復方大青顆粒急性毒性實驗研究

目的觀察復方大青顆粒一次給藥后小鼠急性毒性反應情況，確定最大給藥量。方法ICR小鼠48只，進行復方大青顆粒急性毒性實驗，首次給藥1次，連續(xù)14天觀察復方大青顆粒對小鼠體質(zhì)量、進食量及飲水量的影響。結(jié)果給藥后14天，復方大青顆粒對小鼠體質(zhì)量、進食量和飲水量無明顯影響。結(jié)論復方大青顆粒給藥后連續(xù)觀察14天，各項指標均未見異常，日最大給藥量為56g/kg，相當于臨床劑量的311倍。

ICR小鼠；復方大青顆粒；體質(zhì)量；進食量；飲水量；最大給藥量

復方大青顆粒為我院名中醫(yī)的經(jīng)驗方制劑，在臨床應用多年，具有清熱解毒，宣透表邪功效，用于流感、急性扁桃腺炎、咽炎、流行性腮腺炎等，并對病毒性感染有預防作用。為了更好地指導臨床用藥，筆者對復方大青顆粒進行急性毒性實驗，以確定最大給藥量，為多次給藥毒性實驗選擇劑量，為臨床毒副反應的監(jiān)測提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1受試藥物 復方大青顆粒（批號20121231），我院自制，規(guī)格：6g×10袋/包。

1.2儀 器 ZRY-2D智能熱原儀（重慶友朋科技有限公司）；FA-1104電子分析天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）；JJ200/d=0.01g電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；YXQ.SG41.280手提式壓力蒸汽滅菌器（上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司）。

1.3滅菌純化水 滅菌方法：121℃滅菌20min，有效期14天。

1.4動 物 SPF級ICR小鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，許可證：SCXK（滬）2008-0016，質(zhì)量合格證編號：2008001610633。

1.5動物飼養(yǎng)條件 溫度：20℃～23℃，相對濕度：53%～73%。環(huán)境用3%來蘇兒、1%84消毒液和0.1%的新潔爾滅進行交換消毒，每周輪流交換消毒液的種類。飼養(yǎng)密度：每籠6只；飼料名稱：鼠維持飼料，來源為浙江省食品藥品檢驗所實驗動物中心，飼料質(zhì)量符合中華人民共和國國家標準GB14924-2001規(guī)定；飲用水為滅菌自來水（質(zhì)量符合中華人民共和國國家標準《生活飲用水衛(wèi)生標準》（GB5749-2006）的規(guī)定，并經(jīng)121℃滅菌20min。飲水瓶不間斷供水，自由攝取。

1.6供試品配制及給藥方法

1.6.1供試品配制 稱取復方大青顆粒140g，加滅菌純化水至200mL，制成濃度為0.7g/mL的混懸液。

1.6.2給藥方法 取小鼠，按性別體質(zhì)量隨機分成四組，分別為用藥組雌、用藥組雄、對照組雌及對照組雄，每組12只。禁食不禁水12h后，一次性灌胃給藥40mL/kg，對照組給予等容積的蒸餾水。給藥后自由飲食，每天上、下午各觀察1次，連續(xù)14天。根據(jù)臨床經(jīng)驗資料：臨床推薦人用劑量為0.18g/kg/天。復方大青顆粒最大濃度為0.7g/mL，小鼠采用40mL/kg的給藥體積，1天給藥2次，則小鼠日給藥最大量為56g/kg。

1.7觀察指標及方法

1.7.1體質(zhì)量 每天固定時間稱量1次。

1.7.2進食量及飲水量 每天固定時間稱加入量和剩余量，計算差值即得。

1.7.3神經(jīng)系統(tǒng)方面 行為及反應不正常叫聲、煩躁、不安、易怒、感覺過敏、少動、嗜睡或昏迷等；運動（包括肌肉抽搐、僵硬、強迫運動、松弛、麻痹等）；瞳孔及分泌物（瞳孔放大或縮小、流淚、鼻分泌、流涎等）。

