尿蛋白定量測(cè)定方法分析

潘亞男

肇源縣人民醫(yī)院，黑龍江 肇源 166500

尿蛋白定量測(cè)定方法分析

潘亞男

肇源縣人民醫(yī)院，黑龍江 肇源 166500

目的探討尿蛋白的定量試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)及臨床意義。方法對(duì)26例腎臟病患者尿標(biāo)本24尿蛋白定量檢測(cè)分析。結(jié)果輕度蛋白尿5例，中度蛋白尿8例，重度蛋白尿分13例。結(jié)論磺基水楊酸—硫酸鈉比濁法操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)靈敏，結(jié)果顯示快，與各類蛋白質(zhì)均能發(fā)生反應(yīng)。

尿蛋白定量測(cè)定；腎臟病

正常人腎小球?yàn)V過(guò)液中有2～4 g/d小分子的蛋白質(zhì)，在通過(guò)近端腎小管時(shí)，由于小管細(xì)胞的胞飲作用絕大部分又被重吸收，故終尿中的蛋白質(zhì)含量很少，一般為20～80 mg/d。當(dāng)尿中蛋白質(zhì)增加，24 h超過(guò)150 mg時(shí)稱蛋白尿。24 h尿蛋白定量的測(cè)定有沉淀法、比濁法、比色法、染料結(jié)合法、免疫法及尿蛋白電泳等。對(duì)2013年1月～12月腎臟病患者26例尿蛋白定量試驗(yàn)方法分析 如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

尿液標(biāo)本為2013年1月～12月腎臟病患者26例，其中男14例，女12例，年齡15～77歲，其中腎小球腎炎8例，腎病綜合征6例，IgA腎病1例，紫瘢腎炎1例，狼瘡性腎炎1例，糖尿病腎病3例。尿液標(biāo)本為晨6時(shí)至次日6時(shí)所有尿液，混勻后取5 ml進(jìn)行測(cè)定。

1.2 方法

1.2.1 磺基水楊酸-硫酸鈉比濁法 磺基水楊酸—硫酸鈉比濁法操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)靈敏，結(jié)果顯示快，與各類蛋白質(zhì)均能發(fā)生反應(yīng)；敏感度為0.05～0.1 g/L，但有一定程度的假陽(yáng)性。如尿蛋白含量過(guò)少時(shí)，此法難以確證結(jié)果的準(zhǔn)確性，可采用雙縮脲法［1］。免疫法和電泳法具有更高的靈敏度與特異性，是今后的發(fā)展趨勢(shì)。疊氮鈉生理鹽水：稱取氯化鈉0.9 g，疊氮鈉0.1 g，用蒸餾水溶解并稀釋至100 ml。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：將血清總蛋白測(cè)定應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液用疊氮鈉生理鹽水稀釋成1000 mg/L后使用。冰箱冷藏保存。

1.2.2 雙縮脲化學(xué)比色法 Tsuchiys溶液：稱取7.5 g磷鎢酸，加25.0 ml濃鹽酸，385 m1 95%乙醇和30.0 ml去離子蒸餾水。Biurets試劑：第1杯：稱取34.6 g檸檬酸鈉，加20.0 g無(wú)水碳酸鈉和大約120 ml蒸餾水使其溶解；第2杯：稱取3.46 g硫酸銅，加大約20 ml蒸餾水使其溶解；以上兩杯混合加蒸餾水至200 ml即可。0.75 mol/L氫氧化鈉溶液：取 20.0 ml飽和氫氧化鈉溶液加蒸餾水至500 ml即可［2］。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：稱取150 mg結(jié)晶型凍干人血清蛋白，溶解在100 ml 3 g/L苯甲酸溶液中。測(cè)定方法：定性試驗(yàn)：先用磺柳酸試劑將尿標(biāo)本做定性試驗(yàn)；如果尿蛋白定性陰性則可不做定量試驗(yàn)，結(jié)果就直接報(bào)陰性；如果尿蛋白定性為微量，應(yīng)選擇其他測(cè)定方法進(jìn)行尿蛋白定量分析。

1.2.3 麗春紅S染料結(jié)合法 三氯乙酸一麗春紅-S試劑原液：稱取麗春紅-S 1.0 g，溶解在1000 ml 300 g/L三氯乙酸液中。三氯乙酸-麗春紅-S試劑應(yīng)用液：原液100 ml用蒸餾水稀釋至1000 ml，在室溫下數(shù)月穩(wěn)定。0.2 mol/L氫氧化鈉溶液。蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線：蛋白標(biāo)準(zhǔn)液用生理鹽水稀釋成每升含蛋白200 rag、400 mg、600 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1600 mg的標(biāo)準(zhǔn)液，各取100 μl，與測(cè)定標(biāo)本操作相同，用560 nm波長(zhǎng)比色，制成曲線。

1.2.4 鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法試劑 顯色試劑取鄰苯三酚紅27 mg，鉬酸銨30 mg，用0.1 mol/L甘氨酸一鹽酸緩沖液（pH3.0）溶解后，稀釋至1000 ml，置棕色瓶?jī)?nèi)，25℃以下保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：將血清總蛋白應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液用疊氮鈉生理鹽水稀釋成1000 mg/L后使用。冰箱保存。

2 結(jié)果

尿蛋白定量0.05～12.8 g,平均6.38 g。輕度蛋白尿5例，中度蛋白尿8例，重度蛋白尿分13例。

3 討論

磺基水楊酸—硫酸鈉比濁法操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)靈敏，結(jié)果顯示快，與各類蛋白質(zhì)均能發(fā)生反應(yīng)；敏感度為0.05～0.1 g/L，但有一定程度的假陽(yáng)性。如尿蛋白含量過(guò)少時(shí)，此法難以確證結(jié)果的準(zhǔn)確性，可采用雙縮脲法。免疫法和電泳法具有更高的靈敏度與特異性，是今后的發(fā)展趨勢(shì)。正常人尿蛋白為40～80 mg/24 h，最多不超過(guò)150 mg/24 h。輕度蛋白尿多見(jiàn)于下列疾?。焊鞣N原因引起的腎間質(zhì)性腎炎、各種腎炎緩解期、急性腎炎恢復(fù)期、腎功能衰竭晚期、腎小動(dòng)脈硬化性腎病、功能性或體位性蛋白尿。中度蛋白尿見(jiàn)于多種腎臟疾病，以腎小球疾病常見(jiàn)；大量蛋白尿強(qiáng)烈提示腎小球病變，常為腎病綜合征。

［1］辛崗，王芳，王梅，等.點(diǎn)時(shí)間尿蛋白與尿肌酐比值檢測(cè)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)［J］.中華腎臟病雜志，2005（5）：247-250.

［2］葛君琍，喬正梅，王靜.晨尿尿蛋白/尿肌酐比值與24小時(shí)尿蛋白的臨床研究［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2008（19）：3026-3027.

An Analysis about the Quantitative Measurement of Urinary Protein

Pan Yanan People’s hospital in Zhao Yuan， Heilongjiang 166500，in China

ObjectiveAn evaluation on the quantitative measurement of urinary protein and its clinical value.MethodsMaking a quantitative analysis of 24 urinary protein samples selected from 26 patients with kidney disease.Results5 out of all samples are taken as mild one， and 8 samples are moderate one， while， 13 samples are severe.Conclusionsulfosalicylic acid-sodium nephelometry is simple and convenient， and it is so sensitive that make the result demonstrated soon. What’s more， it can be reactive with any protein.

Determining total urinary protein concentration；Kidney disease

R446.1

B

1674-9316（2014）18-0125-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.18.085