PTTG和bFGF在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)

張耀明，周臻濤，鄧國明，羅宇峰

（梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科，廣東梅州514031）

PTTG和bFGF在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)

張耀明，周臻濤，鄧國明，羅宇峰

（梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科，廣東梅州514031）

目的探討垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（PTTG）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義。方法應(yīng)用免疫組化法檢測120例結(jié)直腸癌、30例結(jié)直腸腺瘤、30例正常結(jié)直腸黏膜組織中PTTG及bFGF的表達(dá)。結(jié)果結(jié)直腸癌組織中PTTG和bFGF陽性表達(dá)率明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織及正常結(jié)直腸黏膜組織（P均＜0.05）；結(jié)直腸癌組織中PTTG和bFGF陽性表達(dá)率均與結(jié)直腸癌Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均＜0.05）。結(jié)論PTTG和bFGF與結(jié)直腸癌生物學(xué)行為及預(yù)后有密切關(guān)系，兩者聯(lián)合檢測有助于結(jié)直腸癌惡性程度和預(yù)后的判斷。

結(jié)直腸癌；垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因；堿性成纖維細(xì)胞生長因子；免疫組化

結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，目前已發(fā)現(xiàn)多種基因與其生物學(xué)特性有關(guān)，1999年發(fā)現(xiàn)的原癌基因垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（pituitary tumor transforming gene，PTTG）高表達(dá)在促進(jìn)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著十分重要作用［1］。該原癌基因在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中作用如何，迄今國內(nèi)外少有報道。血管新生是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移過程中一個關(guān)鍵限速步驟，堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是強(qiáng)烈的內(nèi)皮細(xì)胞和管壁結(jié)締組織的促生長因子，可促進(jìn)腫瘤新生血管的形成。體外實驗［2］結(jié)果證實，PTTG能直接引起bFGF mRNA及其蛋白水平增加，刺激bFGF蛋白合成和分泌。作者利用免疫組化法檢測結(jié)直腸癌組織中PTTG及bFGF的表達(dá)情況，探討兩者與結(jié)直腸癌的臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象收集我院腫瘤外科2008年1月至2008年12月經(jīng)手術(shù)切除的結(jié)直腸癌標(biāo)本120例，患者年齡32～88（59.7±11.9）歲，男74例，女46例，男女之比為1.7∶1；所有患者術(shù)前均未接受過放療和化療等新輔助治療；組織類型：高分化腺癌21例，中分化腺癌64例，低分化腺癌35例；腫瘤直徑：≥5 cm 69例，＜5 cm 51例；腫瘤部位：結(jié)腸癌43例，直腸癌77例；Dukes分期：A期23例，B期48例，C期37例，D期12例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：未轉(zhuǎn)移72例，轉(zhuǎn)移48例；手術(shù)方式：根治性切除術(shù)94例，擴(kuò)大根治性切除術(shù)18例，姑息手術(shù)8例。另取手術(shù)切除結(jié)直腸腺瘤組織、手術(shù)切緣正常結(jié)直腸黏膜組織標(biāo)本各30例作為對照，患者年齡20～71（51.0±14.5）歲，男19例，女11例，男女之比為1.9∶1。術(shù)后均有明確的病理診斷，免疫組化染色之前，HF染色切片經(jīng)資深病理科醫(yī)生再次確診。

1.2 主要試劑兔抗人PTTG多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，鼠抗人bFGF單克隆抗體、S-P試劑盒、DAB顯色系統(tǒng)購自福州邁新生物技術(shù)公司。PTTG多抗及bFGF單抗的工作濃度均為1∶100。