1.7.4胃腸方面 腹部脹氣或收縮，大便堅硬，較濕，不成型或黑便、土色便。

1.7.5泌尿生殖系統(tǒng) 尿量及顏色、陰唇、乳腺腫脹、會陰部骯臟。

1.7.6皮膚和毛 顏色、完整性、有否充血、紫紺、蒼白、皮疹、毛松散等。

1.7.7眼 眼瞼下垂、眼球突出、震顫等。

上述癥狀指標采用肉眼直接觀察，連續(xù)觀察14天。

1.8統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)用（） 表示，應用SPSS12.0統(tǒng)計軟件，采用t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1復方大青顆粒急性毒性實驗對小鼠體質(zhì)量的影響 給藥前小鼠禁食12h，各組體質(zhì)量均有下降；給藥后恢復正常進食進水，各組小鼠體質(zhì)量則開始增長，增長趨勢基本接近，用藥組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)果表明，給藥后連續(xù)14天，復方大青顆粒對小鼠體質(zhì)量增長無影響。見圖1、表1。

表1 復方大青顆粒急毒實驗對小鼠體質(zhì)量的影響（） g

表1 復方大青顆粒急毒實驗對小鼠體質(zhì)量的影響（） g

組別用藥組雌對照組雌用藥組雄對照組雄n/只12 12 12 12時間0d 20.42±1.59 20.22±1.35 20.39±1.60 20.29±1.43禁食1d 17.51±1.52 17.30±1.57 17.25±1.30 17.09±1.23 1d 20.74±1.40 20.54±1.40 20.90±1.41 20.97±1.50 3d 21.60±1.29 21.73±1.61 22.28±1.16 22.29±1.53 5d 22.88±1.30 23.31±1.47 23.32±1.31 23.84±1.60 7d 24.19±1.32 24.90±1.51 24.93±1.25 25.48±1.39 14d 27.69±1.62 28.12±1.47 30.19±1.50 30.37±1.37

2.2復方大青顆粒急毒實驗對小鼠進食量的影響

因給藥前小鼠禁食12h，給藥后當天撤銷禁食，各組小鼠進食量大增，后稍下降，降至給藥前正常水平，至第3天開始逐漸增長，用藥組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)果表明，給藥后連續(xù)14天，復方大青顆粒對小鼠進食量無明顯影響。見圖2、表2。

表2 復方大青顆粒急毒實驗對小鼠進食量的影響（） g

表2 復方大青顆粒急毒實驗對小鼠進食量的影響（） g

組別用藥組雌對照組雌用藥組雄對照組雄n/只12 12 12 12時間0d 8.41±0.26 7.97±0.94 8.57±0.11 9.82±1.71 1d 12.71±0.83 13.49±0.29 10.56±0.23 13.47±1.63 3d 8.02±0.85 8.68±0.43 7.94±1.55 7.84±0.44 5d 12.36±0.41 11.33±0.38 11.63±2.16 9.65±1.53 7d 14.28±0.35 13.35±1.11 11.61±1.17 9.88±0.29 14d 17.52±0.36 16.70±0.42 13.50±0.45 14.20±0.52

2.3復方大青顆粒急毒實驗對小鼠飲水量的影響

因給藥前小鼠禁食12h，給藥后當天撤銷禁食，各組小鼠食量大增因而飲水量大增，后下降，至第3天開始逐漸恢復到用藥前的飲水量，且基本比較穩(wěn)定，整個過程中，用藥組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)果表明，給藥后連續(xù)14天，復方大青顆粒對小鼠飲水量無明顯影響。見圖3、表3。

