duì)患者癥狀進(jìn)行評(píng)分，以下癥狀分4級(jí)評(píng)分，其中心悸氣短、頭暈、乏力、面色蒼白，無(wú)計(jì)0分，輕度計(jì)2分，中度計(jì)4分，重度計(jì)6分；尿黃、形寒肢冷、食少、潮熱盜汗、手足心熱、口渴欲飲、便溏，無(wú)計(jì)0分，輕度計(jì)1分，中度計(jì)2分，重度計(jì)3分。

1．5 療效評(píng)價(jià) 西醫(yī)療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［1］?；局斡贺氀统鲅Y狀消失，Hgb達(dá) 120 g/L（男性）或 110 g/L（女性），WBC 達(dá) 4．0×109/L，PLT達(dá)100×109/L，隨訪1年以上未復(fù)發(fā)）。緩解：貧血和出血癥狀消失，Hgb男性達(dá)120 g/L，女性達(dá)100 g/L），WBC 達(dá) 3．5×109/L 左右，PLT 也有一定程度增加，隨訪3個(gè)月病情穩(wěn)定或繼續(xù)進(jìn)步。明顯進(jìn)步：貧血和出血癥狀明顯好轉(zhuǎn)，不輸血，Hgb較治療前1個(gè)月內(nèi)常見(jiàn)值增長(zhǎng)30 g/L以上，并能維持3個(gè)月。判定以上標(biāo)準(zhǔn)，均應(yīng)3個(gè)月內(nèi)不輸血。無(wú)效：經(jīng)充分治療后，癥狀、血象未達(dá)明顯進(jìn)步。中醫(yī)療效判定標(biāo)準(zhǔn)參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）》［3］。 臨床痊愈：中醫(yī)臨床癥狀、體征消失或基本消失，證候積分減少≥95%。顯效：中醫(yī)臨床癥狀、體征明顯改善，證候積分減少≥70%，＜95%。有效：中醫(yī)臨床癥狀，體征均有好轉(zhuǎn)，證候積分減少≥30%，＜70%。無(wú)效：中醫(yī)臨床癥狀、體征均無(wú)明顯改善，甚或加重，癥狀積分減少不足30%。根據(jù)積分法判定中醫(yī)證候總療效。癥狀積分計(jì)算公式（尼莫地平法）為：（治療前積分-治療后積分）/治療前積分×100%。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15．0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用 t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。 P＜0．05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 兩組臨床療效比較 見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組療效相當(dāng)（P＞0．05）。

表1 兩組臨床療效比較（n）

2．2 兩組中醫(yī)證候療效比較 見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)組中醫(yī)證候療效明顯優(yōu)于對(duì)照組（P＜0．05）。

表2 兩組中醫(yī)證候療效比較（n）

2．3 兩組治療前后臨床癥狀積分比較 見(jiàn)表3。兩組療后癥狀積分均低于治療前（P＜0．01），且組間癥狀積分有明顯差異，實(shí)驗(yàn)組積分低于對(duì)照組（P＜0．05）。

表3 兩組治療前后臨床癥狀積分比較（分，±s）

表3 兩組治療前后臨床癥狀積分比較（分，±s）

與本組治療前比較，*P＜0．01；與對(duì)照組治療后比較，△P＜0．05。 下同。

組 別 n 治療前 治療后實(shí)驗(yàn)組 33 24．30±8．06 15．24±5．38*△對(duì)照組 33 23．60±8．26 20．81±5．97*

2．4 兩組治療前后外周血象比較 見(jiàn)表4。兩組患者療后 WBC、HGB、及 PLT 均得到明顯提升（P＜0．01），實(shí)驗(yàn)組 HGB、PLT 改善優(yōu)于對(duì)照組（P＜0．05）。

表4 兩組治療前后外周血常規(guī)比較（±s）

表4 兩組治療前后外周血常規(guī)比較（±s）

組 別HGB（g/L） WBC（×109/L）PLT（×109/L）實(shí)驗(yàn)組 治療前 37．90±10．33（n=33） 治療后 65．22±20．67*△對(duì)照組 治療前 36．8±12．52 51．88±11．68 2．44±0．51 101．4±16．59*△ 3．51±0．73*56．24±12．88 2．62±0．48（n=33） 治療后 58．38±29．41*88．69±26．52* 3．55±0．84*