1.3 檢測方法全部標(biāo)本制成4 μm厚的切片，常規(guī)脫蠟，充分水化；檸檬酸熱抗原修復(fù)，蒸餾水洗5 min，重復(fù)3次；用體積分?jǐn)?shù)3%H2O2作用10 min，除去內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育12 min，蒸餾水洗5 min，重復(fù)2次；PBS洗5 min，重復(fù)3次，滴加正常山羊血清封閉液即用液，室溫孵育2 h；滴加稀釋好的一抗（臨時配制），4℃孵育過夜；PBS洗5 min，重復(fù)3次，滴二抗即用液，室溫孵育30 min；PBS洗5 min，重復(fù)3次，滴加SABC即用，室溫孵育30 min；PBS洗5 min，重復(fù)3次。滴加DAB顯色劑，顯微鏡下觀察，自來水及時終止染色；蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。另外，用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷采用雙盲法由2名病理科醫(yī)生均在不知臨床資料的情況下，對免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行評估。陽性細(xì)胞必須具備：細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，陽性染色定位準(zhǔn)確，著色明顯高于背景。在低倍（×100）鏡下觀察切片著色情況，隨機(jī)選取上下左右中5個部位，分別在高倍（×400）鏡下計數(shù)。每個視野計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞中陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)。綜合5個視野的細(xì)胞數(shù)，計算平均值。根據(jù)顯色深淺程度及陽性細(xì)胞數(shù)，分別進(jìn)行評分。顯色程度：不顯色或顯色不清楚為0級；土黃色為1級；棕黃色為2級；深褐色為3級。陽性細(xì)胞百分率：無細(xì)胞顯色或陽性細(xì)胞的百分率≤5%為0級；＞5%～35%細(xì)胞顯色為1級；＞35%～65%細(xì)胞顯色為2級；＞65%細(xì)胞顯色為3級。2種評分的平均值作為該切片的最終評分。根據(jù)最終評分結(jié)果，將0、0.5～1.0、1.5～2.0、2.5～3.0分別定為（-）、（+）、（++）和（+++）。其中（-）為陰性，（+）、（++）和（+++）為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中PTTG和bFGF的表達(dá)兩者陽性表達(dá)位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)，呈彌漫性或灶性分布，腫瘤間質(zhì)及炎癥細(xì)胞見不規(guī)則弱陽性分布。120例結(jié)直腸癌組織中PTTG陽性表達(dá)率為84.17%（101/120），bFGF陽性表達(dá)率為69.17%（83/120）。30例結(jié)直腸腺瘤組織中PTTG陽性表達(dá)率為26.67%（8/30），bFGF陽性表達(dá)率為30.00%（9/30）。30例正常結(jié)直腸黏膜組織中PTTG陽性表達(dá)率為6.67%（2/30），bFGF陽性表達(dá)率為10.00%（3/30）。結(jié)直腸癌組織中PTTG和bFGF陽性表達(dá)率明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織及正常結(jié)直腸黏膜組織（P均＜0.05）。

2.2 PTTG和bFGF的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系結(jié)直腸癌組織中PTTG和bFGF陽性表達(dá)率均與結(jié)直腸癌Dukes分期的高低有關(guān)，Dukes分期中，C期+D期與A期+B期間PTTG和bFGF陽性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)直腸癌組織中PTTG和bFGF陽性表達(dá)率均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者PTTG和bFGF表達(dá)水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例（P＜0.05）。PTTG和bFGF陽性表達(dá)率均與病理類型、腫瘤部位、腫瘤直徑等無關(guān)（P＞0.05）。

