外周血循環(huán)DNA在卵巢癌中研究進(jìn)展

閆立志宋芳郝金奇余艷琴

(1.包頭醫(yī)學(xué)院，014060；2.內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院，010059)

卵巢癌是嚴(yán)重威脅女性健康的的惡性腫瘤之一，由于缺少有效的早期診斷方法，其死亡率一直居?jì)D科腫瘤之首，且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。由于卵巢癌發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，缺乏有效的早期診斷方法和篩查指標(biāo)，確診的卵巢癌患者約70%已屬晚期[1]。目前，臨床最常用的診斷指標(biāo)是血清學(xué)標(biāo)志CA-125，多用于卵巢癌診斷及療效觀察[2]。但CA-125敏感性和特異性在卵巢癌不同分期、分型各不相同，預(yù)后判斷價(jià)值是有限的，迫切需要尋找新型生物標(biāo)志物[3]。循環(huán)DNA檢測(cè)對(duì)卵巢癌的特異性基因進(jìn)行確定具有重要的臨床意義，是一種很有潛力的指標(biāo)，有可能成為卵巢癌的早期診斷、療效評(píng)估和預(yù)后判斷等方面新的腫瘤標(biāo)志物。

1 循環(huán)DNA研究進(jìn)展

循環(huán)DNA是一種存在于血液及體液中的游離DNA。循環(huán)DNA在20世紀(jì)40年代前就已被發(fā)現(xiàn)[4]，由于缺乏高靈敏性和高特異性的分離方法，在較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)血中游離DNA與疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展緩慢，直到在近二十年P(guān)CR等檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，使得這一領(lǐng)域有了較快的發(fā)展。正常人血液中存在微量游離DNA，在某些疾病狀態(tài)下，循環(huán)DNA有不同程度的增高，尤其在腫瘤患者循環(huán)DNA濃度明顯高于正常人[5]。伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤患者其濃度高于病灶局限者[6]。在癌癥患者的血漿中檢測(cè)循環(huán)DNA有利于早期癌癥的診斷和預(yù)測(cè)腫瘤的發(fā)生；母體血漿中的定量分析循環(huán)DNA可用于檢測(cè)某些胎兒發(fā)育異常；在移植監(jiān)測(cè)和移植排斥反應(yīng)的評(píng)估方面也取得了新的進(jìn)展；在創(chuàng)傷和燒傷的嚴(yán)重程度分層等循環(huán)DNA研究也已經(jīng)取得了可喜的成果，這些研究都提示循環(huán)DNA與疾病有著相關(guān)性[7]。Jylhv J等[8]調(diào)查發(fā)現(xiàn)循環(huán)DNA與一些代謝性疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，使用熒光檢測(cè)等高靈敏度技術(shù)定量檢測(cè)循環(huán)DNA，發(fā)現(xiàn)高水平的循環(huán)DNA與代謝疾病風(fēng)險(xiǎn)和早期動(dòng)脈硬化相關(guān)。Nicolaides等[9]研究母體血液循環(huán)DNA，證實(shí)循環(huán)DNA的染色體選擇性測(cè)序分析可以篩查胎兒染色體非整倍體性，而且具有相當(dāng)高的靈敏度。Huang等[10]研究肝癌患者循環(huán)DNA中檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4A(INK4A)啟動(dòng)子甲基化，發(fā)現(xiàn)與良性肝病相比肝細(xì)胞癌INK4A甲基化現(xiàn)象明顯，表明了循環(huán)DNA在肝癌的診斷等方面是一種很有潛力的生物標(biāo)志物。在疾病的預(yù)后監(jiān)測(cè)及復(fù)發(fā)檢測(cè)，Wroclawski等[11]人研究病理確診或懷疑為前列腺癌血漿循環(huán)DNA，評(píng)估其在前列腺癌的診斷和潛在的預(yù)后價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)，一些腫瘤患者血漿中循環(huán)DNA具有與腫瘤組織中DNA相一致的分子遺傳學(xué)改變，如DNA鏈穩(wěn)定性的下降、癌基因與抑癌基因的突變、抑癌基因啟動(dòng)子的高甲基化以及微衛(wèi)星不穩(wěn)定與雜合性缺失等[12]。Gormally等[13]研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)DNA可在疾病診斷之前就被檢測(cè)出來，在很大程度上增加了其作為腫瘤診斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)指標(biāo)的可能性。此外，研究還顯示血中循環(huán)DNA與腫瘤的轉(zhuǎn)移有密切的聯(lián)系[14]。

2 循環(huán)DNA在卵巢癌中的應(yīng)用

卵巢癌90%～95%為原發(fā)性，由于卵巢癌早期癥狀表現(xiàn)多不明顯，不易被發(fā)現(xiàn)，易轉(zhuǎn)移，預(yù)后差等特點(diǎn)，在婦科惡性腫瘤死亡率最高，但如果能夠早期診斷、及時(shí)治療，卵巢癌Ⅰ期5年存活率可達(dá)90%以上，Ⅱ期在70%～80%。循環(huán)DNA作為很有潛力的腫瘤標(biāo)志物，有助于卵巢癌早期診斷、預(yù)后判斷及腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)分析[15-16]。檢測(cè)外周血中微量循環(huán)DNA的改變可反映腫瘤原發(fā)灶的特征。Kamat等[6]定量提取血漿循環(huán)DNA，熒光染色法定量，比較良、惡性腫瘤患者與健康人血漿循環(huán)DNA水平，存在顯著差異。此外，研究表明循環(huán)DNA在監(jiān)測(cè)卵巢癌療效的評(píng)價(jià)及轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有著重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與血漿循環(huán)DNA水平具有一定的相關(guān)性，血中循環(huán)DNA水平較高的患者，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移腫瘤病灶的幾率同樣較高[17]。因此檢測(cè)卵巢癌患者血漿DNA有可能作為一種反映患者分期以及預(yù)后的分子標(biāo)志而應(yīng)用于臨床實(shí)踐，有可能成為一種新的惡性腫瘤標(biāo)志物。

3 循環(huán)DNA檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)

腫瘤標(biāo)記物測(cè)定在卵巢癌的早期診斷及病情監(jiān)測(cè)中有著重要的價(jià)值[18-20]。循環(huán)DNA作為一種很有潛力的指標(biāo)，有較好重現(xiàn)性，在癌癥的早期具有一定敏感性。標(biāo)本獲取方面比較便利，可連續(xù)采集易于隨訪追蹤，避免了直接利用腫瘤標(biāo)本進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)。腫瘤病理標(biāo)本不僅標(biāo)本來源存在一定的局限性，此外，還可避免細(xì)針穿刺包塊吸取細(xì)胞而引起囊液外溢及癌細(xì)胞擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。

4 結(jié)語

綜上所述，循環(huán)DNA檢測(cè)具有標(biāo)本采集便利、快捷、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)無癥狀的卵巢癌患者有可能成為早期診斷指標(biāo)。通過定量分析循環(huán)DNA還可診斷腫瘤微小轉(zhuǎn)移和早期復(fù)發(fā)，為療效評(píng)價(jià)、制定治療方案及預(yù)后判斷提供了證據(jù)，提高卵巢癌治愈率。但作為一個(gè)有效的腫瘤標(biāo)志物還存在不足之處，比如特異性不夠理想，易產(chǎn)生假陽性等。因此，循環(huán)DNA發(fā)展成為一個(gè)有效的可用于臨床常規(guī)檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物還需進(jìn)一步的研究。

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