中藥新藥研發(fā)中原料藥材調(diào)查研究思路和方法
——以巴天酸模為例

周桂榮，郭寶林，鄂秀輝，李晴川，張?zhí)m蘭，樊慶魯，胡明勛

(1.天津天士力集團(tuán)研究院現(xiàn)代中藥研究所，天津 300410；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193;3.平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南 平頂山 467000)

中藥農(nóng)業(yè)

中藥新藥研發(fā)中原料藥材調(diào)查研究思路和方法
——以巴天酸模為例

周桂榮1，郭寶林2*，鄂秀輝1，李晴川1，張?zhí)m蘭1，樊慶魯2，胡明勛3

(1.天津天士力集團(tuán)研究院現(xiàn)代中藥研究所，天津 300410；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193;3.平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南 平頂山 467000)

目的：探討地方標(biāo)準(zhǔn)收載藥材作為新藥研發(fā)原料藥材資源的研究方法。方法：查閱資料和標(biāo)本，分析確定出主要分布區(qū)，制定調(diào)查路線；進(jìn)行野外初查，制定適合調(diào)查品種的野外調(diào)查方案。結(jié)果和結(jié)論：根據(jù)資源分布和數(shù)量調(diào)查結(jié)果確定出資源量集中的區(qū)域，采集用于質(zhì)量研究的樣本，歸納出影響藥材質(zhì)量的一些因素。

土大黃；巴天酸模；資源調(diào)查；中藥新藥

天津天士力制藥集團(tuán)有限公司在研新藥“腎炎1號(hào)片”來自于有效的醫(yī)院制劑。土大黃為方中君藥，為天津、北京、貴州、安徽等地方標(biāo)準(zhǔn)收載：天津標(biāo)準(zhǔn)中的來源植物為巴天酸模RumexpatientiaL.[1]；北京標(biāo)準(zhǔn)為巴天酸模和皺葉酸模R.crispusL.[2]；貴州標(biāo)準(zhǔn)為尼泊爾酸模R.nepalensisL.、齒果酸模R.dentatusL.、羊蹄R.crispusL.[3]；安徽標(biāo)準(zhǔn)為鈍葉酸模R.obtusifoliusL.[4]。文獻(xiàn)記載有11種分布較廣且使用頻率較高的酸模屬植物作為土大黃使用，藥材基源一直比較混亂[5]。本處方中的土大黃的來源待定，資源和質(zhì)量情況未知。本文介紹了地標(biāo)收載藥材“土大黃”資源研究，并以此為例探討中藥新藥研發(fā)中原料藥材研究的思路和方法。

1 基源確定

原醫(yī)院制劑中的土大黃來源為當(dāng)?shù)厥召?，故從收購地采集藥材原植物?biāo)本，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所郭寶林教授、黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)王振月教授、天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥教授均鑒定為蓼科Polygonaceae植物巴天酸模RumexpatientiaL.。

2 巴天酸模資源調(diào)查

調(diào)查的目的是搞清巴天酸模分布和資源量，初步找到有大量產(chǎn)出的區(qū)域；采集樣本，用于含量測定；調(diào)查混生植物和可能的藥材混亂情況，以便建立適合的鑒別方法。

2.1 分布區(qū)域調(diào)查

查閱《中國植物志》確定分布省，查閱各分布省和區(qū)域植物志、中國科學(xué)院植物研究所和中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所館藏標(biāo)本，并對標(biāo)本進(jìn)行簡單頻度分析，確定主要分布?。辉L問主要分布省的植物學(xué)家、中藥資源和生藥學(xué)家，確定出巴天酸模的分布區(qū)域：分布核心區(qū)在華北的河北(包括北京和天津)、山西、遼寧和內(nèi)蒙，以及該核心區(qū)域周邊，如東北的吉林、華中的河南、西北的陜西、青海，離核心區(qū)越遠(yuǎn)則資源減少，外圍分布地區(qū)有新疆、西藏、吉林、黑龍江、四川北部等地。分布特點(diǎn)：巴天酸模為常見植物，分布量大；易混淆物種：皺葉酸模，植物形態(tài)近似，藥材收購時(shí)有混入現(xiàn)象。

2.2 調(diào)查方案

查閱資料，查閱標(biāo)本，記錄標(biāo)本地名，進(jìn)行形態(tài)觀察測量，比較巴天酸模和調(diào)查地主要混生種皺葉酸模的形態(tài)特征，在北京進(jìn)行野外初查，確定適合生長環(huán)境，制定好調(diào)查方案，對調(diào)查人員進(jìn)行培訓(xùn)。

