藏藥十五味乳鵬散鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究

寇毅英， 李永芳， 楊 梅， 李瑞蓮

(青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青海 西寧810001)

藏藥十五味乳鵬散，藏名畢瓊久埃日布，由乳香、決明子、黃葵子、毛訶子、木香、余甘子、安息香、訶子等生長(zhǎng)在高寒缺氧的雪域藥材組成，是藏醫(yī)治療關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、關(guān)節(jié)腔積水諸證的古方［1］，《四部醫(yī)典》、 《藏醫(yī)札記》均有十五味乳鵬散“痛風(fēng)黃水部分閃痛除”的記載［2-3］，至今已有一千多年的歷史。目前十五味乳鵬散是藏醫(yī)治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的首選藥，臨床療效觀察其效果顯著［4-5］。但它的研究?jī)H限于臨床資料的積累，缺乏科學(xué)的實(shí)驗(yàn)資料，為進(jìn)一步探討其藥效學(xué)，本課題組通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察藏藥十五味乳鵬散鎮(zhèn)痛、抗炎的療效，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 購自青海省藏醫(yī)院，十五味乳鵬散低、中、高劑量組混懸液的制備按照成人用量的10、20、30 倍［即0.4、0.8、1.2 g/(kg·d)］，成人的推薦劑量為每日2.4 g，用蒸餾水配制成相應(yīng)的混懸液備用。

1.2 動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量(22 ±2)g;SD大鼠，雌、雄各半，體質(zhì)量(180 ±20)g，由青海省地方所提供，動(dòng)物購得后于實(shí)驗(yàn)前一周適應(yīng)環(huán)境，自由飲食，自然光照，室溫控制在(20 ±2)℃。

1.3 試劑和儀器 YLS-6B 智能熱板儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司);PV-200 足趾容積測(cè)量?jī)x(成都泰盟科技有限公司);DU800 分光光度計(jì)(beckman，美國(guó));伊文思藍(lán)(E8010，Sigma E2129，)

2 方法

2.1 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)［6］取雌性昆明種小鼠放在預(yù)熱至55 ℃金屬板上，恒溫(變化在±0.5 ℃內(nèi))，以小鼠舔后足反應(yīng)潛伏期為痛閾指標(biāo)，篩選5 ～30 s 小鼠40 只。動(dòng)物隨機(jī)分為模型對(duì)照組，十五味乳鵬散低、中、高劑量組。每組10 只，各組小鼠給藥前測(cè)其基礎(chǔ)痛閾值。灌胃給藥，每天1 次，連續(xù)7 d，十五味乳鵬散組灌胃低、中、高劑量的十五味乳鵬散混懸液，模型對(duì)照組給予相應(yīng)體積的生理鹽水，末次給藥后分別測(cè)定給藥后30、60、120、180、240 min的痛閾值。

2.2 小鼠醋酸扭體法［7-8］取40 只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為4 組，每組10 只。給藥劑量與方式同“2.1”項(xiàng)，于末次給藥1 h 后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/鼠，觀察并記錄注射后15 min 內(nèi)小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，以小鼠腹部?jī)?nèi)凹、后肢伸張、臀部高起為扭體特征作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，記錄扭體反應(yīng)次數(shù)。

2.3 醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加［8］小鼠50 只，雌雄各半，分為正常對(duì)照組、模型組、十五味乳鵬散低、中、高劑量組，每組10 只。正常對(duì)照組、模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水，其余各組給藥劑量與方式同“2.1”項(xiàng)。末次給藥后1 h，除正常對(duì)照組外，其余各組尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)溶液0.1 mL/10 g，隨即腹腔注射0.6% 醋酸0.1 mL/10 g。20 min 后各組小鼠脫頸椎處死，腹腔注射5 mL 生理鹽水，輕揉腹部，剪開腹腔，用吸管吸出洗滌液，3 000 r/min離心15 min，取上清液于590 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度A 值。

