黃芪多糖對5/6腎切除大鼠的腎保護(hù)作用研究

戴 芹 曲曉璐 唐詠華 李華萍

（上海市浦東新區(qū)浦南醫(yī)院，上海200125）

慢性腎臟病患者存在氧化應(yīng)激反應(yīng)增強，氧化應(yīng)激加重了腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展，同時是引起心血管以及神經(jīng)系統(tǒng)等其他臟器發(fā)病的重要因素之一[1]。氧化應(yīng)激是與慢性腎臟病患者的預(yù)后密切相關(guān)的因素[2]。觀察慢性腎臟病患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平并予以干預(yù)，有利于慢性腎臟病及其并發(fā)癥的防治。中藥黃芪是一味重要的補氣藥物，有多篇文獻(xiàn)報道黃芪或以黃芪為主藥的中藥具有改善慢性腎衰患者腎功能的作用。我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)5/6腎切除模型大鼠體內(nèi)呈氧化應(yīng)激狀態(tài)，中藥黃芪對模型大鼠具有一定的改善腎功能及抗氧化作用，且呈劑量依賴性[3-4]。為了進(jìn)一步研究黃芪抗氧化作用的具體有效成分，我們對黃芪的主要成分——黃芪多糖進(jìn)行了深入研究，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 6～8周齡Wister雄性大鼠30只，體重160～180g。由中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供。所有動物在同一動物房中飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水，常規(guī)環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后進(jìn)行實驗。

1.2 實驗藥物 黃芪多糖，由上海中藥現(xiàn)代化研究中心提供。

1.3 儀器與試劑 相關(guān)指標(biāo)（腎功能、血脂及SOD、MDA）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

2 實驗方法

2.1 造模與分組 大鼠在鼠籠內(nèi)適應(yīng)3d后，將其按體重隨機分成2組：假手術(shù)組10只和造模組20只。采用經(jīng)典的platt法建立慢性腎衰模型[5]。方法如下：戊巴比妥按20mg/kg的劑量麻醉大鼠。將大鼠左側(cè)肋骨靠背部的皮膚備皮，酒精棉球消毒，大鼠仰臥，下肢交叉固定于大鼠板上，左肋緣下約0.5cm處用手術(shù)刀片切一約1.5cm的切口，輕輕擠壓可見腎臟，仔細(xì)分離腎周脂肪和腎包膜，上下端各切除1/3腎組織，手術(shù)創(chuàng)面滴加凝血酶溶液止血，待創(chuàng)面無明顯出血后將殘腎放入腹腔，分層縫合肌肉和皮膚。1周后，同樣麻醉后打開右側(cè)腎臟，分離脂肪和腎包膜后結(jié)扎右腎，切去右腎，縫合肌肉和皮膚。2次手術(shù)共切去雙腎的5/6。假手術(shù)組大鼠采用同樣步驟：切開左、右側(cè)肋緣靠背部皮膚及肌肉層，輕壓出腎臟，分離腎包膜，不予腎切除。于右腎切除后28d，鼠尾靜脈采血檢測SCr值。造模組大鼠死亡1只，剩余19只模型大鼠根據(jù)所測SCr值隨機分為腎衰模型組9只、黃芪多糖干預(yù)組10只。

2.2 給藥方法 29只大鼠均正常飲水和進(jìn)食，其中黃芪多糖組予黃芪多糖水溶劑（1000mg·kg-1·d-1，2mL/d）灌胃[6]；其余2組大鼠同時每天予飲用水2mL灌胃。每日1次，灌胃時間為8周。

2.3 標(biāo)本采集和指標(biāo)檢測 灌胃8周后戊巴比妥麻醉，行下腔靜脈采血。取血3mL不抗凝，離心后分離以備檢測尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及血脂；取腎組織用液氮速凍后置于-80℃冰箱備用。腎功能及血脂由上海中醫(yī)藥大學(xué)安評中心應(yīng)用全自動生化儀檢測。按照試劑盒的說明檢測大鼠腎組織超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)，實驗結(jié)果以（x±s）表示，數(shù)值比較采用 One-Way ANOVA，統(tǒng)計學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)為 P＜0.05。

