乳腺癌組織中ADAM家族的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值

原慶會(huì) 何 偉 王安群 楊永紅

乳腺癌組織中ADAM家族的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值

原慶會(huì)①何 偉②*王安群①楊永紅①

目的：研究乳腺癌組織中解聚素-金屬蛋白酶(ADAM)家族的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值。方法：選擇120例乳腺癌患者并將其分為觀察組(腫瘤分期為TNMⅠ、TNMⅡ、TNMⅢ、TNMⅣ)和對(duì)照組(選擇乳腺活檢陰性患者)。收集乳腺癌組織并檢測(cè)ADAM9、10及17的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白含量。結(jié)果：觀察組患者乳腺癌組織中ADAM9、10及17的蛋白和mRNA含量均高于對(duì)照組，且呈現(xiàn)出TNMⅠ＞TNMⅡ＞TNMⅢ＞TNMⅣ期；蛋白含量與TNM分期呈正相關(guān)。結(jié)論：乳腺癌組織中ADAM9、10及17的表達(dá)量與臨床病理分期密切相關(guān)，ADAM9、10及17表達(dá)越多，TNM分期越差。

乳腺癌；解聚素-金屬蛋白酶；病理分期

[First-author’s address] The Central Hospital of Mianyang, Mianyang 621000, China.

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，由于受限于篩查技術(shù)，早期發(fā)現(xiàn)和診斷的情況并不理想。針對(duì)惡性腫瘤局部侵潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特征來探尋有效的輔助檢查手段和指標(biāo)成為近年來研究的熱點(diǎn)。解聚素-金屬蛋白酶(adisintegrin and metalloproteinase，ADAM)是一類與腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)的糖蛋白類物質(zhì)，本研究分析乳腺癌組織中ADAM家族的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值，旨在為探尋乳腺癌早期診斷的指標(biāo)提供更多理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年5月至2012年9月間綿陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的120例乳腺癌患者，作為本次回顧性研究的觀察組，其年齡41～59歲，平均(53.7±8.33)歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：①明確的乳腺癌診斷；②行乳腺癌根治術(shù)；③取得患者知情同意。根據(jù)輔助檢查及術(shù)中情況從原發(fā)腫瘤(T)、區(qū)域淋巴結(jié)(N)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(M)3方面判斷患者的TNM分期情況，包括TNMⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期。4期患者一般資料相比無差異具有可比性。選擇同期行乳腺組織活檢呈陰性的50例患者作為對(duì)照組，其年齡40～60歲，平均年齡為(51.7±7.92)歲。

1.2 檢查方法

(1)樣本收集。術(shù)中收集腫瘤組織，裝入凍存管后立即投入液氮，10 min后取出，-80 ℃保存。

(2)ADAM家族的信使核糖核酸(messenger RNA，mRNA)水平檢測(cè)。取乳腺癌組織約60 mg，加入Trizol裂解液后充分勻漿，而后采用mRNA柱式提?。崔D(zhuǎn)錄試劑盒(天根生物公司)合成cDNA第一鏈。mRNA水平檢測(cè)時(shí)，采用熒光定量PCR試劑盒(天根生物公司)，擴(kuò)增體系：cDNA 2 μl、含染料的反應(yīng)液10 μl、上下游引物各0.4 μl、去離子水7.2 μl。分別擴(kuò)增看家基因actin及目的基因ADAM9、10及17，以TNMⅠ期患者腫瘤組織中目的基因mRNA的含量為100，通過ΔΔCt計(jì)算其余3組患者腫瘤組織中目的基因的mRNA含量。

(3)ADAM家族的蛋白水平檢測(cè)。取乳腺癌組織約60 mg，加入蛋白裂解液后充分勻漿并離心，取上清16 μl加入4×4 μl(上樣緩沖液)、10×2 μl(DTT)。按照配方配置4%的濃縮膠和10%的分離膠，點(diǎn)樣后進(jìn)行100 V，20 min；120 V，90 min的垂直電泳，而后取出凝膠后進(jìn)行100 V，90 min的電轉(zhuǎn)膜。完成后，保留NC膜，加入5%脫脂牛奶、室溫封閉2 h，而后TBST震蕩洗滌5 min×3(遍)，加入兔來源的ADAM9、10及17第一抗體(Epitomic公司)和小鼠來源的antin第一抗體(Sigma公司)、4 ℃搖床孵育過夜。第2 d取出NC膜，TBST洗5 min×3(遍)后加HRP標(biāo)記的種屬特異性第二抗體、室溫孵育2 h，最后進(jìn)行顯影。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示、用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析進(jìn)行比較；相關(guān)性分析采用以TNM分期為自變量的單因素回歸分析，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同TNM分期腫瘤組織中ADAM9、10及17的表達(dá)情況觀察組患者的ADAM9、10及17的蛋白和mRNA含量均高于對(duì)照組，且不同TNM分期組織中ADAM9、10及17的蛋白和mRNA含量均呈現(xiàn)出TNMⅠ＞TNMⅡ＞TNMⅢ＞TNMⅣ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) (見表1、如圖1所示)。