2.4 蛋清致大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)［9］選體質(zhì)量180 ～220 g的SD 大鼠40 只，雌、雄各半，隨機(jī)分成4 組:模型組，十五味乳鵬散低、中、高劑量組，每組10 只。給藥劑量與方式同“2.1”項(xiàng)。連續(xù)灌胃7 d，于末次給藥后測(cè)量未致炎前的各大鼠右后足趾容積，并于給藥后1 h，每只大鼠右后足趾皮下注射10%蛋清生理鹽水0.1 mL 致炎，測(cè)量注射蛋清后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 的大鼠右后足趾腫脹容積。

3 結(jié)果

3.1 十五味乳鵬散對(duì)小鼠熱板致痛的影響 與模型對(duì)照組比較，十五味乳鵬散高劑量組在給藥后30 min、1 h、2 h、3 h 期間能延長(zhǎng)小鼠熱痛反應(yīng)潛伏期，提高痛閾值，并且在給藥后1 h 更顯著;中劑量組在30 min、1 h 時(shí)能提高痛閾值(P ＜0.05 或P ＜0.01)，而低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。結(jié)果詳見表1。

表1 藏藥十五味乳鵬散對(duì)小鼠熱板痛域的影響(n=10，±s)

表1 藏藥十五味乳鵬散對(duì)小鼠熱板痛域的影響(n=10，±s)

注:與模型對(duì)照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)給藥前熱痛域值/s給藥后不同時(shí)間熱痛域值/s 30 min 1 h 2 h 3 h 4 h模型對(duì)照組 —— 7.46 ±1.37 6.52 ±1.68 5.39 ±1.8 7.02 ±2.59 6.98±2.73 8.96 ±3.03低劑量組 0.4 6.30 ±1.02 6.89 ±1.86 6.98 ±2.03 6.27 ±1.94 8.63 ±2.41 8.25 ±2.59中劑量組 0.8 6.47 ±1.02 8.93 ±2.75# 8.0 ±2.5# 7.2 ±1.66 8.87 ±2.57 9.17 ±2.88高劑量組 1.2 7.06 ±1.62 8.1 ±1.84# 10.46 ± 3.35## 9.3 2 ± 2.87# 10.27 ±3.67#9.28 ±2.3

3.2 十五味乳鵬散對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響 與模型對(duì)照組比較十五味乳硼散各劑量組均能減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)(P ＜0.01)，具有鎮(zhèn)痛效應(yīng);但藥物各劑量組對(duì)小鼠扭體的潛伏期并無顯著的影響(P ＞0.05)，顯示十五味乳硼散對(duì)化學(xué)刺激引起的疼痛有明顯的抑制作用，結(jié)果詳見表2。

表2 藏藥十五味乳鵬散對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(n=10，±s)

表2 藏藥十五味乳鵬散對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(n=10，±s)

注:與模型對(duì)照組比較，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1) 潛伏期/min 扭體反應(yīng)次數(shù)/15 min模型對(duì)照組 ——4.26 ±2.92 60.1 ±4.5低劑量組 0.4 4.76 ±1.92 28.8 ±8.35##中劑量組 0.8 6.47 ±2.93 32.3 ±14.1##高劑量組 1.2 4.59 ±0.99 43 ±8.89##

3.3 十五味乳鵬散對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響 與模型組相比，十五味乳鵬散中、高劑量組均能減少小鼠腹腔中伊文思藍(lán)的吸光度(P ＜0.01 或P ＜0.05)，低劑量組有降低的趨勢(shì)，但無顯著性意義(P ＞0.05)，結(jié)果詳見表3。

表3 藏藥十五味乳鵬散對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響(n=10，±s)

表3 藏藥十五味乳鵬散對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響(n=10，±s)

注:與正常對(duì)照組比較，＊＊P ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)吸光度正常對(duì)照組 ——0.02 ±0.01模型對(duì)照組 —— 0.5 ±0.16＊＊低劑量組 0.4 0.45 ±0.20中劑量組 0.8 0.2 ±0.13##高劑量組 1.2 0.33 ±0.19#