表3 復方大青顆粒急毒實驗對小鼠飲水量的影響（） mL

2.4復方大青顆粒急性毒性實驗對小鼠神經(jīng)、胃腸、泌尿生殖、皮膚、毛及眼等影響 結(jié)果顯示，以上各方面均未見異?，F(xiàn)象。

上述實驗結(jié)果表明，復方大青顆粒給藥后連續(xù)觀察14天，各項指標均未見異常，日最大給藥量為56g/kg，相當于臨床劑量的311倍。

3 討論

復方大青顆粒主要由板藍根和大青葉等中藥組成，中國藥典2010年版一部記載：板藍根[1]（ISATIDIS RADIX）為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort的干燥根。秋季采挖，除去泥沙，曬干?？?、寒，歸心、胃經(jīng)。清熱解毒，涼血利咽。用于瘟疫時毒、發(fā)熱咽痛、溫毒發(fā)斑、痄腮、爛喉丹痧、大頭瘟疫、丹毒、癰腫。大青葉[2]（ISATIDIS FOLIUM）為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort的干燥葉。夏、秋二季分2～3次采收，除去雜質(zhì)，曬干?？唷⒑?，歸心、胃經(jīng)。清熱解毒，涼血消斑。用于溫病高熱，神昏，發(fā)斑發(fā)疹，痄腮，喉痹，丹毒，癰腫。復方大青顆粒不僅用于成人，而且也用于兒童，有一定的臨床應用基礎。但由于現(xiàn)代中藥制劑運用了大量的新技術(shù)甚至新的理論，與傳統(tǒng)中藥相比，物質(zhì)基礎和給藥方式可能有明顯改變，而有些改變帶來的結(jié)果又是未知的，特別是當某些成分的含量明顯提高后，其藥理作用可能會明顯增強，毒性反應也可能明顯增大。因此，中藥進行急性毒性實驗研究十分必要[3]。

急性毒性實驗[3-7]是指動物一次或24h內(nèi)多次接受一定劑量的受試物，動物在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應。其目的是為新藥的研發(fā)提供參考信息。最大給藥量指單次或24h內(nèi)多次（2～3次）給藥所采用的最大給藥劑量。最大給藥量實驗是在合理的給藥濃度及合理的給藥容量的條件下，以允許的最大劑量給予實驗動物，觀察動物出現(xiàn)的反應。從獲取安全性信息的角度考慮，有時對實驗動物的異常反應和病理過程的觀察、分析，較以死亡為觀察指標更有毒理學意義。為更好地指導臨床用藥，我們對復方大青顆粒進行急性毒性試驗，考察其對小鼠體質(zhì)量、進食量及飲水量的影響，觀察其對小鼠神經(jīng)、胃腸、泌尿生殖、皮膚、毛及眼等的影響，給藥后連續(xù)觀察14天，小鼠各項指標均未見明顯異常，從而確定日最大給藥量為56g/kg，相當于臨床劑量的311倍。本研究結(jié)果將為復方大青顆粒的臨床合理用藥打下基礎，并為其臨床毒副反應的監(jiān)測提供參考依據(jù)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：191.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：20-21.

［3］國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物急性毒性實驗研究技術(shù)指導原則［S］.2005.

［4］呂圭源.中藥新產(chǎn)品開發(fā)學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：536.

［5］袁伯俊，王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐［M］.北京：軍事醫(yī)學科學出版社，1997：22-42.

［6］徐叔云.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：227-231.

［7］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：112-119.

復方大青顆粒急性毒性實驗研究

王京霞 張 琦 陳 琳 浙江省中醫(yī)院 杭州310006

Acute toxicity of Fufang Daqing Granules

WANG Jingxia，ZHANG Qi，CHEN Lin.Zhejiang Provincial Hospital of TCM,Hangzhou(310006),China

ObjectiveTo observe the acute toxic reaction in mice exposed to one-dose Fufang Daqing granules and to determine its maximum dosage.MethodsForty-eight 48 ICR mice were randomly divided into two control groups（female/male）and two drug groups（female/male），12 mice in each group.Drug groups were given initial dose of 40 mL/kg Fufang Daqing granules.Control groups were given equivalent volume of distilled water.After the initial dose,mice in 4 groups were on normal diet and the body weight，food intake and water intake of mice were recorded for 14 d.ResultsAfter 14-day observation，no effect of Fufang Daqing granules on mouse body weight growth，food intake and water intake was found.ConclusionIn this study，the maximum dosage of Fufang Daqing granules was 56 g/kg，311 times more than the clinical dose，which did not cause any acute toxicity in mice.

ICR mice；Fufang Daqing granules；body weight；food intake；water intake；the maximum dosage

2013-12-20

·經(jīng)驗交流·