尿蛋白電泳檢測及臨床應(yīng)用

任冬娟

黑龍江省森工總醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000

尿蛋白電泳檢測及臨床應(yīng)用

任冬娟

黑龍江省森工總醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000

目的探討尿蛋白電泳測定及臨床應(yīng)用。方法選取臨床26例腎臟病患者尿蛋白電泳檢測的臨床應(yīng)用。結(jié)果生理性蛋白分子量65～70 kda 3例，腎小球性蛋白尿≥65～70 kda 11例，腎小球性蛋白尿＜65 kda 6例，混合性蛋白尿＜65 kda和混合性蛋白尿≥65～70 kda 5例。結(jié)論通過尿蛋白電泳檢測確定尿蛋白的來源；了解腎臟病變的嚴(yán)重程序（選擇性蛋白尿與非選擇性蛋白尿），從而有助于診斷和預(yù)后的判斷。

尿蛋白電泳；腎臟??；臨床評價

蛋白尿是腎臟病變診斷的一個重要指征，蛋白尿來源的區(qū)分和發(fā)生機(jī)制對腎病的治療和預(yù)后觀察均有重要參考價值。可配合血清蛋白電泳篩出單克隆球蛋白病，特別是某些M蛋白不出現(xiàn)在血清蛋白電泳的患者,用于輔助診斷腎臟疾病。選取臨床2013年3月～2014年6月收治的腎內(nèi)科患者26例尿液行尿蛋白電泳檢測分析如下。

1 材料與方法

1.1 對象

本組檢測的26例尿液，均為腎內(nèi)科住院及門診患者。其中男15例，女11例，年齡20～84歲，平均年齡45歲。其中膜性腎病患者8例；局灶性腎小球硬化患者5例；腎小球輕微病變患者5例；系膜細(xì)胞增生伴腎小管灶性萎縮患者3例；系膜細(xì)胞增生性腎小球腎炎患者3例；IgA腎病患者2例。取24 h新鮮尿液，必要時樣品在2～8℃可保存1周。

1.2 方法

SDS-瓊脂糖凝膠電泳，試劑為本實驗室使用Sebia公司的“HYDRASYS”全自動電泳儀。取20μl稀釋液。放入小試管底部，加80μl混勻的尿液，旋渦混勻5 s。如果尿蛋白＞2 g/L。則尿液先用生理鹽水稀釋至2 g/L左右。

2 結(jié)果

生理性蛋白分子量65～70 kda 3例，腎小球性蛋白尿≥65～70 kda 11例，＜65 kda 6例，混合性蛋白尿＜65 kda和≥65～70 kda 5例。

3 討論

尿蛋白電泳有醋酸纖維素薄膜法和十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE），以后者常用，又稱為尿蛋白SDS盤狀電泳。其原理是：尿蛋白可與十二烷基硫酸鈉結(jié)合，形成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，聚丙烯酰胺凝膠具有分子篩效應(yīng)。尿液中各種蛋白質(zhì)組分在向正極移動的過程中，可通過泳動速度按其相對分子質(zhì)量的大小彼此分離出蛋白質(zhì)帶。將蛋白尿與已知相對分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)一起進(jìn)行SDS圓盤狀電泳分析，可判斷尿蛋白的組分和相對分子量范圍，進(jìn)行蛋白尿的選擇性或非選擇性分析。用SDS處理加入硫基乙醇的樣品，可使不溶性蛋白質(zhì)溶解并與SDS結(jié)合［1］。SDS是一種陰離子表面活性劑，可將蛋白質(zhì)的大小亞基解離并與SDS結(jié)合并帶上陰離子，大大超過蛋白質(zhì)的原有電荷，從而掩蓋了蛋白質(zhì)的原有電荷差異。使蛋白質(zhì)遷移率僅受蛋白質(zhì)大小亞基的相對分子量影響。因此SDS-PAGE是目前分析蛋白質(zhì)亞基組成及相對分子量的最佳方法。

生理性蛋白尿或無癥狀性蛋白尿，是由于體內(nèi)外各種因素對機(jī)體的影響而導(dǎo)致的尿蛋白含量增多，主要是由腎小球濾過而未被重吸收的蛋白質(zhì)加上腎或泌尿生殖道分泌的蛋白質(zhì)共同組成，主要成分為清蛋白。可分為功能性蛋白尿及體位性蛋白尿。

病理性蛋白尿可分為腎前性、腎性和腎后性蛋白尿。腎前性蛋白尿多為溢出性蛋白尿，是由血液流經(jīng)腎臟前就已患的疾病引起。這些疾病導(dǎo)致血循環(huán)中某些低分子量蛋白質(zhì)異常增多，因而腎小球濾過亦增加，超過腎小管濾過閾值，尿中出現(xiàn)大量低分子量蛋白質(zhì)。腎小球性蛋白尿因炎癥、免疫系統(tǒng)破壞等因素，導(dǎo)致腎小球濾膜損傷，孔徑增大，腎小球毛細(xì)血管壁通透性增加，腎小球濾膜各層，特別是足突細(xì)胞層的唾液酸減少或消失，以至靜電屏蔽作用減弱［2］。主要見于各類腎小球疾病，如急性腎小球腎炎、腎缺血、缺氧、淤血、淀粉樣；某些繼發(fā)性腎臟改變，如血管病變、糖尿病性腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎病。如腎小球損傷較輕，以4萬～9萬的中分子質(zhì)量蛋白尿為主時，稱選擇性蛋白尿。病變加重，大分子量蛋白如IgG、IgA甚至IgM也漏出時，則稱為非選擇性蛋白尿?？赏ㄟ^測定尿中A/G比值粗略地加以鑒別。當(dāng)比值＞5時為選擇性蛋白尿，表示病變不甚嚴(yán)重，類固醇激素對此種腎病綜合征療效好；反之為非選擇性蛋白尿，尿中低分子量的蛋白質(zhì)和中分子量的清蛋白同時增多，嚴(yán)重時還可見到大分子量免疫球蛋白。此現(xiàn)象見于慢性腎小球腎炎和慢性腎盂腎炎等。以上病理性蛋白尿的分類是相對的，當(dāng)病變同時累及腎小球及腎小管時，低分子量、高分子量蛋白均增多，此時動態(tài)觀察24 h尿蛋白排出量有助于病程監(jiān)測及療效判斷。

［1］叢玉隆，王丁.當(dāng)代檢驗分析技術(shù)與臨床［M］.北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社，2002：228-229.

［2］朱立華.腎臟疾病的變化、免疫檢測技術(shù)進(jìn)展［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2002，25：306.

Urinary Protein Electrophoresis and its Clinical Applications

REN Dongjuan Forestry General Hospital，Hei Longjiang 150000，in China

ObjectiveEvaluating on urinary protein electrophoresis and its clinical applications.Methodsselecting 26 urinary protein samples from patients with kidney disease, then making an electrophoresis experiment and applying them clinically.ResultsFor all the samples, 3 of them are categorized as physiological urinary protein with 65～70 kda. 11 of them are glomerular urinary protein with more than 65 but less than 70 kda.6 samples with less than 65 kda, and 5 samples are mixed urinary protein with more than 65 but less than 70 kda.ConclusionUrinary protein electrophoresis clarifies the source of urinary protein as well as the degree of kidney lesions, which would be beneficial for the judgment of diagnosis and prognosis.

Urine protein electrophoresis； Kidney disease；Clinical evaluation

R587.2

B

1674-9316（2014）18-0126-03

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.18.086