3.4 十五味乳鵬散對(duì)蛋清致大鼠足趾腫脹的影響 蛋清致炎后各組大鼠足跖開始出現(xiàn)紅腫現(xiàn)象，并且于30 min 至2 h間腫脹達(dá)到了高峰，與模型對(duì)照組比較十五味乳鵬散高劑量組在致炎后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 均抑制了大鼠足趾的腫脹(P ＜0.01 或P ＜0.05)，并且在1 h 更顯著(P ＜0.01)，中劑量組在4 h、5 h，低劑量組在4 h 時(shí)能顯著的抑制大鼠的足腫脹(P ＜0.01 或P ＜0.05)，其余各時(shí)間點(diǎn)雖然可以看到抑制腫脹的趨勢(shì)，但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。結(jié)果詳見表4。

表4 藏藥十五味乳鵬散對(duì)雞蛋清致大鼠足趾腫脹的影響(n=10，±s)

表4 藏藥十五味乳鵬散對(duì)雞蛋清致大鼠足趾腫脹的影響(n=10，±s)

注:與模型對(duì)照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)致炎前足趾容積/mL致炎后不同時(shí)間足跖腫脹度/mL 30 min 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h模型對(duì)照組 —— 1.26 ±0.16 0.95 ±0.31 0.93 ± 0.19 0.9 ± 0.19 0.82± 0.16 0.86 ±0.15 0.85 ±0.19低劑量組 0.4 1.45 ±0.10 0.85 ±0.28 0.83 ± 0.23 0.78 ±0.20 0.65 ± 0.22 0.61 ±0.22# 0.57 ±0.22中劑量組 0.8 1.45 ±0.11 0.87 ±0.17 0.81 ± 0.15 0.71 ±0.19 0.71 ± 0.22 0.54 ±0.17## 0.45 ±0.13##高劑量組 1.2 1.36 ±0.16 0.65 ±0.21# 0.65 ±0.17##0.68 ± 0.13# 0.67 ± 0.11# 0.62 ±0.19# 0.43 ±0.25##

4 結(jié)論

藏醫(yī)《四部醫(yī)典》記載痛風(fēng)病是因血液紊亂、食行失當(dāng)、坐地圖逸、勞累損傷致使氣血紊亂造成的，臨床治療要求達(dá)到盡快終止急性關(guān)節(jié)炎發(fā)作;防治關(guān)節(jié)炎復(fù)發(fā);糾正高尿酸血癥;防止尿酸鹽沉積于腎臟、關(guān)節(jié)等處引起的并發(fā)癥［10］。因此抗炎、鎮(zhèn)痛是研究十五味乳鵬散痛風(fēng)治療學(xué)的主要內(nèi)容之一。在鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中，熱板試驗(yàn)通常被認(rèn)為是用于篩選有選擇性的作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)痛化合物，如嗎啡;醋酸扭體試驗(yàn)被用于外周鎮(zhèn)痛物的評(píng)估［11-12］，本研究發(fā)現(xiàn)藏藥十五味乳鵬散各劑量組均明顯減少醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，中、高劑量組還延長(zhǎng)了小鼠的熱痛閾值;所以結(jié)果提示十五味乳鵬散具有鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛部位主要可能是通過作用于外周而產(chǎn)生的，但也有中樞鎮(zhèn)痛機(jī)制的參與。

炎癥反應(yīng)的急性時(shí)相是以局部血管擴(kuò)張、毛細(xì)血管通透性增加為主要特征。本研究觀察到中、高劑量組的十五味乳鵬散降低了醋酸致小鼠毛細(xì)血管的通透性，并且抑制了蛋清致大鼠的足趾腫脹，表明十五味乳鵬散對(duì)急性炎癥早期的毛細(xì)血管擴(kuò)張、滲出水腫有一定的抑制作用。雖然在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上初步證實(shí)了藏藥十五味乳鵬散有鎮(zhèn)痛、抗炎的作用，但其鎮(zhèn)痛、抗炎的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究證實(shí)。

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