苦參中活性成分研究*

厲博文，張思巨，智紅英，海麗娜，秦文杰，李安平

(1.北京振東光明藥物研究院有限公司，北京100120;2.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京100700)

復(fù)方苦參注射液由苦參、白土苓組成，具有鎮(zhèn)痛、止血、抗癌、提高免疫功能等作用［1］?？鄥閺?fù)方苦參注射液的君藥，豆科植物槐屬苦參(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，味苦，性寒，具有清熱燥濕、殺蟲利尿的功能，主治熱痢、便血、黃疸尿閉、赤白帶下、陰腫陰癢、濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢、疥癬麻風(fēng)等［2］。苦參主要含有生物堿和黃酮兩大類化合物，國內(nèi)外學(xué)者從中已分離得到了34個生物堿［3］、85個黃酮類［4－5］化合物。為闡明復(fù)方苦參注射液中有效物質(zhì)基礎(chǔ)，達到國家對中藥注射液的全面要求，須對君藥苦參的親水性成分做進一步研究?？鄥⒌纳飰A成分親水性強，已成為復(fù)方苦參注射液中主要的有效物質(zhì)，占總固量的±30%。本研究主要分離苦參中除生物堿以外的極性部位——黃酮苷類等化學(xué)成分，以充實復(fù)方苦參注射液的有效物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 藥品、試劑與儀器

苦參藥材，由山西振東集團中藥材開發(fā)公司提供，經(jīng)關(guān)扎根高級農(nóng)藝師鑒定為豆科槐屬植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根(栽培品)。薄層層析硅膠GF254，青島海洋化工廠產(chǎn)品;濃硫酸(批號20101012)、香草醛(批號20101208)和乙醇(批號20101106))均為分析純，北京化工廠產(chǎn)品，用以制備50 g/L硫酸香草醛溶液和100 mL/L硫酸乙醇溶液;三葉豆紫檀苷對照品，自制;降苦參酮和苦參酮對照品，由協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所石鉞老師饋贈;其他試劑均為分析純，北京化工廠產(chǎn)品。Avance DRX－500核磁共振儀，瑞士Bruker公司產(chǎn)品;Tensor 27型傅里葉紅外光譜儀，德國Bruker公司產(chǎn)品;BS－210S電子天平，德國Sartorius公司產(chǎn)品;RD－2熔點測定儀，天津市瑞萊特儀器有限公司產(chǎn)品;KQ－250DB超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

苦參飲片4.63 kg，950 g/L乙醇回流提取3次，濾過，濾液濃縮得950 g/L乙醇浸膏979 g。藥渣加500 g/L乙醇浸泡回流提取3次，濾過，濾液濃縮得500 g/L乙醇浸膏671 g。取500 g/L乙醇浸膏250 g，經(jīng)常壓硅膠柱層析分離，以乙酸乙酯－甲醇－水(10∶1∶0.1)洗脫，重結(jié)晶法分離、精制得到化合物I(98 mg)。取950 g/L乙醇浸膏196 g，經(jīng)常壓硅膠柱層析分離，以石油醚－乙酸乙酯(7∶3)洗脫，經(jīng)ODS柱色譜和重結(jié)晶法分離得到化合物Ⅱ(10 mg)、Ⅲ(20 mg)和Ⅳ(10 mg)，以石油醚－乙酸乙酯(8∶2)洗脫，結(jié)晶法分離得到化合物Ⅴ(10 mg)、Ⅵ(10 mg)、Ⅶ(50 mg)。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物I:白色粉末，熔點184～186℃，ESIMSm/z 194(M+)。1H-NMR(C5D5N，500 MHz):δ4.17(1H，t，J=9.3 Hz)，4.65(1H，t，J=9.3 Hz)為 l位，2 位的反式氫質(zhì)子信號;δ4.75(1H，q，J=9.2，3.6 Hz)，4.77(1 H，m)為與 l，2 位反式的 3，6位質(zhì)子信號;δ4.80(1H，m)，4.82(1H，m)為 4，5 位的氫質(zhì)子信號;δ3.95(3H，s)為一甲氧基質(zhì)子信號。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的松醇(pinitol)一致［14］，確定化合物I為松醇。

化合物II:白色結(jié)晶性粉末(丙酮)，熔點146～147 ℃，EI-MS m/z 446(M+)，UVλmax(MeOH)nm 310，285，213。1H-NMR(CD3COCD3，500MHz):δ7.38(1H，d，J=9.0Hz)，6.75(1H，dd，J=9.0 Hz，2.4 Hz)和 6.56(1H，d，J=2.4 Hz)信號為苯環(huán)上的3個氫信號，組成了1個 ABX系統(tǒng)，提示分子結(jié)構(gòu)中有三取代的苯環(huán)存在。而 δ6.92(1H，s)和 6.40(1H，s)為苯環(huán)上對位的氫信號，提示分子結(jié)構(gòu)中有四取代的苯環(huán)存在，δ5.94(1H，s)，5.90(1H，s)推測苯環(huán)上有一個連氧 CH2取代。δ4.96(1H，d，J=8.4Hz)為糖端基信號，由偶合常數(shù)知苷健構(gòu)型為β構(gòu)型，δ3.30～4.00之間的 6個氫信號為糖上質(zhì)子信號。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的三葉豆紫檀苷［4］一致。薄層色譜與三葉豆紫檀苷對照品以3個不同展開劑系統(tǒng)共展開，均為單一斑點，Rf值一致;HPLC檢查純度和保留時間，與三葉豆紫檀苷保留時間一致，鑒定化合物2為三葉豆紫檀苷。

化合物Ⅲ:白色粉末，熔點166～168℃，EI-MS m/z 424(M+)，UVλmax(MeOH)nm 290。與降苦參酮對照品共薄層對照，3個不同展開劑系統(tǒng)均為單一斑點，并與降苦參酮對照品Rf值一致，鑒定化合物Ⅲ為降苦參酮。

化合物Ⅳ:黃色粉末，熔點121～123℃，ESI-MS m/z 438(M+)，UVλmax(MeOH)nm 286。與苦參酮對照品共薄層展開，3個不同展開劑系統(tǒng)均為單一斑點，并且與苦參酮對照品Rf值一致，鑒定化合物Ⅳ為苦參酮。

化合物Ⅴ:白色粉末，熔點136～138℃，ESI-MS m/z 414(M+)，薄層對照Rf值一致，確認為β－谷甾醇，分子式為C29H50O。

化合物Ⅵ:白色粉末，熔點168～170℃，ESI-MS m/z 412(M+)，薄層對照Rf值一致，確認為豆甾醇。

化合物Ⅶ:白色粉末，熔點78～80℃，ESI-MS m/z 340(M+)，溶液的pH值=7，碘—碘化鉍鉀反應(yīng)陰性。與山崳酸圖譜對照一致，與山崳酸對照品共薄層層析，Rf值一致，確認為山崳酸。

3 討論

本研究采用硅膠柱、ODS柱色譜和重結(jié)晶法從苦參500 g/L的乙醇浸膏中分離得到了具有鎮(zhèn)咳殺菌活性的松醇［6］，為首次從槐屬植物中分離得到，在復(fù)方苦參注射液中含量為總固量的±2%;從950 g/L的乙醇提取物中又分離得到3個活性成分，分別是:具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抑菌藥效作用［7］的三葉豆紫檀苷，具有抗腫瘤、抗炎抗菌及抑酶作用［8－12］的苦參酮和對革蘭氏陽性菌具有較強抑制作用［13］的降苦參酮。

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