3 實驗結(jié)果

灌胃期間腎衰模型組大鼠死亡1只，黃芪多糖干預(yù)組死亡1只。

3.1 各組大鼠干預(yù)后腎功能情況 見表1。

表1 各組大鼠干預(yù)后Scr、BUN含量比較（x±s）

3.2 各組大鼠干預(yù)后血脂情況 見表2。

表2 各組大鼠干預(yù)后血脂指標(biāo)比較（x±s）

3.3 各組大鼠干預(yù)后腎組織SOD與MDA含量比較 見表3。

表3 各組大鼠干預(yù)后腎組織SOD、MDA含量比較（x±s）

4 討論

黃芪是一味重要的具有益氣固表作用的中藥。研究發(fā)現(xiàn)，黃芪富含硒等微量元素，能保護(hù)腎小球基底膜的電荷屏障和機械屏障，使得腎小球基底膜通透性降低，減少尿蛋白，抑制腎臟肥大，使得白蛋白合成增加，腎臟血流量增加，從而達(dá)到降低尿蛋白的作用[7-8]。我們在前期研究中也發(fā)現(xiàn)，黃芪具有腎保護(hù)作用，與其抗氧化作用有關(guān)[4]。丁瑞恒等[9]用黃芪干預(yù)經(jīng)晚期糖基化終末產(chǎn)物作用的系膜細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其能抑制系膜細(xì)胞的增殖，增加系膜細(xì)胞膜表面的負(fù)電荷，并且對抗AGEs誘導(dǎo)凋亡的作用，對系膜細(xì)胞有良好的保護(hù)作用，也間接地證明了黃芪具有很好的抗氧化作用。

黃芪多糖為黃芪的有效成分之一，有臨床研究發(fā)現(xiàn)：黃芪多糖具有益氣通瘀、補脾腎而助氣化的功效，而益氣通瘀藥物可以促進(jìn)血液流動，阻止腎小球增大，改善腎功能，并再次證實黃芪多糖具有一定的降脂作用，可明顯降低患者的TC和LDL-C，升高保護(hù)性HDL-C水平，促進(jìn)腎臟微循環(huán)，從而保護(hù)腎臟[10]。吳朝妍等[6]實驗中發(fā)現(xiàn)黃芪多糖可以抑制NF-κB和TGF-β1的表達(dá)，促進(jìn)腎組織細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而延緩腎小球硬化。所以，黃芪多糖能改善微循環(huán)，糾正脂質(zhì)代謝紊亂，增加腎臟血供，減少血脂在腎小球和腎間質(zhì)的沉積和微血栓的形成，從而改善腎功能，防止腎小球硬化[11]。

腎大部切除的大鼠模型是動物實驗中經(jīng)典的慢性腎衰模型。本研究中我們觀察到：腎衰模型組大鼠BUN、SCr較假手術(shù)組顯著升高，再次體現(xiàn)了該模型的可重復(fù)性。目前普遍認(rèn)為，慢性腎臟病時氧化應(yīng)激反應(yīng)增強，導(dǎo)致蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、碳水化合物及核酸的過氧化等[12]。目前檢測氧化應(yīng)激水平主要通過檢測體內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物和還原酶系。脂質(zhì)過氧化最終產(chǎn)生的物質(zhì)為丙二醛，SOD的唯一底物為超氧陰離子，它是酶類的清除劑，是抗氧化作用的重要成分。在生理情況下，人體內(nèi)的Mn–SOD和Cu-SOD可迅速地催化超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫，促過氧化氫在過氧化氫酶的作用下生產(chǎn)水和氧分子，完全滅活了氧自由基，阻斷其對腎臟組織細(xì)胞的氧化損傷反應(yīng)。慢性腎功能不全患者SOD明顯缺乏，過量的氧自由基引起腎組織細(xì)胞損傷及循環(huán)系統(tǒng)等其他組織器官損傷。本研究中我們觀察到，腎衰模型組大鼠SOD活性明顯降低，MDA水平顯著升高，表明了模型大鼠體內(nèi)亦呈明顯的氧化應(yīng)激狀態(tài)。與腎衰模型組相比，黃芪多糖干預(yù)8周后，血尿素氮和肌酐水平明顯下降，腎功能明顯改善。黃芪多糖干預(yù)組大鼠HDL水平明顯增高，TC、LDL水平明顯降低，腎組織中的MDA濃度顯著的下降，SOD活性顯著上升，表明了黃芪多糖能夠很好地改善大鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)。

綜上所述，黃芪多糖對慢性腎衰大鼠有一定的腎保護(hù)作用，其可能的機制與改善模型大鼠的脂質(zhì)代謝，發(fā)揮其抗氧化作用有關(guān)。上述實驗結(jié)果為我們臨床上應(yīng)用黃芪多糖治療慢性腎病患者，改善其脂質(zhì)代謝紊亂，延緩其腎衰進(jìn)程提供了實驗依據(jù)。

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