3 討論

PTTG是一個強(qiáng)有力的細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因，無需其他原癌基因的參與下可使細(xì)胞轉(zhuǎn)化，可通過多途徑參與腫瘤的病理過程，促進(jìn)其他原癌基因的表達(dá)，干擾姊妹染色單體分離，與腫瘤的侵襲性、惡性程度密切相關(guān)［3-4］。bFGF是一種具有廣泛生物活性的肽類物質(zhì)，其與酪氨酸激酶受體結(jié)合后，通過自分泌和（或）旁分泌的形式促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖，可以調(diào)節(jié)血管形成及神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育等。崔虎嘯等［5］利用免疫組化法研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌組織中bFGF表達(dá)明顯高于正常肝組織（P＜0.05），亦高于癌旁組織（P＜0.05），bFGF表達(dá)與肝癌的臨床分期有關(guān)（P＜0.05），bFGF高表達(dá)促進(jìn)了肝癌微血管的形成，促進(jìn)腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。林稱意等［6］應(yīng)用免疫組化S-P法檢測PTTG和bFGF在48例食管鱗癌組織和癌旁正常食管組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示48例食管鱗癌組織中PTTG和bFGF的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常食管組織（P＜0.05），PTTG和bFGF的表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（P＜0.05）。本文結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中PTTG、bFGF陽性表達(dá)率均高于結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)直腸黏膜組織（P＜0.05）；PTTG和bFGF陽性表達(dá)率均與結(jié)直腸癌 Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。該結(jié)果提示高表達(dá)的PTTG和bFGF可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其機(jī)制可能是PTTG高表達(dá)直接引起了細(xì)胞轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致結(jié)直腸癌的發(fā)生［1］；bFGF可能通過自分泌和（或）旁分泌作用于腫瘤細(xì)胞，刺激腫瘤血管的生成，為腫瘤提供營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)腫瘤的生長、發(fā)展。PTTG與bFGF可能成為反映結(jié)直腸癌生物學(xué)行為及侵襲性的重要指標(biāo)，但其參與機(jī)制尚有待于進(jìn)一步深入研究。

［1］ Zhang X，Horwitz GA，Prezant TR，et al.Structure，expression，and function of human pituitary tumor-transforming gene（PTTG）［J］. Mol Fndocrinol，1999，13（1）：156-166.

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［3］ Mu YM，Oba K，Yanase T，et al.Human pituitary tumor transforming gene（hPTTG）inhibits human lung cancer A549 cell growth through activation of p21（WAF1/CIP1）［J］.Fndocr J，2003，50（6）：771-781.

［4］ Yu R，Melmed S.Pituitary tumor transforming gene：an update［J］. Front Horm Res，2004，32：175-185.

［5］ 崔虎嘯，宋德霸，王萬鵬，等.人肝細(xì)胞肝癌中PLGF、bFGF和MVD的表達(dá)及意義［J］.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2009，22（2）：93 -95.

［6］ 林稱意，郭家龍，左順慶，等.食管鱗狀細(xì)胞癌中PTTG和bFGF的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系［J］.世界華人消化雜志，2008，16（21）：2399-2403.

Expression of PTTG and bFGF in the Colorectal Cancer

Zhang Yaoming，Zhou Zhentong，Deng Guomig，Luo Yufeng
（The First Department of Tumor Surgery，Meizhou People’s Hostipal，Meizhou 514031，China）

ObjectiveTo investigate the expression and significance of pituitary tumor transforming gene（PTTG）and basic fibroblast growth factor（bFGF）in the colorectal cancer.MethodsPTTG and bFGF were examined in the 120 cases of colorectal cancer，the 30 cases of colorectal adenoma and 30 cases of normal colorectal mucosa by immunohistochemical assay.ResultsThe positive rates of PTTG and bFGF in the colorectal cancer were significantly higher than those of the colorectal adenoma and the normal colorectal mucosa（P＜0.05）.The positive expression rates of PTTG and bFGF were significantly correlated to the Dukes staging and lymph node metastasis of colorectal cancer（P＜0.05）.ConclusionPTTG and bFGF are highly related to the biological behavior and prognosis of colorectal cancer，combined detection of PTTGa nd bFGF may help to judge the malignant degree and prog-nosis of colorectal cancer.

colorectal cancer；pituitary tumor transforming gene；basic fibroblast growth factor；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.006

R735.3；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0202-03

2013-01-09）

張耀明（1974-），男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤研究。F-mail：bluesky01@tom.com

周臻濤（1979-），男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤研究。F-mail：zhouzhentao99@126.com