2.5 兩組治療前后骨髓血清中FGF-1水平比較 實(shí)驗(yàn)組治療前 FGF-1水平為（35.21±6.54）ng/L，治療后為（70.46±8.95） ng/L；對(duì)照組治療前為（38.96±7.84）ng/L， 治療后為 （55.81±10.39）ng/L； 正常對(duì)照組為（102.33±20.57）ng/L。結(jié)果示治療前兩組間比較，無(wú)明顯差異 （P＞0.05），但表達(dá)水平低于正常對(duì)照組 （P＜0.01），治療后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組均較治療前明顯增高（P＜0.01），實(shí)驗(yàn)組表達(dá)較對(duì)照組高（P＜0.05），與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.6 不良反應(yīng) 兩組患者治療中均存在不良反應(yīng)，經(jīng)對(duì)癥處理后不良癥狀消失或緩解，不影響療效。其中實(shí)驗(yàn)組手足震顫1例，肝功損害2例。對(duì)照組齒齦增生1例，肝功損害4例，痤瘡、多毛3例，不良反應(yīng)發(fā)生率高于實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05）。

3 討 論

FGFs家族與造血調(diào)節(jié)有關(guān)，微環(huán)境平衡的維持和血細(xì)胞生成過(guò)程都有賴于FGFs的參與。FGF-1作為FGFs家族中的一員，研究表明其有明確的胚胎發(fā)育、血管生成、損傷修復(fù)、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、骨骼生長(zhǎng)作用［4］；其與造血功能的調(diào)節(jié)方面研究尚少，但其已發(fā)現(xiàn)的生物學(xué)功能都表明FGF-1與造血功能聯(lián)系密切。在成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、和成骨細(xì)胞等細(xì)胞表皮均有FGF-1的受體，作為一種多功能的細(xì)胞生長(zhǎng)因子，F(xiàn)GF-1與這些細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，啟動(dòng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路［5-6］，發(fā)揮其促進(jìn)骨組織、血細(xì)胞等的有絲分裂，影響多序列的造血細(xì)胞的擴(kuò)增，并協(xié)同粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）增加非定向造血干/祖細(xì)胞集落的形成，從而促進(jìn)粒細(xì)胞和巨核細(xì)胞生成和成熟。

本研究通過(guò)補(bǔ)腎活髓顆粒治療CAA，觀察治療前后癥狀積分、外周血象變化，以及骨髓血清中FGF-1的表達(dá)情況，來(lái)研究補(bǔ)腎活髓中藥在治療CAA中的作用及其對(duì)FGF-1的影響。補(bǔ)腎活血中藥可促進(jìn)骨髓成纖維細(xì)胞的的生成，形態(tài)、功能的修復(fù)，從而改善造血微環(huán)境［7］。本研究提示，以補(bǔ)腎活髓顆粒治療CAA療效確切，且骨髓血清中FGF-1，治療后水平均有所提升，提示FGF-1參與再生障礙性貧血貧血的發(fā)生與疾病進(jìn)展，補(bǔ)腎活血顆粒對(duì)FGF-1有調(diào)節(jié)作用，從而改善造血微環(huán)境，使骨髓指標(biāo)及血常規(guī)發(fā)生變化。

目前對(duì)于FGF-1的研究基于其改善造血微環(huán)境角度的報(bào)道尚少，如果從微觀上進(jìn)一步研究補(bǔ)腎活髓顆粒治療CAA的作用機(jī)理，進(jìn)一步探究CAA的發(fā)病機(jī)制，從而為防治CAA提供更多策略。

［1］ 張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.北京：北京科技出版社，2007：20-21.

［2］ 鄧成珊，周藹祥.當(dāng)代中西醫(yī)結(jié)合血液病學(xué)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1997：68.

［3］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則 （試行版）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002：178-180.

［4］ 譚亞清，劉德虎.人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的研究進(jìn)展［J］.生物技術(shù)通報(bào)，2013，29（5）：22-27.

［5］ 勞興珍，高向東.酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子與肝素結(jié)合的結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展［J］.藥物生物技術(shù)，2010，17（4）：372-376.

［6］ 吳雷.補(bǔ)髓生血顆粒對(duì)慢性再障患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞MEK表達(dá)的影響［J］.中醫(yī)藥信息，2011，28（3）：67-69.

［7］ 于志峰，戴錫孟.補(bǔ)腎活血法改善免疫介導(dǎo)型再障小鼠骨髓造血微環(huán)境的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2001，8（5）：332.