基因芯片技術(shù)分析舒郁膠囊對抑郁癥肝氣郁結(jié)證大鼠模型的干預(yù)作用

徐凱勇，李自發(fā)，高 杰

（山東中醫(yī)藥大學(xué)1.實驗動物中心、2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東濟南 250355）

中醫(yī)認(rèn)為，抑郁癥基本機制是肝失疏泄，基礎(chǔ)證候是肝氣郁結(jié)，基本治療原則是調(diào)肝［1］。中藥舒郁膠囊主疏肝解郁、調(diào)暢情志，臨床證實療效確切。該復(fù)方主成分為柴胡皂苷可調(diào)理氣機、疏肝解郁。本研究通過慢性溫和應(yīng)激（CMS）刺激方法［2］，復(fù)制抑郁癥肝氣郁結(jié)證大鼠模型，通過基因芯片技術(shù)探討舒郁膠囊及其主成分柴胡皂苷的干預(yù)作用，篩選藥物作用基因靶點。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 Wistar大鼠60只，體質(zhì)量120～150 g，♂，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2002－0003。

1.2 藥物 舒郁膠囊（批號：2011L06107）和柴胡皂苷（批號：20110526）由青島陽光海川醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司提供；陽性藥：氟西汀膠囊（批號：H20050463）由禮來蘇州制藥有限公司提供。

1.3 抑郁癥肝氣郁結(jié)證大鼠模型復(fù)制及給藥 大鼠通過1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后，依據(jù)糖水偏好實驗與曠場實驗基線期數(shù)據(jù)分為5組，每組12只。即正常對照組（生理鹽水，1 ml／200 g）、抑郁癥肝氣郁結(jié)證模型組（生理鹽水，1 ml／200 g）、舒郁膠囊組（4.08 mg·kg－1）、柴胡皂苷組（0.72 mg·kg－1）、陽性藥對照組（氟西汀膠囊，2.67 mg·kg－1）；給藥與人當(dāng)量［3］，每天灌胃1次，連續(xù)4周。除正常對照組，其他組均給予CMS刺激4周。

1.4 基因芯片制備 取大鼠腦區(qū)海馬組織后；由上海康成生物工程有限公司制備基因芯片：Agilent Rat 4×44K Gene Expression Microarrays。

1.5 數(shù)據(jù)處理 通過Graphpad Prism 5.0軟件對糖水偏好實驗和曠場實驗數(shù)據(jù)進行雙因素方差分析。應(yīng)用GeneSpring GX v11.5.1軟件分析基因芯片數(shù)據(jù)獲取Ratio（Cy3／Cy5）比值，Volcano Plot方法篩選差異表達基因（Ratio值＞1.5）；并進行Pathway分析和GO分析。

2 結(jié)果

給藥發(fā)現(xiàn)，舒郁膠囊組、陽性藥對照組及柴胡皂苷組與模型組相比，曠場實驗得分均明顯升高（P＜0.05）；但給藥組間差異均無顯著性（P＞0.05）。舒郁膠囊組、陽性藥對照組與模型組相比，糖水偏好值均明顯升高（P＜0.05）；但兩給藥組間差異無顯著性（P＞0.05）。

基因芯片結(jié)果顯示，模型組與正常對照組相比，其差異表達基因為280個；舒郁膠囊組、陽性藥對照組及柴胡皂苷組與模型組相比，差異表達基因分別為248、2 208和643個。另外，舒郁膠囊、氟西汀膠囊、柴胡皂苷，改變GO分析中分子功能分別為55、190、110個，細(xì)胞組成分別為 43、169、122個，生物過程分別為235、928、699個；改變Pathway通路分別為 6、33、18個。

3 討論

本研究行為學(xué)測定結(jié)果中，3種藥針對抑郁癥肝氣郁結(jié)證的療效，氟西汀＞舒郁膠囊＞柴胡皂苷。前期，舒郁膠囊作為臨床療效確切的治療該證的中藥復(fù)方，未發(fā)現(xiàn)有臨床不良反應(yīng)，而其主成分柴胡皂苷卻有肝臟毒性［4］。另外，舒郁膠囊在GO分析和Pathway分析中都顯示出最低數(shù)量的基因功能改變，氟西汀膠囊對其改變最大，柴胡皂苷次之；說明舒郁膠囊對機體基因功能改變小，以致對機體生理生化及代謝過程影響小，與其未發(fā)現(xiàn)有臨床不良反應(yīng)相互印證。因此，舒郁膠囊較益于治療抑郁癥肝氣郁結(jié)證，且其作用機制可能與其精確改變基因表達及功能相關(guān)。

參考文獻：

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