HPLC法測(cè)定祛風(fēng)濕中成藥中的糖皮質(zhì)激素

1.廣東藥學(xué)院藥用生物活性物質(zhì)研究所，廣東 廣州 510006；2.廣東省生物活性藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006；3.廣東省佛山市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山 528000

HPLC法測(cè)定祛風(fēng)濕中成藥中的糖皮質(zhì)激素

吳立蓉1,2高衛(wèi)東3

1.廣東藥學(xué)院藥用生物活性物質(zhì)研究所，廣東 廣州 510006；2.廣東省生物活性藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006；3.廣東省佛山市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山 528000

目的建立高效液相色譜法測(cè)定祛風(fēng)濕中成藥中曲安西龍、氫化可的松和地塞米松的分析方法。方法樣品以甲醇進(jìn)行超聲提取，以O(shè)DS色譜柱分離，流動(dòng)相為乙腈：水(40∶60)；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為241nm；柱溫為40℃。結(jié)果各糖皮質(zhì)激素成分在2.75～44.00μg/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，r=0.9999，平均回收率為98.34%～98.41%。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于祛風(fēng)濕中成藥中曲安西龍、氫化可的松和地塞米松3種糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)。

高效液相色譜法；糖皮質(zhì)激素

在中成藥中擅自添加西藥成分，并隨意夸大療效，高價(jià)牟取暴利，為了打擊這種非法行為，本文建立了同時(shí)快速測(cè)定祛風(fēng)濕中成藥中3種糖皮質(zhì)激素的高效液相法色譜法，方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可應(yīng)用于祛風(fēng)濕中成藥的實(shí)際檢驗(yàn)工作。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Shimadzu LC-20AT 型高效液相色譜儀(日本)，包括SIL自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO柱溫箱、SPD二極管陣列檢測(cè)器；AE-240電子分析天平(瑞士Mettler)。

1.2 試藥 曲安西龍(批號(hào)100333-200201)、氫化可的松(批號(hào)100152-200206)地塞米松(批號(hào)100129-200804)均購于中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純(德國Merck)；水為超純水(韓國 Power Iplus 超純水系統(tǒng))；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1、2]色譜柱：LUBEX Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈∶水=40∶60，檢測(cè)波長(zhǎng)：241nm；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μl。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱取曲安西龍、地塞米松和氫化可的松適量，用甲醇溶解并稀釋成濃度約為55μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)母液。將此母液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為2.75、5.50、11.00、22.00、44.00μg/ml的使用溶液。

2.3 樣品溶液的制備 取樣品細(xì)粉約1g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液入離心管中，于10000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，取離心后的上清液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液待測(cè)。

2.4 線性關(guān)系及檢測(cè)限 使用“2.2項(xiàng)”中配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行上機(jī)分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得到各個(gè)組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)。具體見表1。

2.5 檢出限和定量限 以信噪比為3∶1時(shí)成分的量確定檢出限，以信噪比10∶1時(shí)成分的量確定定量限，各種糖皮質(zhì)激素的最低檢測(cè)限2.7～5.8ng，最低定量限為5.4～17.3ng。具體見表1。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度約為11.0μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10μl重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各激素峰面積的RSD為0.11%～0.57%，表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別于0、1、2，4、8h進(jìn)樣，測(cè)定三種成分的峰面積，RSD分別為0.74%、1.05%和0.89%，結(jié)果表明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 稱取試樣1g至50ml容量瓶中，平行6份，分別加入5ml 8.0μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照樣品處理方法制備待測(cè)溶液?；厥章史謩e為曲安西龍98.41%，RSD=0.69%；氫化可的松98.41%，RSD=0.67%；地塞米松98.34%，RSD=0.72%。

2.9 樣品分析 按本方法對(duì)祛風(fēng)濕類中成藥樣品共15件進(jìn)行了分析測(cè)定。結(jié)果表明，樣品中有3件樣品都含有部分上述成分，陽性檢出率為20%。

3 結(jié)論

本文所建立方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可在15min內(nèi)快速檢出，可很好的應(yīng)用于祛風(fēng)濕中成藥中曲安西龍、氫化可的松和地塞米松3中糖皮質(zhì)種激素的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中陽性樣品檢出率為20%，應(yīng)引起相關(guān)監(jiān)管部門的重視，加大查處力度。

[1]陳秋虹．抗風(fēng)濕類藥酒中糖皮質(zhì)激素的測(cè)定[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19 (5)：1153-1154．

[2]劉金燕，趙春杰，王超眾．抗風(fēng)濕類中成藥中添加糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)[J]．中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2008，9(6)：424-427．

吳立蓉(1980-)，女，博士，助理研究員，主要從事中藥的研究。E-mail：wlirong11@gmail.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)13-0015-01

2014.05.06)