2.2.1 野外調(diào)查路線

分布核心區(qū)：山西、河北、遼寧、內(nèi)蒙派專人調(diào)查，調(diào)查資源數(shù)量，并采集樣品，每個(gè)省采集樣品5-10個(gè)，其中山西和河北為重點(diǎn)區(qū)域，擬定考察路線6條：①河北北部：遵化——承德——豐寧——赤誠——張家口——涿鹿縣——蔚縣——北京——天津——唐山；②山西北部：大同——渾源——靈丘——原平——寧武——朔州——五寨——岢嵐——太原；③內(nèi)蒙：包頭——鄂托克前旗——伊金霍洛旗——杭錦旗——包頭——小井溝——北京——赤峰巴林左旗——西烏旗——東烏旗——霍林郭勒；④河北和山西南部：山西長治——沁縣——武鄉(xiāng)——河北涉縣；⑤遼寧：遼寧鳳城——寬甸——桓仁——吉林通化——遼寧新賓；⑥天津——北戴河——撫寧。

分布外圍區(qū)：河南、陜西、青海、吉林，不進(jìn)行資源數(shù)量調(diào)查，請人代采樣品，每個(gè)地區(qū)采集1-4個(gè)樣品。

2.2.2 具體調(diào)查方案

生態(tài)特性：海拔20～4 000 m，易生長于河灘地、水洼地、河溝地、公路邊、村邊、地邊、草叢；土壤為壤土或沙壤土，全沙性或粘性土壤不生長；喜陽，不耐蔭，稍有蔭蔽的高灌叢下及稀樹下均不生長；喜水，保水性不好石礫沙性河灘地、有坡度的草坡均不生長；喜肥，路邊村邊有垃圾和渣土上容易生長。

生長特性：多年生草本，植株高大，平均高度高達(dá)1～1.5 m，春天3月底～4月初萌發(fā)，5～7月開花結(jié)實(shí)，6月底～7月初地上部分枯死，7～8月第二次萌發(fā)基生葉，10月二次萌發(fā)的地上部分枯死。調(diào)查時(shí)間為7～8月，高大枯死植株易于識(shí)別，便于進(jìn)行分布數(shù)量估測。

和混淆物種的主要區(qū)別特征：① 植株高度：巴天酸模高1～1.7 m；皺葉酸模高一般不超過1.2 m；② 花序形態(tài)：巴天酸?；ㄐ?yàn)閷挻蟮膱A錐花序，寬8～12 cm；皺葉酸模的圓錐花序狹窄，寬3～8 cm；③ 宿存花被片：巴天酸模果時(shí)增大的內(nèi)輪花被片寬大，寬5～6 mm；皺葉酸模內(nèi)輪花被片較窄小，寬3.5～5 mm。部分植物志中記錄巴天酸模葉片基部圓形或近心形，皺葉酸模為楔形[6]，但在標(biāo)本觀察中發(fā)現(xiàn)巴天酸模有時(shí)葉基部也為楔形，該特征是易變特征，不適用于區(qū)別兩個(gè)種。

數(shù)量調(diào)查方法：隨行觀察法，邊行邊看路邊、河床及其他自然環(huán)境中巴天酸模的分布數(shù)量和頻度，巴天酸模植株高大，在調(diào)查期間為黃褐色的枯萎狀，極容易辨識(shí)，識(shí)別距離可達(dá)500～700 m；訪問法，向曾進(jìn)行過該藥材收購的藥商詢問歷史收購量，向熟悉野生資源采集和收購的藥商詢問可能的收購估計(jì)量，向畜牧人員詢問分布和數(shù)量(巴天酸模是常見飼用草)，向一般百姓詢問分布和數(shù)量。

樣品采集和加工方法：每個(gè)縣1～2個(gè)采集點(diǎn)，兩個(gè)采集點(diǎn)間相距不少于20 km，每個(gè)采集點(diǎn)采挖10個(gè)單株的根，洗去泥土，稍晾帶回，切成1 cm的厚片晾干。

野外記錄：記錄采集人、采集小地名、采集日期，經(jīng)緯度、海拔高度、小環(huán)境、地方俗名、多度、當(dāng)?shù)厥欠?曾)有收購。

3 調(diào)查結(jié)果和結(jié)論

3.1 巴天酸模分布和資源量

調(diào)查的各省均有豐富的資源，但以河北和山西最多。遼寧鳳城和河北涉縣為土大黃(巴天酸模)的傳統(tǒng)收購地，20世紀(jì)90年代的歷史收購量均在80～100 t，其他具有類似資源數(shù)量的縣區(qū)有：河北豐寧、赤誠、撫寧，天津薊縣，山西寧武、五寨、武鄉(xiāng)、沁縣。

3.2 原植物標(biāo)本采集鑒定和藥材樣本采集

各個(gè)采集點(diǎn)均有原植物標(biāo)本和植物照片，經(jīng)鑒定均為巴天酸模。

不同產(chǎn)地巴天酸模藥材樣品60個(gè)：山西15個(gè)、河北17個(gè)、北京2個(gè)、天津3個(gè)、內(nèi)蒙6個(gè)、遼寧5個(gè)、吉林4個(gè)、河南3個(gè)、陜西1個(gè)、青海1個(gè)?；煜锓N皺葉酸模藥材樣品1個(gè)。經(jīng)藥材切片觀察，不同個(gè)體根斷面黃色深淺差別很大，對不同斷面顏色藥材分別取樣，獲樣品2個(gè)。

