血清蛋白電泳的方法及臨床意義

閆曉琳

血清蛋白電泳的方法及臨床意義

閆曉琳

目的 調(diào)查血清蛋白電泳(SPEP)情況。方法收集本院2011年1月～2013年6月80例本院門診和住院患者的血清蛋白電泳分析。結(jié)果精確地描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌, 一般常見的是白蛋白降低、某個(gè)球蛋白區(qū)域升高, 提示不同的臨床意義。結(jié)論血清蛋白電泳對(duì)這類疾病的早期診斷, 療效觀察和預(yù)后判斷均有十分重要的意義。

血清蛋白電泳；臨床意義

血清是數(shù)種蛋白質(zhì)的混合液, 都有它特有的等電點(diǎn)。蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)呈電中性狀態(tài), 它的分子所帶正負(fù)電荷量相等。如將蛋白質(zhì)置于比其等電點(diǎn)較高的緩沖液中, 它們都游離成帶負(fù)電荷的質(zhì)點(diǎn), 在電場中均會(huì)向正極泳動(dòng)。收集2011年1月～2013年6月80例門診和住院患者的血清蛋白電泳分析。

1 一般資料

本組收治的80例受檢驗(yàn)患者行血清蛋白電泳分析, 男48例, 女32例, 年齡2～82歲, 平均年齡42.5歲。取新鮮無溶血現(xiàn)象的血清, 采用使用Sebia公司的“HYDRASYS”全自動(dòng)電淋儀, 瓊脂糖凝膠、含緩沖液條帶、氨基黑染色液、脫色液、洗滌液、稀釋劑。

2 方法

打開電源, 將點(diǎn)樣器置于平整實(shí)驗(yàn)桌表面, 孔號(hào)位于加樣孔上方按序排列, 每孔加10 μl樣品, 把點(diǎn)樣器放于濕盒內(nèi), 齒梳向上放置, 讓樣品于齒梳中擴(kuò)散5 min, 開電泳蓋, 并升起電極和點(diǎn)樣支架。選擇蛋白質(zhì)電泳程序。取出含緩沖液的海綿條帶, 并將條帶塑料襯墊物的背緊貼電極掛置。取出凝膠, 用1張薄濾紙輕輕地吸去凝膠表面多余的液體, 然后快速移去濾紙。加120～200 μl蒸溜水或去離子水于電泳儀的平臺(tái)框面的下1/3處。將凝膠片底邊緊靠框架底邊, 凝膠片背對(duì)框架［1］。彎曲凝膠片將其置于電泳框面上,確定凝膠背面的氣泡被完全趕走。放下2個(gè)支架。這時(shí), 含緩沖液的條帶沒有接觸凝膠。不要強(qiáng)迫支架完全下降。從濕盒中取出點(diǎn)樣器。

3 討論

血清蛋白質(zhì)(SPE)在給定的pH條件下根據(jù)其所帶電荷數(shù)將其分離成各種片段, 用瓊脂糖作介質(zhì)時(shí),血清蛋白質(zhì)由五個(gè)不同遷移率區(qū)帶組成, ALB、α1、α2、β、γ球蛋白。

血清貯存于2～8℃和冷凍引起β-脂蛋白從β區(qū)域到α1或α2區(qū)域的陽極轉(zhuǎn)移；血清越陳舊轉(zhuǎn)移越多。血清(特別是含冷球蛋白成分)可能變得粘稠或混濁。應(yīng)用稀釋劑預(yù)處理, 即加入25 μl液化劑于75 μl血清中, 在震蕩器上混勻15 s。勿使用溶血樣品,否則會(huì)增加α2和β含量, 避免使用血漿。染色之前作檢查, 染色液至少300 ml、脫色液至少1 L、廢液缸空置。

新鮮血清經(jīng)醋酸纖維薄膜電泳后可精確地描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌, 一般常見的是白蛋白降低、某個(gè)球蛋白區(qū)域升高, 提示不同的臨床意義。白蛋白僅由肝細(xì)胞制造, 體內(nèi)40%的白蛋白存在于體液中, 其分布于組織內(nèi)和組織液內(nèi)［2］。血管內(nèi)外白蛋白經(jīng)常交換而處于動(dòng)態(tài)平衡中, 正常人每天由肝細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)制造的白蛋白為120～200 mg/kg, 相當(dāng)11～15 g/d。肝合成白蛋白屬限速性, 僅在體內(nèi)過量白蛋白丟失或破壞情況下, 合成速率才會(huì)增加。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成白蛋白, 由肝細(xì)胞分泌入肝竇而入血。肝細(xì)胞損傷可發(fā)生白蛋白合成、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和釋放障礙, 引起血中白蛋白減少。在肝臟炎癥性病變時(shí), α1球蛋白增加, 和白蛋白呈負(fù)相關(guān), 但在肝細(xì)胞破壞極為嚴(yán)重的肝壞死和肝硬化時(shí)則減少, 與白蛋白呈正相關(guān)。在致命的肝功能衰竭時(shí), α1球蛋白可降到很低水平。肝病時(shí)如al球蛋白增加提示病情較輕, α2球蛋白減少常標(biāo)志病情重篤。因此, 測(cè)定α1球蛋白對(duì)判斷肝炎患者的嚴(yán)重和預(yù)后有參考價(jià)值。此外, 在肝癌時(shí)α1球蛋白顯著上升。缺鐵性貧血時(shí), 由于轉(zhuǎn)鐵蛋白的升高而呈現(xiàn)β區(qū)帶增高；而慢性肝病或肝硬變時(shí), 白蛋白顯著降低, γ球蛋白升高2～3倍, 免疫球蛋白多克隆增高,甚至可見β-γ融合的橋連現(xiàn)象, 還可在γ區(qū)呈現(xiàn)細(xì)而密的寡克隆區(qū)帶；對(duì)單一克隆漿細(xì)胞異常增殖所產(chǎn)生的無抗體活性的均一免疫球蛋白稱M蛋白的檢測(cè), 血清蛋白電泳是其首選的實(shí)驗(yàn)診斷方法, 可在電泳區(qū)帶的僅α2-γ區(qū)呈現(xiàn)致密而深染, 高度集中的蛋白克隆增生區(qū)帶, 稱其為M蛋白區(qū)帶, 掃描后形成高而狹窄的單株峰, 若此峰在γ區(qū)其峰高與峰底寬之比>2：1, 則由于正常免疫球蛋白合成限制造成背景染色淺。由M蛋白所導(dǎo)致的一組疾病如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、重鏈病、游離輕鏈病、半分子病、良性單株丙球血癥和雙M蛋白血癥等, 目前這類疾病已不屬罕見。血清蛋白電泳對(duì)這類疾病的早期診斷, 療效觀察和預(yù)后判斷均有十分重要的意義。

［1］ 劉建強(qiáng), 孟青妹. 青海蟾蜍血清蛋白質(zhì)成分的電泳分析. 中國獸醫(yī)科技, 2003,3(10):64-65.

［2］ 姜儻. 尿液蛋白與腎臟疾病.中化檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2002, 25(5):312-313.

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1674-9316(2014)01-0029-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.01.019

150036 黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院