圖1 正常組織和乳腺癌組織中ADAM9、10及17的蛋白表達(dá)情況

2.2 兩組患者ADAM含量與TNM分期的相關(guān)性

以乳腺癌的TNM分期做為應(yīng)變量，對(duì)ADAM9、10及17的蛋白水平進(jìn)行單因素回歸分析可知，ADAM9、10及17的蛋白含量與TNM分期呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r2=0.523，r2=0.572，r2=0.492；P＜0.05)(見表2)。

表1 兩組患者腫瘤組織中ADAM9、10及17的表達(dá)情況比較

表2 兩組患者ADAM含量與TNM分期的相關(guān)性分析

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，占女性惡性腫瘤的25%～30%，對(duì)患者的生活質(zhì)量和生命安全均造成極大影響。我國(guó)乳腺癌的發(fā)病特點(diǎn)為發(fā)病率快速增加、病死率居高不下，是臨床診療的難點(diǎn)和重點(diǎn)[1-2]。近年來，隨著醫(yī)療衛(wèi)生水平的不斷進(jìn)步和人民健康意識(shí)的逐步提高，乳腺癌受到了越來越多的重視，相應(yīng)的篩查手段也得到了推廣。但是，常規(guī)的篩查手段B超和鉬靶檢查對(duì)于早期較小乳腺病灶并不敏感，因此乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)和診斷情況仍不理想。惡性腫瘤最大的生物學(xué)特點(diǎn)是局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，針對(duì)該特點(diǎn)尋找相應(yīng)的乳腺癌早期診斷方法成為了近年來相關(guān)研究的熱點(diǎn)[3]。

腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及腫瘤組織本身、腫瘤間組織以及腫瘤外組織相互作用的復(fù)雜過程，該過程包含了大量的細(xì)胞因子及其相關(guān)的信號(hào)通路，例如基質(zhì)蛋白酶、黏附分子、整合素及解聚素等[4-5]。ADAM是位于細(xì)胞膜表面的糖蛋白家族類物質(zhì)，包含了金屬蛋白酶和解聚素兩種結(jié)構(gòu)域[5]。目前已有研究報(bào)道，ADAM家族中的ADAM9、10及17的異常表達(dá)與腫瘤的局部侵潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6-7]。一方面，ADAM分子可發(fā)揮金屬蛋白酶的活性，參與各類細(xì)胞因子的加工及細(xì)胞外基質(zhì)的降解[8]；另一方面，ADAM分子可發(fā)揮解聚素的功能，參與腫瘤細(xì)胞的粘附和定植過程[9]。通過檢測(cè)ADAM家族中相關(guān)分子的表達(dá)情況能夠反映腫瘤的侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力，進(jìn)而對(duì)疾病的整體情況作出判斷[10]。

有研究發(fā)現(xiàn)，通過siRNA的方法敲低乳腺癌細(xì)胞株MCF-7中ADAM10、17的表達(dá)，能夠抑制細(xì)胞的增殖和侵襲能力，說明ADAM家族的確參與了乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程[11]。本研究檢測(cè)了乳腺癌組織中ADAM家族中ADAM9、10及17的mRNA和蛋白表達(dá)情況，進(jìn)而通過分析其含量與TNM分期的關(guān)系來探討ADAM家族表達(dá)水平檢測(cè)對(duì)于判斷乳腺癌病情的臨床價(jià)值。比較不同TNM分期乳腺癌患者的ADAM9、10及17水平，通過Real-time PCR和western blot的檢測(cè)可知，上述3種分子的蛋白和mRNA水平均呈現(xiàn)出TNMⅠ＞TNMⅡ＞TNMⅢ＞TNMⅣ期，說明腫瘤分期越差、浸潤(rùn)越深，ADAM家族的局部表達(dá)越多。