3.3 混淆藥材情況

所有調(diào)查區(qū)域中僅在河北涉縣和唐山采集到皺葉酸模，皺葉酸模野外分布數(shù)量極少，對未來藥材收購的影響可以忽略，僅建立巴天酸模的特征鑒別方法即可。

3.4 有害元素問題

巴天酸模常生長在比較潮濕、土壤較肥沃的地方，而且喜歡生長在人類生活區(qū)的垃圾、渣土之上，臭的排水溝、水塘周圍，提示我們污染物對該藥材質(zhì)量可能有影響，且有報(bào)道，酸模屬有些植物是污水凈化植物，可以選擇性的吸收水體或土壤中的重金屬[7]，故應(yīng)當(dāng)建立重金屬及有害元素限量標(biāo)準(zhǔn)。

3.5 藥材采收期問題

巴天酸模地上部分一年萌發(fā)兩次，本次調(diào)查在第二次萌發(fā)之前，也是傳統(tǒng)的采收時(shí)間之一，作為根莖類藥材，需要研究秋末春初采收期和仲夏采收期之間藥材的質(zhì)量差異，以確定最佳的采收期。

總之，藥材及其原植物的資源特別是野生資源的調(diào)查和研究一直是中藥研究較為薄弱的環(huán)節(jié)。對于每種特定的藥材資源，需要針對性地制定出有效的調(diào)查方案，本文只是其中一例，野生藥用植物資源數(shù)量調(diào)查尚沒有完善的方法可以遵循。本文對巴天酸模的調(diào)查沒有采納較為傳統(tǒng)的樣方法，原因在于樣方法雖然比較系統(tǒng)科學(xué)，但此方法首先要較為準(zhǔn)確地劃定目標(biāo)植物的生長環(huán)境在一定區(qū)域內(nèi)的面積比例，然后在該環(huán)境下進(jìn)行大量的樣方調(diào)查，才能獲得可靠的蘊(yùn)藏量數(shù)據(jù)，而這種比例的劃分以及足夠大的樣方數(shù)量在短時(shí)間內(nèi)均難以做到，因此常常是即使做了不少樣方，獲得數(shù)據(jù)誤差仍然很大。巴天酸模分布量大，資源豐富，而且作為制藥企業(yè)原料藥應(yīng)用，需求量不是很大，一般不需要十分全面而準(zhǔn)確的數(shù)量資料，滿足需求即可，因此提供了一種針對此種類型資源的簡易方法。本藥材的后續(xù)調(diào)查工作是根據(jù)質(zhì)量研究結(jié)果，在質(zhì)量好的藥材分布區(qū)域內(nèi)，再密集取樣，考察在地理分布區(qū)域內(nèi)的質(zhì)量可控性和影響質(zhì)量的主要因素。

[1] 天津食品藥品監(jiān)督管理局.天津市中藥飲片炮制規(guī)范(2005年版)[S]，天津：天津市衛(wèi)生局，2005：18-19.

[2] 北京市衛(wèi)生局.北京市中藥材標(biāo)準(zhǔn)(1998年版)[S]，北京：首都師范大學(xué)出版社，1998：4-6.

[3] 貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材，民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(2003年版)[S]，貴州：貴州科技出版社，2003：24.

[4] 安徽省食品藥品監(jiān)督管理局.安徽省中藥飲片炮制規(guī)范(2005年版)[S]，安徽：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，2005：57.

[5] 朱晶晶，王崢濤，張朝鳳，等.酸模屬植物中化學(xué)成分及其藥理活性研究進(jìn)展[J].中草藥，2008，5(3)：450.

[6] 北京師范大學(xué)生物系.北京植物志(上冊)[M].北京：北京出版社，1992，151，153-154

[7] 劉杰，張學(xué)洪，朱義年，等.兩個(gè)酸模種群對Cu2+積累和抗性的差異.生態(tài)環(huán)境，2006，15(2)：299-302.

The Investigations of Herbal Resources and Quality Control Method of Traditional Chinese Medicine New Drug：Take Rumex patientia L.as Example

ZHOU Guirong1，GUO Baolin2*，E Xiuhui1，LI Qingchuan1，ZHANG Lanlan1,FAN Qinglu2, HU Mingxun3

(1.TCMR&DInstituteofTaslyAcademy，Tianjin300410，China；2.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences，PeikingUnionMecicalCollege，Beijing100193，China;3.GeneralHospitalofPingdingshanCoalGroup,Pingdingshan467000,China)

Objective：To explore the research method of crude herb of the new drug which recorded by local standards.Methods：By accessing and analyzing the distributed data and specimens，the main distribution region was decided and the investigation route was made.Referring to the reports，specimens and field preliminary researches，the compatible investigation plan was determined.Results and Conclusion：The resources concentrated area was determined according to the distribution of resources and the investigation result.The samples used for quality control were collected，some factors affecting the quality of herb were elucidated.

RumexpatientiaL.;Resources investigation;Traditional Chinese Medicine new drug

*[通信作者] 郭寶林，博士，研究員，研究方向：藥用植物資源、鑒定、栽培，Tel：(010)57833172，E-mail：guobaolin010@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.01.007

2013-05-13)