由此可以初步推測(cè)ADAM家族的表達(dá)與乳腺癌的臨床病理分期密切相關(guān)。為了進(jìn)一步明確這一假設(shè)，本研究以乳腺癌患者的TNM分期做為應(yīng)變量，對(duì)ADAM9、10及17的蛋白水平進(jìn)行單因素回歸分析。結(jié)果顯示，ADAM9、10及17的蛋白表達(dá)情況與TNM分期呈正相關(guān)。通過這一結(jié)果可以明確乳腺癌組織中ADAM家族的表達(dá)情況與臨床病理分期之間密切相關(guān)，其含量越高，臨床病理分期越差[12]。

綜合以上討論和分析，可以得出上述回顧性研究的結(jié)論：乳腺癌組織中ADAM9、10及17的表達(dá)量與臨床病理分期密切相關(guān)，ADAM9、10及17表達(dá)越多，TNM分期越差。

[1]楊雯靖，張雪鵬，焦桂梅.ADAM17-siRNA抑制人MCF-7乳腺癌細(xì)胞體外侵襲能力的研究[J].天津醫(yī)藥，2011，39(11)：1045-1047.

[2]周兆海.乳腺癌C-erbB-2、EGFR、PCNA和DNA含量與化療及預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備，2008，5(5)：51-53.

[3]王麗，翟仁友，蔣濤，等.乳腺疾病動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI半定量參數(shù)與微血管密度的相關(guān)性[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，2007，23(3)：388-392.

[4]劉明霞，唐志全，張藝軍.3T磁共振高分辨動(dòng)態(tài)增強(qiáng)診斷小癌的應(yīng)用研究[J].醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2011，21(9)：1349-1353.

[5]姜蕾，周意明，陳敏，等.功能磁共振成像早期評(píng)估乳腺癌新輔助化療療效的臨床研究[J].中華乳腺病雜志，2011，5(3)：5-10.

[6]韓旭，楊星飛，張雪鵬，等.ADAM17在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)綜合雜志，2010，9(20)：2486-2488.

[7]孫澤輝，張雪鵬，韓旭，等.ADAM17與HER-2在乳腺癌中表達(dá)的意義及相關(guān)性[J].廣東醫(yī)學(xué)，2012，33(10)：1400-1403.

[8]Ko EY，Han BK，Shin JH，et a1.Breast MRI for evalμatingpatients with metastatic axillary lymph node and initially negative mammography and sonography[J].Korean J Radiol，2007，8(5)：382-389.

[9]甄樂鋒，葉長(zhǎng)生，劉民鋒.青年乳腺癌中ER、PR、HER-2及VEGF表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2010，31(4)：490-492.

[10]劉艷，張瑾，郝曉甍.乳腺癌Her-2基因過表達(dá)與年齡臨床病理狀態(tài)的相關(guān)性研究[J].中國(guó)腫瘤臨床，2007，34(24)：1392-1394.

[11]錢宏美，李俊生，張亞男.ADAM9在乳腺癌中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2010，17(9)：927-931.

[12]黃巍，李小鷗，周麗榮，等.ADAM10真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)MCF-7增殖遷移的影響[J].免疫學(xué)雜志，2012，28(6)：484-488.

Research on the expression of ADAM in breast cancer and its clinical value

/YUAN Qing-hui, HE Wei, WANG An-qun, et al// China Medical Equipment,2014,11(8):104-106.

Objective: To study the expression of ADAM in breast cancer and its clinical value. Methods: breast cancer patients were selected as observation group and divided into TNM Ⅰ, TNM Ⅱ, TNM Ⅲ, TNM Ⅳ, breast biopsy negative patients were collected as control group. Then breast cancer tissues were collected and mRNA and protein level of ADAM9, 10, 17 were detected. Results: The protein and mRNA level of ADAM9, 10, 17 of observation group were higher than control group and showed TNM Ⅰ, TNM Ⅱ, TNM Ⅲ, TNM Ⅳ; protein level was positively correlated with TNM stage. Conclusion: Expression of ADAM9,10, 17 are closely related clinical pathologic stage, and as the expression of ADAM9, 10, 17 higher, the TNM stage gets worse.

Breast cancer; Adisintegrin and metalloproteinase; Pathological stage

1672-8270(2014)08-0104-03

R737.9

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2014.08.037

2013-07-22

①綿陽(yáng)市中心醫(yī)院病理科 四川 綿陽(yáng) 621000

②綿陽(yáng)市中心醫(yī)院麻醉科 四川 綿陽(yáng) 621000

*通訊作者：hewei5413@163.com

原慶會(huì)，女，(1977- )，本科學(xué)歷，主治醫(yī)師。綿陽(yáng)市中心醫(yī)院病理科，研究方向：細(xì)胞病理學(xué)。